龚福生
- 作品数：69 被引量：151H指数：6
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- GM-CSF/IL1-5融合基因原核表达载体的构建及表达
- 2006年
- 目的构建原核表达质粒pPROEXTMHTbGMCSF/IL15并在大肠杆菌DH5α中表达,以期获得具有GMCSF/IL15双重活性的融合蛋白。方法利用分子生物工程技术,构建重组原核表达载体pPROEXTMHTbGM15,并转化进大肠杆菌DH5αIPTG诱导表达4h后,经SDSPAGE、免疫印迹证实为GM15融合蛋白。结果重组载体经转化大肠杆菌DH5α后,诱导表达出相对分子质量约为33kD左右的融合蛋白。结论构建了pPROEXTMHTbGMCSF/IL15融合基因表达系统,并诱导表达出GM15融合蛋白。
- 谢云青郑天荣郑秋红汪相如龚福生陈蓉明
- 关键词：白细胞介素15重组融合蛋白质类
- 原发性胃癌p16^(INK4a)基因缺失和突变的研究
- 2006年
- 目的探讨p16INK4a基因缺失和突变在胃癌发病机制中所起的作用。方法采用多重PCR、PCR-SSCP和DNA测序对62例胃癌、癌旁组织及10例正常胃黏膜标本中p16INK4a基因纯合性缺失和突变进行检测。结果62例胃癌中发现p16INK4a基因第一外显子和第三外显子各有2例纯合性缺失,缺失率6.5%(4/62),PCR-SS-CP和DNA测序发现1例p16INK4a基因第一内含子区碱基插入,突变率1.6%(1/62),癌旁和正常胃黏膜均未发现缺失和突变。结论在原发性胃癌中,p16INK4a基因纯合性缺失率很低、突变罕见。
- 陈刚郑秋红龚福生胡丹郑天荣
- 关键词：P16^INK4A基因纯合性缺失突变
- RNA干扰技术抑制乳腺癌SKBr3细胞HER2的表达被引量：2
- 2007年
- 目的构建含表皮生长因子受体2基因(HER2)的短发夹状双链RNA(shRNA)重组质粒,体外观察对人乳腺癌细胞SKBr3的HER2 mRNA及蛋白表达的影响。方法利用分子克隆技术,将含HER2的双链DNA,与经双酶切后的载体pSilencer连接,构建pSilencer-HER2重组质粒,在脂质体的介导下转染高表达HER2的乳腺癌细胞系SKBr3。RT-PCR分析HER2 mRNA的表达,Western blot检测蛋白的表达,MTT法测定细胞增殖情况。结果酶切鉴定证实重组质粒构建成功,转染后能明显抑制HER2 mRNA及蛋白的表达,抑制细胞的增殖。结论构建的pSilencer-HER2重组质粒能有效地降低人乳腺癌细胞HER2的表达,抑制细胞的增殖,为HER2高表达预后不良的乳腺癌基因治疗提供新策略。
- 郑秋红龚福生谢云青陈蓉明汪相如
- 关键词：RNA干扰受体表皮生长因子乳腺肿瘤肿瘤细胞基因表达
- 树突状细胞对自体CIK细胞体外杀伤肺腺癌细胞影响的研究被引量：14
- 2005年
- 目的:研究人外周血树突细胞(dendriticcell,DC)对自体CIK细胞体外杀伤肺腺癌细胞的影响,以期获得具有抗原特异性杀伤功能的细胞毒活性细胞,并分别对CIK、LAK和CD3AK的杀伤效果进行比较。方法:采用某一肺腺癌肿瘤患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMNC),经体外诱导分别扩增出CIK、LAK、CD3AK和DC细胞,再将靶细胞抗原孵育过的DC同三种细胞共同培养,通过镜下动态观察CIK联合DC对癌性胸腔积液中肿瘤细胞的杀伤活性,并利用MTT法检测CIK联合DC体外杀伤人肺腺癌细胞系(SPC-A1)的活性,同时比较CIK、LAK和CD3AK三种细胞的体外杀瘤活性。结果:CIK-A-DC的杀伤活性最强为92.3%,明显高于单纯CIK的59.7%和DC-CIK的79.8%,(P值分别为0.025和0.042),提示CIK-A-DC细胞对肿瘤杀伤的特异性。而DC-CIK的杀伤活性为79.8%,也高于单纯CIK对照组59.7%,P=0.034,说明DC具有明显增强CIK细胞杀瘤活性的功能。同时,不论从单纯CIK、LAK、CD3AK细胞毒活性,或是从三种细胞联合DC的细胞毒活性比较,CIK细胞较后两种细胞都具有更强的杀伤活性,P值分别为0.038和0.022。联合DC的自体CIK细胞体外杀瘤活性显著增强,CIK细胞的杀伤活性显著高于LAK、CD3AK两种细胞。结论:DC可明显提高自体CIK细胞的体外杀瘤活性。
- 郑秋红郑天荣谢云青陈蓉明龚福生汪相如
- 关键词：杀伤细胞淋巴因子激活
- 环境和遗传易感在长乐市胃癌发生过程中
- 郑天荣郑秋红龚福生陈增春陈建顺谢云青
- 该项目采用分子流行病学方法，研究地理、年龄、幽门螺杆菌感染等环境因素和遗传易感在胃癌发生过程中的作用，以阐明环境--基因的相互作用与胃癌发生的关系。该研究阐明长乐市人群的一些主要致癌物代谢酶基因多型性与胃癌易感性的关系。...
- 关键词：
- 关键词：遗传易感性胃癌
- 小RNA干扰STAT3基因表达对胃癌细胞增殖和侵袭的影响被引量：2
- 2011年
- 目的:构建针对STAT3基因的短发夹状小干扰RNA重组质粒,探讨应用RNAi技术沉默STAT3基因对胃癌细胞BGC-823增殖和侵袭的影响。方法:应用DNA重组技术,构建针对STAT3基因的干扰RNA重组质粒(pSilencer-STAT3),经脂质体转染BGC-823胃癌细胞,逆转录聚合酶链反应和Western blot免疫印迹法检测STAT3的表达水平;MTT法检测RNA干扰后细胞增殖情况;Transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化。结果:酶切鉴定和测序证实了重组质粒构建成功。与未转染和转染阴性对照质粒组相比,pSilencer-STAT 3转染组胃癌细胞BGC-823中STAT 3mRNA和STAT 3蛋白的表达水平均明显降低,F=39.424,P=0.000和F=31.911,P=0.001。pSilencer-STAT3转染组胃癌细胞BGC-823的生长受到明显抑制,抑制率达47.3%,与阴性对照质粒组的8.1%抑制率相比,差异具有统计学意义,F=40.835,P=0.000。侵袭实验显示,pSilencer-STAT3转染组胃癌细胞BGC-823穿膜细胞数,显著低于阴性对照质粒组和未转染组(75±10,111±10,104±9,F=11.311,P=0.009)。结论:构建的pSilenc-er-STAT3重组质粒能有效地抑制STAT3基因在人胃癌细胞BGC-823中的表达,抑制细胞的增殖和侵袭。
- 龚福生郑秋红汪相如许扬梅
- 关键词：细胞培养RNA干扰基因表达
- 乳腺癌循环肿瘤细胞的流式细胞仪定量检测
- 目的：血行转移是乳腺癌转移复发的主要方式之一.如果能够尽早地诊断乳腺癌的微转移,制定恰当的治疗方案,就可以提高患者的存活率.因此检测外周血中是否存在癌细胞可能是判断乳腺患者转移和预后的重要指标.本研究旨在建立应用超高速流...
- 郑秋红龚福生陈克秀刘健
- 人癌胚抗原cDNA的克隆与真核表达质粒的构建
- 2005年
- [目的]将人癌胚抗原(CEA)cDNA克隆到真核表达载体pIRES中,构建真核表达质粒pIRES鄄CEA,以期在哺乳动物细胞中高效、稳定表达,并为下一步连接上热休克蛋白基因(HSP70)从而构建CEA鄄HSP融合核酸疫苗作准备。[方法]从CEA阳性的大肠癌组织中提取总RNA,经RT鄄PCR方法获取人癌胚抗原cDNA,用内切酶XbaⅠ和NotⅠ分别酶切质粒pIRES和CEAcDNA,通过T4连接酶将带有黏性末端的CEA鄄cDNA插入到pIRES质粒的XbaⅠ和NotⅠ酶切位点上。[结果]通过PCR扩增获得了CEA基因,并将CEA鄄cDNA正向克隆到载体pIRES中。[结论]已经成功构建了真核表达质粒pIRES鄄CEA,并为下一步连接上热休克蛋白基因(HSP70)从而构建CEA鄄HSP融合核酸疫苗作准备。
- 陈蓉明应敏刚郑秋红蔡述华龚福生
- 关键词：癌胚抗原基因克隆核酸疫苗
- 应用CRISPR/Cas9系统敲除PD-1基因对人T淋巴细胞增殖及分泌IFN-γ的影响被引量：2
- 2019年
- 目的:探讨应用CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除PD-1基因对人T细胞增殖及分泌IFN-γ的影响。方法:设计靶向PD-1基因的sgRNA序列,应用T7 RNA聚合酶体外分别合成PD-1-sgRNA和Cas9mRNA。利用核转染技术将PD-1-sgRNA和Cas9 mRNA混合物转入激活的人T淋巴细胞,测序确认基因敲除的效率。应用流式细胞术分析基因敲除后T淋巴细胞表型和PD-1的表达情况,锥虫蓝活细胞计数法检测T细胞增殖活力,ELISA检测T细胞分泌IFN-γ情况。结果:体外成功合成PD-1-sgRNA和Cas9 mRNA。将PD-1-sgRNA和Cas9 m RNA核转染T淋巴细胞,测序证实PD-1基因序列编辑效率为58.3%。CRISPR/Cas9系统成功下调T淋巴细胞表面PD-1分子的表达水平[(9.6±1.85)%vs(16.2±2.05)%,P<0.05],PD-1基因敲除不影响T细胞的增殖活力和细胞表型(P>0.05);但PD-1-sgRNA组的效应T细胞分泌IFN-γ水平显著升高(P<0.01)。结论:CRISPR/Cas9基因编辑系统成功敲除人T淋巴细胞PD-1基因,降低PD-1分子表达可阻断PD-1/PD-L1负性调控从而增强T细胞的免疫活性,且促进效应T细胞分泌IFN-γ。
- 龚福生许扬梅刘施佳黄丽洁郑秋红
- 关键词：T淋巴细胞PD-1基因敲除IFN-Γ
- HSP70-TKD诱导的NK细胞对胰腺癌细胞裸鼠移植瘤的抑制作用被引量：1
- 2015年
- 目的:研究HSP70-TKD诱导的自然杀伤细胞(NK)对胰腺癌原位移植模型的体内抗肿瘤作用。方法:用干细胞培养基富集人外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)至第10天时,加入2μg/ml TKD,4 d后用流式细胞仪检测诱导后NK细胞表面杀伤性受体CD94/NKG2C的表达情况,MTT法测定诱导后NK细胞体外对细胞表面HSP70表达阳性的胰腺癌Colo357细胞的杀伤活性。在BALB/c裸鼠胰腺原位接种胰腺癌Colo357细胞至第15天时,尾静脉注射HSP70-TKD诱导的NK细胞,观察NK细胞对荷瘤鼠的抑瘤作用。免疫组化染色检测NK细胞在胰腺癌组织的浸润情况。结果:NK细胞在干细胞培养基中可大量增殖,14 d时平均细胞纯度为(87.50±1.35)%。HSP70-TKD诱导的NK细胞其细胞表面CD94/NKG2C的表达明显增加,其平均荧光强度为(220.56±6.82),高于未诱导组的(68.72±1.85)。HSP70-TKD诱导的NK细胞对胰腺癌细胞Colo357有更强的杀伤活性,当效靶比为40∶1时杀伤率高达(68.72±2.55)%。体内实验表明,TKD诱导的NK细胞能显著抑制胰腺癌的生长,其抑瘤率可达(61.3±1.5)%,与对照组差异显著(P<0.01)。免疫组化染色表明IL-2和TKD同时诱导的NK细胞更易向胰腺癌组织浸润。结论:HSP70-TKD诱导的NK细胞是一种新型、高效的免疫活性细胞,具有较强的体外抗细胞表面HSP70表达阳性的胰腺癌细胞活性,具有明显的抑制胰腺肿瘤生长的作用。
- 陈蓉明龚福生郑秋红谢云青应敏刚
- 关键词：胰腺肿瘤NK细胞CD94抗肿瘤
