万东方
- 作品数：9 被引量：7H指数：2
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- 组蛋白修饰对pre-mRNA选择性剪接影响的分子机制研究——酿酒酵母中选择性剪接模型的建立及基因表达水平的检测
- 目的:建立酿酒酵母中DYN-2基因选择性剪接的质粒模型，并用SYBR 荧光染料实时定量PCR的方法来检测DYN-2基因第二外显子的相对表达含量，研究组蛋白的修饰对pre-mRNA 选择性剪接的影响。
方法:在我们之...
- 万东方
- 关键词：组蛋白修饰选择性剪接实时定量PCR
- 提高SAF基因启动子区DNA模板聚合酶链式反应的扩增效率
- 2013年
- 背景:血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因启动子区鸟嘌呤和胞嘧啶的含量偏高,常规聚合酶链式反应扩增不易成功。目的:探索提高血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因启动子区富含鸟嘌呤和胞嘧啶的DNA模板聚合酶链式反应扩增方案及优化的扩增体系。方法:提取THP-1细胞基因组DNA作为模板,通过97℃高温预变性及最佳退火温度的探索优化聚合酶链式反应的反应条件,在聚合酶链式反应扩增体系中添加不同浓度的增强剂二甲基亚砜改善反应体系。建立提高血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因富含鸟嘌呤和胞嘧啶的启动子区聚合酶链式反应扩增效率的方法,同时评估不同浓度二甲基亚砜对聚合酶链式反应扩增结果的影响。结果与结论:97℃高温预变性使模板DNA充分解链,同时提高退火温度至60℃,有利于提高聚合酶链式反应扩增产率;反应体系中添加2%二甲基亚砜可以提高血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因启动子区聚合酶链式反应产物的特异性和产率,但是鸟嘌呤和胞嘧啶含量不同对增强剂的依赖不一样。结果证实,高温预变性和较高的退火温度可以保证充分解链的模板DNA与引物特异性结合,但是DNA模板鸟嘌呤和胞嘧啶含量的不同对增强剂二甲基亚砜的依赖有差异。
- 曹锡梅梁俊红张潮万东方蒙晓平郭大玮
- 关键词：启动子鸟嘌呤胞嘧啶聚合酶链式反应
- 苯巴比妥在中毒大鼠体内死后分布研究
- 2014年
- 目的建立大鼠苯巴比妥灌胃给药致死模型,研究苯巴比妥中毒大鼠体内的死后分布规律。方法雄性Wistar大鼠随机分LD50组和2LD50组,分别经胃匀速注入LD50(0.66 mg/kg)和2LD50(1.32 mg/kg)苯巴比妥。观察从给药到死亡时的生命体征变化及中毒症状,待呼吸和心跳全部消失时,迅速解剖动物,取心血、心、肝、脾、肺、肾、脑、胃等,酸性乙醚提取,气相色谱质谱法定性、气相色谱定量检测其中苯巴比妥浓度。结果苯巴比妥灌胃后大鼠活动明显减少,出现嗜睡症状,LD50组大鼠平均死亡时间为7.24 h±3.17 h,2LD50组大鼠平均死亡时间为1.33 h±0.25 h。苯巴比妥在组织脏器中的分布规律为,LD50组:胃(1261.34μg/g±591.83μg/g)>心(332.12μg/g±70.87μg/g)、脑(289.81μg/g±71.43μg/g)、肝(284.68μg/g±79.44μg/g)、肺(284.41μg/g±67.47μg/g)、脾(272.56μg/g±31.53μg/g)、心血(269.52μg/g±44.62μg/g)>肾(167.76μg/g±43.72μg/g);2LD50组:胃(1 649.21μg/g±1 212.82μg/g)>肝(357.83μg/g±138.67μg/g)、脑(323.19μg/g±159.92μg/g)、心(310.95μg/g±130.73μg/g)、心血(309.93μg/g±135.60μg/g)、肺(308.28μg/g±134.48μg/g)、脾(299.77μg/g±104.58μg/g)>肾(233.24μg/g±91.92μg/g)。结论苯巴比妥死后分布不均匀,含血丰富和脂质含量高的器官如肝、肺、心、脑较其他组织及血液中苯巴比妥的含量高,在疑似苯巴比妥中毒致死案件进行法医学鉴定时应全面正确的采取检材进行毒物分析。
- 王晋涛郭建军尉志文万东方王勇王玉瑾贠克明
- 关键词：法医毒物分析苯巴比妥死后分布气相色谱
- 盐酸地芬尼多在保存血液中的分解力学
- 目的：观察盐酸地芬尼多在保存血液样品中的分解动力学.方法：将盐酸地芬尼多灌胃处死犬的血液分四等份分别置于20℃、4℃、-20℃和20℃(1％NaF)条件下保存,不同时间气相色谱-质谱定性、气相色谱法定量检测其中盐酸地芬尼...
- 万东方武夺武珊珊贠克明
- 关键词：法医学鉴定盐酸地芬尼多分解动力学气相色谱-质谱法
- 文献传递
- 组蛋白修饰对pre-mRNA选择性剪接影响的分子机制研究
- 目的建立酿酒酵母中DYN-2基因选择性剪接的质粒模型,并用SYBR荧光染料实时定量PCR的方法来检测DYN-2基因第二外显子的相对表达含量,研究组蛋白的修饰对pre-mRNA选择性剪接的影响。 方法在我们之前的工作中,得...
- 万东方
- 关键词：组蛋白修饰选择性剪接实时定量PCR
- 文献传递
- 氯胺酮在大鼠体内死后的分布研究被引量：2
- 2010年
- 目的建立大鼠氯胺酮灌胃给药致死模型,研究氯胺酮中毒大鼠体内的死后分布规律。方法雄性Wistar大鼠12只,随机分为2LD50组和4LD50组,经灌胃匀速注入2LD50(17.28mg/g)和4LD50(34.55mg/g)氯胺酮。观察给药到死亡时的生命体征变化及中毒症状,待呼吸和心跳全部消失时,迅速解剖,取心血、心、肝、脾、肺、肾、脑冷冻保存,碱性乙醚提取,气相色谱质谱法定性、气相色谱定量检测其中氯胺酮含量。结果各脏器组织氯胺酮含量由多到少分别为:①2LD50组:脑>肝>肾>肺、脾、肌、心血、心;②4LD50组:脑、肾、肝>肺>心血、脾、心>肌。结论氯胺酮灌胃给药致死的动物模型,可应用于氯胺酮中毒的法医毒物动力学研究。氯胺酮死后分布不均匀,含血丰富的器官如肺、肝较其他组织和血液含量高,氯胺酮中毒致死案件中,法医学鉴定时应全面正确的采取检材进行毒物分析。
- 王大利万东方王勇尉志文王雪彦贠克明王玉瑾
- 关键词：法医毒物分析氯胺酮死后分布气相色谱
- LPS诱导下THP-1细胞基因表达内参基因的筛选
- 2013年
- 动脉粥样硬化（atherosclerosis，As）是心脑血管疾病的主要病理基础，引起AS的病因很复杂。巨噬细胞在其发生、发展过程中有重要作用^[1,2]。抑制巨噬细胞的炎症反应有可能成为预防和治疗AS的一个重要的方向。已知人单核白血病（THP-1）细胞具有单核细胞和巨噬细胞的功能和生理学特性，被广泛用于毒理学、免疫学和动脉粥样硬化等研究领域^[3]。而G-细菌细胞膜的主要成分脂多糖（1ipop01ysaccharide，LPS）可以刺激单核巨噬细胞系统发生免疫反应^[4]。明确LPS刺激THP-1细胞的基因转录水平将有助于揭示AS的病因。
- 梁俊红曹锡梅万东方张潮郭大玮
- 关键词：实时定量PCR内参基因脂多糖
- 盐酸地芬尼多在保存血液中的分解动力学研究被引量：4
- 2011年
- 目的观察盐酸地芬尼多在保存血液样品中的分解动力学。方法将盐酸地芬尼多灌胃处死犬的血液分四等份,分别置于20℃、4℃、-20℃和20℃(1%NaF)条件下保存,不同时间气相色谱-质谱定性、气相色谱法定量检测其中盐酸地芬尼多含量;WinNorLin5.2软件拟合分解动力学方程,计算分解动力学参数。结果 20℃、4℃、-20℃和20℃(1%NaF)保存30d～60d,血液中盐酸地芬尼多浓度显著下降;保存300d,血液中盐酸地芬尼多浓度显著下降为初始浓度的(58.39±1.74)%、(48.27±2.61)%、(66.12±3.92)%和(31.51±1.35)%,其分解动力学符合一级动力学过程,分解半衰期t1/2分别为462.32d、490.56d、238.21d和168.84d。结论盐酸地芬尼多在保存血液样品中可分解,保存温度和抑菌剂对其影响不大。盐酸地芬尼多中毒案件法医学鉴定中所采血样应在30d内送检和检验,否则可用其分解动力学参数推断检材采集当时的血药浓度。
- 万东方武夺武珊珊贠克明
- 关键词：盐酸地芬尼多血液分解动力学气相色谱气相色谱-质谱
- 均匀设计在候选内参基因RT-qPCR实验条件优化中的应用被引量：1
- 2012年
- 目的探讨均匀设计在候选内参基因RT-qPCR实验条件优化中的应用,有助于后期实验筛选不同状态下THP-1细胞的稳定内参基因。方法以THP-1细胞cDNA为模板,cDNA模板量、引物浓度和退火温度3个因素为影响因素,应用均匀设计3因素8水平,探索影响候选内参基因RT-qPCR的扩增条件,检测不同实验条件下的扩增效果,在最优扩增条件下建立候选内参基因定量扩增的相对标准曲线,并检测扩增效率。结果通过均匀设计,完成对cDNA模板量、引物浓度和退火温度3因素8水平的实验条件优化,建立候选内参基因RT-qPCR检测的最佳组合为cDNA模板量0.5μg、引物浓度200μmol/L、退火温度55℃。结论本实验选用均匀设计优化RT-qPCR实验条件,筛选出THP-1细胞候选内参基因RT-qPCR的最优实验条件。均匀设计适合于本实验研究多因素多水平试验条件的配比。
- 曹锡梅梁俊红张潮万东方蒙晓平郭大玮
- 关键词：均匀设计RT-QPCR内参基因THP-1
