陈宗艳
- 作品数：120 被引量：254H指数：8
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生理学更多>>
- 实时荧光定量PCR检测鸭乙型肝炎病毒方法的建立及应用
- 根据鸭乙型肝炎病毒(duck hepatitis B virus,DHBV)P基因上的保守序列设计并合成引物和荧光标记探针,建立了荧光定量PCR检测方法。本实验建立的标准曲线循环阈值(Ct值)与模板浓度具有良好的线性关系...
- 陈宗艳程安春汪铭书徐大为郭宇飞陈孝跃
- 关键词：鸭乙型肝炎病毒荧光定量PCR拉米夫定
- 文献传递
- RK-13细胞HBB基因敲除稳定株的构建方法
- 本发明公开了一种RK‑13细胞HBB基因敲除稳定株的构建方法；所述方法包括如下步骤：设计一对互补的靶向家兔HBB基因第二个外显子的sgRNA，以pSpCas9(BB)‑2A‑Puro(PX459)V2.0质粒为载体,构建...
- 刘光清谭永贵刘腾朱杰陈宗艳李传锋
- 文献传递
- 中国部分地区猪流感病毒的遗传演化分析
- 猪的呼吸道上皮细胞具有禽流感病毒和人流感病毒受体,具有感染禽流感和人流感病毒的能力,被认为是新型流感病毒产生的"混合器"和古老流感病毒长期在猪体内存在的"贮存器"。近年来,为了更好防控猪流感,我们开展了中国部分地区的猪流...
- 于海周艳君李国新闫丽萍陈宗艳童光志
- 文献传递
- 非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：3
- 2022年
- 本研究参考非洲猪瘟病毒(ASFV)国内分离株SY18株的CP204L基因(编码p30蛋白),进行人源偏嗜性密码子优化,并分别构建表达载体pET-32a-p30和pCMV-2×Flag-p30。利用原核表达系统获得pET-32a-p30重组蛋白,并以该融合蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠制备了抗ASFV p30蛋白的单克隆抗体。SDS-PAGE分析发现,在16℃、1 mmol/L IPTG条件下诱导6 h后,该p30重组蛋白主要表达在包涵体中且表达量中等,蛋白分子量约为48 kDa。通过酶联免疫吸附实验(ELISA)、蛋白印迹法(Western blot)和间接免疫荧光法(IFA)检测获得的单克隆抗体3C2和4A3。结果显示,两株单克隆抗体均具有良好的免疫特性,且3C2株具有Western blot效价。本研究中p30原核重组蛋白及其单克隆抗体的制备为进一步探究p30磷酸化修饰及功能解析奠定基础,并为ASFV特异性诊断技术提供了必要的生物材料。
- 吕璐吕璐于婉琪谢振华张萌刘英楠叶建强叶建强秦爱建陈宗艳陈宗艳
- 关键词：非洲猪瘟病毒单克隆抗体免疫特性
- 甲型鸭肝炎病毒2A蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备被引量：1
- 2014年
- 采用RT-PCR方法从甲型鸭肝炎病毒ZJ-V株的RNA模板中扩增出2A基因,将其克隆到表达载体pET-30(+)中,经酶切和测序鉴定后转化表达宿主菌BL21(DE3)细胞中,以IPTG诱导表达His-DHAV-2A融合蛋白.结果表明:目的蛋白在1mmol/L IPTG诱导4h的情况下以可溶性形式表达.表达产物经Ni柱纯化后获得了高纯度的融合蛋白.以纯化后的His-DHAV-2A融合蛋白为抗原免疫白兔制备多抗,Western-blot试验表明制备的多抗可与目的蛋白发生特异性反应.以上结果说明,DHAV的2A蛋白在大肠杆菌中成功表达,且制备的多抗血清可用于2A蛋白的表达检测.
- 胡文孟春春李传峰陈宗艳梁瑞英李宁黄云秀吴润刘光清
- 关键词：原核表达蛋白纯化多克隆抗体
- 中国部分地区猪流感病毒的遗传演化研究
- 猪的呼吸道上皮细胞具有禽流感病毒和人流感病毒受体,具有感染禽流感和人流感病毒的能力,被认为是新型流感病毒产生的"混合器"和古老流感病毒长期在猪体内存在的"贮存器"。近年来,为了更好防控猪流感,我们开展了中国部分地区的猪流...
- 于海周艳君李国新闫丽萍陈宗艳童光志
- 文献传递
- J亚群禽白血病毒gp85基因表达及初步应用被引量：1
- 2011年
- J亚群禽白血病毒(Avian leukosis virus subgroup J,ALV-J)的囊膜糖蛋白GP85是亚群特异性抗原。将ALV-J的gp85基因克隆至原核表达载体pET-30a(+)EcoRⅠ和SalⅠ两个酶切位点之间,经IPTG诱导在大肠杆菌中以His-Tag融合蛋白的形式获得了高效表达,Western blot显示该表达产物具有生物学活性。GP85蛋白经纯化、复性后免疫家兔,制备了抗ALV-J GP85的多克隆抗体。以纯化的蛋白为抗原包被ELISA检测板,对疑似血清样本进行了实验室检测,检出率较高。本研究为ALV-J的诊断和流行病学调查奠定了基础。
- 张伟伟杨宗伟陈宗艳王超李传峰刘光清
- 关键词：囊膜糖蛋白ELISA
- 绵羊BST-2B基因的原核表达及多克隆抗体的制备
- 2017年
- 为了表达含有绵羊BST-2B(o BST-2B)基因的重组蛋白,用RT-PCR方法扩增绵羊肺细胞的o BST-2B基因,并将其克隆至原核表达载体p GEX-4T-1中,构建重组表达质粒p GEX-4T-o BST-2B。将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达重组o BST-2B蛋白。将表达产物纯化后免疫BALB/c小鼠,制备抗o BST-2B的多克隆抗体。蛋白免疫印迹分析和间接免疫荧光试验检测结果显示,该抗体具有较好的反应原性。本试验成功制备的o BST-2B蛋白及多克隆抗体,为研究o BST-2B蛋白的生物学功能及羊传染病的致病机制提供了良好的基础材料。
- 刘腾张莉谭永贵郭慧敏朱杰缪秋红李传峰陈宗艳刘光清
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- Ⅰ型鸭肝炎病毒VP3基因的克隆及原核表达被引量：3
- 2013年
- 采用RT-PCR方法从Ⅰ型鸭肝炎病毒ZJ-Ⅴ株中扩增VP3基因,运用DNAStar软件对VP3序列与参考序列的同源性进行比对,并进行了遗传进化分析,然后将VP3基因克隆至原核表达载体pET-32a(+),获得重组表达质粒pET-VP3,转化宿主菌E.coli Rosetta(DE3),经1mmol/L IPTG诱导表达后用SDS-PAGE和Western blotting方法对表达产物进行检测。结果显示,成功克隆了DHV-ⅠVP3基因,片段大小为711bp。序列分析结果表明,ZJ-Ⅴ株VP3与其他A型DHV分离株的同源性较高,为95.1%～97.7%;而与C型DHV分离株的同源性较低,为71.3%～72.6%;与B型DHV分离株的VP3基因同源性最差,为70.3%～70.5%。SDS-PAGE和Western blotting检测结果显示,重组VP3基因在大肠杆菌细胞(DE3)中获得了良好表达,其分子质量约为47ku;与抗Ⅰ型鸭肝炎病毒ZJ-Ⅴ株阳性血清发生特异性免疫反应,表明重组VP3蛋白具有良好免疫原性。
- 李露程英杰李传峰陈宗艳孟春春何后军刘光清
- 关键词：VP3基因原核表达
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白Nsp4的表达及其抗血清的制备被引量：1
- 2009年
- 根据GenBank中已发表的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Highly Pathogenic Porcine Reproductiveand Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)HuN4株全基因组序列,设计合成一对引物,对PRRSV HuN4株非结构蛋白Nsp4(Nonstructural protein4基因进行RT-PCR扩增,克隆到原核表达载体pET30a(+)中,构建重组表达载体pET30a-Nsp4,经酶切测序鉴定。将pET30a-Nsp4转化表达菌株BL21(DE3),诱导可表达分子量约为27kDa重组蛋白。Western blot显示其具有较好的反应原性,经镍离子亲和层析(Ni-NTA)纯化获得了高纯度的可溶性重组蛋白。将纯化的Nsp4蛋白免疫BALB/c小鼠,抗血清ELISA效价达1∶16 000,Western blot和IFA表明,所制备的抗血清能够特异性识别PRRSV自身表达的Nsp4蛋白。本研究获得了可溶性的PRRSV Nsp4蛋白,制备了Nsp4特异性多抗血清,为进一步研究Nsp4蛋白的亚细胞定位及功能奠定了基础。
- 许傲天周艳君李国新于海闫丽萍陈宗艳张善瑞王礞礞姜一峰王亚欣田志军童光志
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP4原核表达
