谢云青
- 作品数：64 被引量：168H指数：6
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- 人Egr-1启动子调控的自杀基因真核表达载体的构建及其在鼻咽癌细胞株中的放射诱导表达
- 2009年
- [目的]构建由人Egr-1放射诱导性启动子调控的自杀基因靶向性真核表达载体,并转染人鼻咽癌细胞株CNE,比较射线诱导前后自杀基因在鼻咽癌细胞中的表达情况。[方法]根据Genebank数据库提供的人Egr-1启动子基因序列,设计一对引物克隆人Egr-1启动子,采用PCR、酶切、连接等分子生物学技术,构建pcDNA3.1(+)-Egr-1-CD重组质粒表达载体,并利用脂质体转染方法转染人CNE细胞株,经G418筛选后获得阳性细胞克隆。RT-PCR分析鉴定0、5、10、15、20Gy放射剂量进行6MVX线照射对CD基因表达的影响。[结果]经PCR、酶切、测序等证实了pcDNA3.1(+)-Egr-1-CD重组靶向性质粒表达载体构建成功,G418筛选所得到的CNE细胞阳性克隆经不同放射剂量的诱导后,RT-PCR结果显示体外放射线照射可显著提高CNE细胞中CDmRNA的表达水平,在10Gy及15Gy组CDmRNA的表达水平明显增高,尤以15Gy组CDmRNA的表达水平最高,在20Gy组CDmRNA的表达水平反而下降。[结论]pcDNA3.1(+)-Egr-1-CD重组质粒表达载体构建成功,并成功转染人鼻咽癌细胞株,建立了基因表达与放射的剂量效应关系,为后续的临床应用研究奠定基础。
- 吴君心谢云青邱素芳郑秋红潘建基
- 关键词：EGR-1启动子自杀基因真核表达载体
- GM-CSF基因修饰、肺腺癌细胞mRNA负载的树突细胞瘤苗抗肺癌免疫的实验研究
- 目的：分离培养人外周血树突细胞(dendriticcell，DC)，并利用人巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophagecolony．stimulatingfactor，GM-CSF)基因及人肺腺癌...
- 谢云青
- 关键词：肺腺癌细胞GM-CSF基因抗肿瘤免疫基因修饰
- 文献传递
- 长期传代人脐带间充质干细胞的特性及功能被引量：1
- 2023年
- 目的:探讨传至10代(P10)的人脐带来源间充质干细胞(P10-hUC-MSC)的生物学特性及功能。方法:人脐带来源于厦门弘爱医院(伦理批号:HAXM-MEC-20201012-037-01),分离、收集、培养hUC-MSC并传代培养,收集P1-、P10-hUC-MSC,FCM检测hUC-MSC表型,细胞衰老β-半乳糖苷酶染色法及FCM法检测终末期细胞衰老与凋亡情况,秋水仙碱处理检测细胞染色体稳定性,体外成脂、成骨诱导实验检测其多向分化能力,以不同比例与外周血单个核细胞(PBMC)混合培养后FCM检测T细胞亚群及表型变化。结果:成功分离和培养的P10-hUC-MSC与P1-hUC-MSC的表型相似,表现为CD45、CD34、HLA-DR表达阴性而CD105、CD90阳性率≥95%。终末期的P1-hUC-MSC和P10-hUC-MSC均表现出β-半乳糖苷酶表达阳性和早期凋亡特征,细胞染色体核型一致且保持稳定,未发生转化现象。P1-、P10-hUC-MSC在体外都可被诱导分化成脂肪、成骨细胞。P10-hUC-MSC与PBMC以1∶1混合培养7 d后,可显著上调CD4^(+)/CD8^(+)T细胞比值、CD4^(+)Treg细胞比例和PD-1表达(均P<0.01)。结论:长期传代的P10-hUC-MSC仍然保持其生物学特性和安全性,并具备多向分化能力及免疫调节能力,这为最大限度发挥hUC-MSC的临床放疗损伤修复与预防作用提供了前期实验依据和指导。
- 黄丽洁谢云青林晓为陈玮郑秋红应敏刚
- 关键词：细胞特性多向分化免疫调节
- 人Egr-1启动子调控的自杀基因真核表达载体的构建及其在鼻咽癌细胞株中的放射诱导表达
- 目的构建由人 Egr-1放射诱导性启动子调控的自杀基因靶向性真核表达载体,并转染人鼻咽癌细胞株 CNE, 比较射线诱导前后自杀基因在鼻咽癌细胞中的表达的情况,为临床肿瘤放射基因治疗奠定实验基础。方法根据 Genebank...
- 吴君心谢云青邱素芳郑秋红潘建基
- 文献传递
- HSP70-TKD诱导的NK细胞对胰腺癌细胞裸鼠移植瘤的抑制作用被引量：1
- 2015年
- 目的:研究HSP70-TKD诱导的自然杀伤细胞(NK)对胰腺癌原位移植模型的体内抗肿瘤作用。方法:用干细胞培养基富集人外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)至第10天时,加入2μg/ml TKD,4 d后用流式细胞仪检测诱导后NK细胞表面杀伤性受体CD94/NKG2C的表达情况,MTT法测定诱导后NK细胞体外对细胞表面HSP70表达阳性的胰腺癌Colo357细胞的杀伤活性。在BALB/c裸鼠胰腺原位接种胰腺癌Colo357细胞至第15天时,尾静脉注射HSP70-TKD诱导的NK细胞,观察NK细胞对荷瘤鼠的抑瘤作用。免疫组化染色检测NK细胞在胰腺癌组织的浸润情况。结果:NK细胞在干细胞培养基中可大量增殖,14 d时平均细胞纯度为(87.50±1.35)%。HSP70-TKD诱导的NK细胞其细胞表面CD94/NKG2C的表达明显增加,其平均荧光强度为(220.56±6.82),高于未诱导组的(68.72±1.85)。HSP70-TKD诱导的NK细胞对胰腺癌细胞Colo357有更强的杀伤活性,当效靶比为40∶1时杀伤率高达(68.72±2.55)%。体内实验表明,TKD诱导的NK细胞能显著抑制胰腺癌的生长,其抑瘤率可达(61.3±1.5)%,与对照组差异显著(P<0.01)。免疫组化染色表明IL-2和TKD同时诱导的NK细胞更易向胰腺癌组织浸润。结论:HSP70-TKD诱导的NK细胞是一种新型、高效的免疫活性细胞,具有较强的体外抗细胞表面HSP70表达阳性的胰腺癌细胞活性,具有明显的抑制胰腺肿瘤生长的作用。
- 陈蓉明龚福生郑秋红谢云青应敏刚
- 关键词：胰腺肿瘤NK细胞CD94抗肿瘤
- RNA干扰畸胎瘤源性生长因子基因对食管鳞癌细胞生物学行为的影响被引量：3
- 2013年
- 目的 探讨RNA干扰畸胎瘤源性生长因子（PCDGF）基因对食管鳞癌细胞Eca-109的影响.方法 脂质体介导PCDGF-shRNA的表达载体转染Eca-109细胞,应用RT-PCR、Westernblot检测转染后细胞PCDGF mRNA及蛋白的表达情况,分别采用Counting Kit-8（CCK-8）试剂盒和Boyden小室法检测转染后Eca-109细胞的增殖能力和侵袭能力.结果 转染组PCDGF mRNA和蛋白表达水平均较其他组下调.转染24、48和72 h转染组细胞增殖均受到抑制,抑制率分别为20.4％、21.1％和20.9％,其细胞增殖活性较未转染组、阴性质粒组和脂质体组均明显降低（均 P＜0.05）.未转染组、阴性质粒组、脂质体组和转染组的细胞迁移数分别为118.8±12.0、100.8±9.0、114.3±4.7和 53.5±16.3,转染组与其余3组比较,差异均有统计学意义（P=0.001,P=0.002,P=0.002）.结论 RNA干扰PCDGF基因可抑制食管鳞癌细胞的体外增殖及侵袭能力,PCDGF基因可能成为基因治疗的新靶点.
- 郑庆丰柳硕岩王海燕王枫王镇陈啸风王健键应敏刚郑雄伟林贤东周智锋龚福生谢云青
- 关键词：食管肿瘤RNA干扰生物学特性
- 细胞因子核酸疫苗的抗肿瘤实验研究
- 郑天荣郑秋红谢云青龚福生陈蓉明汪相如
- 基因治疗是近几年发展的一种新的医疗模式。其治疗的疾病种类包括遗传性疾病、肿瘤、感染性疾病、心血管疾病和自身免疫性疾病等。特别是恶性肿瘤，由于发病率高，死亡率高，而目前尚缺乏十分有效的治疗方法，因此成为基因治疗的首选病种。...
- 关键词：
- 关键词：核酸疫苗细胞因子抗肿瘤
- 人IL-15/GM-CSF融合基因的克隆及序列测定被引量：1
- 2001年
- 目的]构建一种可能具有双重活性 ,增加或增强某种新生物活性的融合因子 ,为寻找新的有效的细胞因子探索新的途径。[方法]利用引物的合理设计、基因重组及PCR突变技术 ,构建由Gly_Gly_Ser连接臂连接的IL_15/GM_CSF融合基因。[结果]经Bg1Ⅱ酶切鉴定和序列测定证实 ,上述融合基因已克隆至真核表达载体pcDNA3 0。[结论]采用基因克隆及PCR突变技术 ,利用pcDNA3 0真核高效表达载体 ,构建了pcDNA3
- 郑天荣郑秋红谢云青卢林陈晖
- 关键词：白细胞介素-15融合基因
- GM-CSF/IL1-5融合基因原核表达载体的构建及表达
- 2006年
- 目的构建原核表达质粒pPROEXTMHTbGMCSF/IL15并在大肠杆菌DH5α中表达,以期获得具有GMCSF/IL15双重活性的融合蛋白。方法利用分子生物工程技术,构建重组原核表达载体pPROEXTMHTbGM15,并转化进大肠杆菌DH5αIPTG诱导表达4h后,经SDSPAGE、免疫印迹证实为GM15融合蛋白。结果重组载体经转化大肠杆菌DH5α后,诱导表达出相对分子质量约为33kD左右的融合蛋白。结论构建了pPROEXTMHTbGMCSF/IL15融合基因表达系统,并诱导表达出GM15融合蛋白。
- 谢云青郑天荣郑秋红汪相如龚福生陈蓉明
- 关键词：白细胞介素15重组融合蛋白质类
- GM-CSF重组腺病毒转染外周血树突状细胞的研究被引量：4
- 2006年
- 目的:利用GMCSF重组腺病毒转染外周血单核细胞,诱导培养树突状细胞(dendriticcell,DC),并与细胞因子培养的DC进行生物学特性的比较。方法:将GMCSF重组腺病毒转染正常人外周血单核细胞,或用重组细胞因子GMCSF,诱导培养获得DC,通过相差显微镜观察DC表面形态变化,FACS分析GMCSF基因转染对DC表面免疫分子表达的影响,Westernblot鉴定GMCSF的表达,ELISA检测IL12分泌水平,MTT法检测DC激发同种异体T细胞增殖的能力。结果:GMCSF重组腺病毒转染外周血单核细胞,能扩增获得DC,该DC高表达CD1a、HLADR、CD80和CD86等免疫分子,并表达细胞因子GMCSF和IL12,对同种异体淋巴细胞有更强的刺激活性。结论:用GMCSF重组腺病毒可从外周血单核细胞中扩增到DC,为DC瘤苗临床应用提供实验基础。
- 龚福生郑秋红郑天荣谢云青陈蓉明汪相如
- 关键词：树突状细胞粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子GM-CSF基因重组腺病毒
