付志浩
- 作品数：56 被引量：44H指数：4
- 供职机构：中国食品药品检定研究院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家高技术研究发展计划“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- CHO细胞DNA国家标准品的研制
- 目的：建立CHO细胞DNA残留量定量测定用国家标准品。 方法：使用QIAGEN Genomictip 500/G以及基因组DNA纯化试剂制备了CHO细胞基因组DNA作为标准品原料，通过紫外分光光度法和电泳进行纯度和含量...
- 王兰高凯范文红毕华付志浩李永红饶春明
- 关键词：国家标准品紫外分光光度法定量PCR法
- 仙台病毒载体基因治疗药物的质量控制研究及仙台病毒载体介导HSV-2靶基因的免疫学效果研究
- 仙台病毒（Sendai Virus，SeV）属于副粘病毒科呼吸道病毒属，基因组为不分节段的单负链RNA，编码NP，P，M，F，HN，L等11个蛋白。应用仙台病毒改造的F基因缺失型仙台病毒载体（Sendai virus V...
- 付志浩
- 关键词：仙台病毒基因治疗细胞库
- 文献传递
- 一种新型的抗TGF-β 单克隆抗体生物学活性的检测方法
- 本发明公开了一种新型的抗TGF‑β单克隆抗体生物学活性的检测方法，本发明构建了稳定表达SBE和Luc报告基因的4T1细胞，将该细胞用作效应细胞，用于抗TGF‑β单克隆抗体药物的生物学活性的检测，具有成本低，操作简单，试验...
- 付志浩钟欣刘春雨杨雅岚于传飞王兰王军志
- 转基因细胞测活方法测定IL-5或IL-5Rα抗体活性
- 本发明涉及转基因细胞测活方法测定IL‑5或IL‑5Rα抗体活性。所述方法包括构建得到稳定表达STAT5RE报告基因的效应细胞TF‑1‑IL‑5/STAT5RE‑luc，继而用IL‑5刺激激活报告基因表达，用IL‑5或IL...
- 王军志高凯王兰于传飞付志浩徐刚领
- 文献传递
- 抗PD-1/CTLA-4双特异性抗体的质量评价
- 2023年
- 目的 建立针对抗程序性死亡受体1 (programmed cell death protein 1,PD-1)/细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4,CTLA-4)双特异性抗体的关键质量属性质控方法。方法 采用报告基因法测定PD-1靶点的细胞生物学活性,流式细胞荧光分选法测定CTLA-4靶点的竞争结合活性;还原/非还原十二烷基硫酸钠毛细管电泳(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate,CE-SDS)和分子排阻高效液相色谱(size exclusion chromatography-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)法进行抗体分子大小变异体的控制;成像毛细管等电聚焦电泳(imaging capillary isoelectric focusing electrophoresis,iCIEF)法测定电荷异质性;运用肽图对抗PD-1/CTLA-4双特异性抗体进行鉴别;超高效液相色谱法分析糖型。结果 PD-1靶点的细胞生物学活性半数最大效应浓度(concentration for 50%of maximal effect,EC_(50))为(6.91±0.78) nmol/L,相对参比品的生物学效价为(103.50±13.08)%,RSD为12.64%;CTLA-4靶点活性的EC_(50)为(0.35±0.28) nmol/L,相对参比品的生物学效价为(99.30±9.15)%,RSD为8.32%;还原CE-SDS的轻链与重链峰面积之和百分比为(98.86±0.02)%。非还原CE-SDS主峰峰面积百分比为(93.07±0.13)%,片段百分比为(4.44±0.13)%,聚体百分比为(2.49±0.15)%。SEC-HPLC单体的峰面积百分比为(97.20±0.01)%,聚体峰面积百分比为(2.68±0.01)%。iCIEF分析的A组峰面积百分比为(38.43±0.54)%,B组峰面积百分比为(43.26±0.32)%,C组峰面积百分比为(11.31±0.14)%,D组峰面积百分比为(7.00±0.17)%。肽图检测抗PD-1/CTLA-4抗体具有相应的特征图谱,能够用于鉴别。占比最高的糖型为G0F,含量为(41.06±0.11)%;含唾液酸的糖型共3种,分别为G2F+G1F-NANA、G2F-NANA和G2F-2NANA,含量分别为(12.44±0.12)%、(12.00±0.05)%和(5.37±0.05)%,含唾液酸糖型的总体含量为(29.80±0.20)%。结论 针对抗PD-1/CTLA-4双特异性抗体的关键质量属性建立了相应的质�
- 俞小娟于传飞刘春雨武刚李萌王文波郭璐韵付志浩赵雪羽王兰
- 关键词：双特异性抗体
- 抗HER2单抗报告基因法检测抗体依赖性细胞吞噬作用生物学活性方法的建立及应用被引量：1
- 2022年
- 目的利用报告基因法建立抗人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)单抗的抗体依赖性细胞吞噬作用(antibody-dependent cell-mediated phagocytosis,ADCP)生物学活性检测方法。方法以Jurkat/NFAT/CD32a-FcεRIγ转基因细胞系作为效应细胞,SKBR3细胞系为靶细胞,通过荧光素酶检测系统建立抗HER2单抗的ADCP测活方法,并运用实验设计(design of experiment,DOE)方法进行实验优化和方法学验证。结果该方法量效关系符合四参数方程:y=(A-D)/[1+(x/C)^(B)]+D,方法优化确定量效范围为400~3.959 ng·mL(-1),靶细胞接种密度为每孔1.5×10^(4)个,效靶比为5∶1,诱导时间为7 h。该方法具有良好的专属性;不同稀释组样本百分相对效价分别为(55.04±1.35)%、(78.10±6.33)%、(102.69±5.21)%、(133.32±2.58)%和(152.87±8.11)%;回收率在101%~110%,相对标准偏差(RSD)均小于10%。结论本研究成功建立抗HER2单抗ADCP生物学活性方法,该方法专属性强、重复性好,准确性高,可作为抗HER2单抗ADCP生物学活性的评价方法。
- 刘春雨于传飞付志浩崔永霏杨雅岚王兰
- 关键词：单克隆抗体生物学活性报告基因
- 重组复制型溶瘤单纯疱疹病毒人细胞巨噬细胞集落刺激因子的质量研究被引量：5
- 2011年
- 目的研究建立重组复制型溶瘤单纯疱疹病毒人细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF,HSV1/GM-CSF)的质控方法与质量标准。方法采用限制性内切酶酶切与PCR法,对GM-CSF基因、单纯疱疹病毒载体ICP 34.5、ICP6、ICP47等改造结构进行鉴定。采用A260紫外吸收法检测病毒颗粒数;pfu法测定HSV1/GM-CSF感染活性。HSV1/GM-CSF体外感染Vero细胞后,分别测定感染上清中GM-CSF表达量以及表达产物的生物学活性;测定HSV1/GM-CSF对肿瘤细胞MCF7的体外杀伤活性;HSV1/GM-CSF分别以相同MOI感染MCF7与二倍体人胚肺成纤维细胞MRC5后,分别测定细胞裂解上清中子代病毒的感染活性,并以子代病毒的感染活性比值来分析该制品在肿瘤细胞中的增殖复制能力。采用PCR法控制野生型单纯疱疹病毒等外源因子的残留。结果对重组HSV1/GM-CSG基因组的酶切、以及对所携带的GM-CSF基因、ICP 34.5、ICP6、ICP47基因改造区的PCR鉴定结果与理论值相符。病毒载体颗粒数为4.5×1010VP.mL-1,感染活性为4.3×107pfu.mL-1。HSV1/GM-CSF以MOI 0.01感染Vero细胞72 h后,ELISA检测上清中GM-CSF表达量为228 ng.mL-1,表达产物的生物学活为4.3×103U.mL-1。该基因治疗制剂对人乳腺癌肿瘤细胞MCF7体外杀伤的MOIIC50为0.08。以相同MOI感染并经pfu法检测,HSV1/GM-CSF在人乳腺癌肿瘤细胞MCF7与人胚肺成纤维二倍体细胞MRC5的增殖比值为308。未检出野生型单纯疱疹病毒。其他各项指标均符合《人基因治疗研究和制剂质量控制技术指导原则》及2005年版《中国药典》(三部)要求。结论初步建立了HSV1/GM-CSF的质控方法和质量标准,并已用于该制品的质量控制。
- 高凯付志浩李永红王兰陶磊毕华饶春明
- PC-SOD活性测定方法的建立
- 目的建立磷脂化重组人铜锌超氧化物歧化酶（PC-SOD）的活性测定方法,并对方法进行方法学验证。方法采用经典的NBT还原法,SOD可竞争结合负氧离子,抑制显色,通过与活性标准品比较抑制显色的程度,计算样品的活性。对方法的专...
- 付志浩毕华王军志饶春明
- 关键词：SOD活性
- 文献传递
- 一种快速测定IL-2蛋白药物和抗CD25抗体药物的生物学活性方法
- 本发明公开了一种快速测定IL‑2蛋白药物和抗CD25抗体药物的生物学活性方法，所述方法通过构建慢病毒(pLV‑STAT5‑Luc‑PGK‑Zencin)转染的C8166效应细胞，经筛选后得到稳定表达STAT5报告基因的单...
- 王兰段茂芹于传飞张峰刘春雨付志浩王文波郭莎郭潇黄璟徐苗王军志
- 文献传递
- 单克隆抗体药物研发进展被引量：8
- 2021年
- 目的:对单克隆抗体药物研发进展进行综述,为行业提供参考。方法:通过查阅文献和相关数据库,对经典的单克隆抗体药物,以及由此衍生的抗体偶联药物、双特异性抗体药物的研究进行汇总、梳理。结果与结论:自1986年第一个单克隆抗体药物上市以来,全球已有超过100种单抗药物获批上市。国内已获批的进口单抗药物达42个,国产单抗药物达31个。经过30多年的研究和发展,单抗药物以其高度特异性和疗效确切的特点,在肿瘤、自身免疫、代谢、病毒感染等疾病领域显示出独特的优势和广阔的应用前景。
- 付志浩徐刚领黄璟于传飞王兰王军志
- 关键词：单克隆抗体双特异性抗体肿瘤自身免疫性疾病
