修冰水
- 作品数：123 被引量：111H指数：6
- 供职机构：军事医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家高技术研究发展计划北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 结核分枝杆菌Rv3871抗原优势肽段的克隆表达及抗原性鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的:为了提高结核病诊断试剂的特异性和敏感性,克隆表达结核分枝杆菌H37Rv株RD1区Rv3871抗原优势肽段,并应用ELISA法对其抗原性进行初步鉴定。方法:利用Biosun生物信息学软件对Rv3871抗原进行表位分析,通过PCR从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增Rv3871抗原优势肽段编码基因,在大肠杆菌HB101中进行表达,采用间接ELISA法初步评价其抗原性。结果:Rv3871-1肽段检测的敏感性为32.5%(13/40),特异性为97.2%(35/36);Rv3871-2敏感性为45%(18/40),特异性为100%;Rv3871-3敏感性为37.5%(15/40),特异性为91.6%。结论:结核分枝杆菌RD1区Rv3871抗原优势肽段Rv3871-2有较高的特异性和敏感性,有望作为候选抗原用于结核病患者的血清学检测。
- 郄霜戴振华杨锡琴修冰水陈堃郭兰芹冯晓燕张庆波张贺秋
- 关键词：结核分枝杆菌
- HCV血清分型方法的建立及其评价被引量：7
- 2012年
- 目的建立HCV血清分型方法,评价其在慢性丙型肝炎(丙肝)抗体阳性标本中的分型率及血清型与基因型的相关性。方法克隆表达HCVCore、非结构蛋白(non-structural protein,NS)4两个区段的型别特异性表位嵌合抗原,并应用酶联免疫竞争抑制法建立血清分型方法。分别应用酶联免疫吸附试验和聚合酶链反应法检测200例慢性丙肝患者的血清抗体和HCVRNA,并用建立的方法进行血清分型。同时采用该方法检测90例乙型肝炎患者、11例戊型肝炎患者和16例其他肝病患者的血清,评价其特异性。结果在200例慢性丙肝患者的血清标本中,基因1b型128例,2a型72例,型别特异性抗体阳性157例,分型率为78.50%,与基因型一致率为98.09%。而在另外117例乙型肝炎、戊型肝炎和其他肝病患者的血清中,均未检测出HCV型别特异性抗体。结论建立的HCV血清分型方法具有较高的分型率和特异性,可用于HCV抗体的血清学分型和预测干扰素疗效。
- 杨锡琴修冰水王国华陈堃宋晓国李卓严艳张贺秋彭瑞云
- 关键词：丙型肝炎病毒血清分型基因型
- 密码子优化的肺炎支原体P1蛋白在大肠杆菌中的克隆表达被引量：4
- 2012年
- 目的：获得密码子优化的肺炎支原体P1黏附蛋白优势表位抗原基因,并在大肠杆菌中表达,为临床诊断试剂和疫苗研制打下基础。方法：采用生物信息学分析肺炎支原体P1蛋白的抗原表位,筛选特异性P1蛋白优势表位区;采用大肠杆菌优势密码子,设计上述P1蛋白优势表位基因序列;采用退火PCR技术合成上述基因,并利用载体pGEX-4T-2实现P1优势表位抗原在大肠杆菌中的表达;采用ELISA法对纯化的P1抗原活性进行测定。结果：肺炎支原体P1蛋白特异性抗原表位主要位于1154~1521 aa,获得的P1优化密码子基因平行突变37个稀有密码子和2个终止密码子;在大肠杆菌中表达的GST-P1融合蛋白的相对分子质量为65.9×103,纯化后重组抗原能与肺炎支原体感染者血清发生特异性的免疫反应。结论：采用密码子优化基因合成技术实现了肺炎支原体P1优势表位抗原在大肠杆菌中的高效表达,为肺炎支原体感染的诊断试剂研究提供了重要参考。
- 张奇舒修冰水宋晓国张贺秋谢宝贵
- 关键词：肺炎支原体原核表达
- 柯萨奇病毒A组16型衣壳蛋白VP1的原核表达及初步活性测定被引量：1
- 2012年
- 目的:原核表达柯萨奇病毒A组16型(CVA16)衣壳蛋白VP1,以便于研制血清学检测试剂。方法:在基因库中钓取CVA16-VP1的全长序列,采用PCR逐步合成法合成其全长基因,测序正确后克隆到表达载体pET28a(+)中,构建重组表达质粒pET28a(+)/VP1,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化;建立捕获免疫酶联法检测IgM抗体,检测20份手足口病阳性血清和30份阴性血清,评价重组抗原的灵敏度和特异性;采用CVA16全病毒免疫的抗小鼠血清进行Western印迹。结果:重组CVA16-VP1蛋白在大肠杆菌中获得高效表达;用重组蛋白抗原检测,20份手足口病患儿阳性血清中有4份阳性,其中1份同时为肠道病毒71型(EV71)VP1阳性,30份阴性血清无反应。结论:实现了CVA16-VP1的高效表达,初步结果显示重组蛋白具有较好的抗原性,为柯萨奇病毒A组16型诊断试剂的研究奠定了基础。
- 张向颖刘芳谢立陈堃戴振华修冰水张贺秋
- 关键词：柯萨奇病毒A组16型原核表达抗原性
- 丙型肝炎病毒第一高变区抗原的筛选、克隆表达及临床初步应用
- 目的:本研究通过筛选丙型肝炎病毒第一高变区(HVR1)序列,组成多靶点抗原组合,分析HCV患者体内HVR1抗体的异质性,并对其临床初步应用进行评价.方法:采用生物信息学对现有HVR1序列筛选,并进一步克隆表达,用间接EL...
- 修冰水王国华张贺秋宋晓国陈坤阎瑾琦冯晓燕凌世淦朱翠霞
- 关键词：丙型肝炎病毒抗原克隆表达
- 文献传递
- 丙型肝炎病毒第一高变区抗原及其在制备丙型肝炎病毒检测试剂中的用途
- 本发明公开了本发明提供丙型肝炎病毒(HCV)第一高变区抗原，还公开了该抗原在制备丙型肝炎病毒检测试剂中的用途。本发明采用生物信息学技术对现有丙型肝炎病毒第一高变区序列分析，筛选出17条具有变异株特异性HVR1多靶点抗原，...
- 修冰水王国华张贺秋宋晓国凌世淦阎瑾琦李昭
- 文献传递
- 甲型H1N1流感病毒NA、PB2和PA表位抗原区段的克隆和表达被引量：3
- 2010年
- 目的:分析比对甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)、聚合酶B2(PB2)和聚合酶A(PA)抗原的序列,克隆表达保守的和变异的表位抗原区段,为免疫学诊断试剂的研究提供候选抗原。方法:采用BioSun生物学软件比较新近公布的A/H1N1流感病毒和我国猪流感病毒浙江株NA、PB2和PA抗原序列,并预测筛选NA、PB2和PA抗原表位保守区段与变异区段,采用PCR逐步合成法合成NA、PB2和PA表位抗原区段基因序列,并利用原核表达载体pBVIL1进行克隆表达。结果:筛选的保守表位抗原区段和变异表位抗原区段为NA/135～180aa、NA/310～350aa、PB2/1～80aa、PA/41～90aa、PA/231～280aa和PA/341～400aa;获得6条表位抗原区段基因序列,且6条表位抗原区段均获得了高效表达,得到纯化后的抗原。结论:获得了A/H1N1流感病毒NA、PB2和PA表位抗原区段,为进一步研制特异的甲型流感病毒快速诊断试剂提供了抗原储备。
- 宋晓国王国华朱翠侠戴振华修冰水何竞陈坤张向颖凌世淦杨静王升启张贺秋冯晓燕
- 关键词：甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶克隆
- 结核分枝杆菌融合抗原38F和64F诊断活动性肺结核的价值被引量：3
- 2013年
- 目的探讨结核分枝杆菌融合抗原38F和64F对活动性肺结核患者血清中IgG、IgM和IgA抗体检测的诊断价值。方法利用结核分枝杆菌抗原优势肽段融合抗原38F和64F,通过ELISA法对223例活动性肺结核患者进行结核分枝杆菌特异性IgG、IgM和IgA抗体水平检测。223例活动性肺结核患者分为三组,第一组为涂片和培养共同阳性组(86例),第二组为涂片阴性且培养阳性组(51例),第三组为涂片和培养共同阴性组(86例)。结果223例活动性肺结核病患者,第一组IgG、IgM和IgA的联合检出率为79.07%(68/86);第二组IgG、IgM和IgA的联合检出率为62.75%(32/51);第三组IgG、IgM和IgA的联合检出率为69.77%(60/86)。全部样本血清学方法的检出率为71.75%(160/223)。结论结核分枝杆菌融合抗原38F和64F对于活动性肺结核具有较高的辅助诊断价值,并且IgG、IgM和IgA抗体联合检测可以提高检出率。
- 郄霜张立戴振华赵平杨锡琴郭兰芹修冰水陈堃王国华张贺秋冯晓燕
- 关键词：结核细菌细菌蛋白质类血清学试验
- 肠道病毒71型外壳蛋白VP1全长在大肠杆菌中的高效表达及初步活性测定被引量：4
- 2010年
- 目的:重组表达肠道病毒71型(EV71)外壳蛋白VP1全长,用于研制血清学检测试剂和疫苗研发。方法:在获得EV71全长基因并测序正确的基础上,将外壳蛋白VP1全长基因克隆到表达载体pET28a(+)上,构建重组表达质粒pET28a(+)/VP1,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,采用双抗原夹心检测技术评价重组抗原与27份EV71抗体阳性血清和18份阴性血清的反应情况。结果:重组EV71-VP1蛋白在大肠杆菌中诱导6 h后可获得高效表达,能与27份EV71抗体阳性血清中的21份发生阳性反应,EV71双抗原夹心检测与中和血清测试结果具有很好的一致性(P<0.05)。结论:实现了肠道病毒71型外壳蛋白VP1的高效表达,为肠道病毒71型诊断试剂和疫苗的研究奠定了基础。
- 张向颖修冰水毛群颖姚昕梁争论张贺秋
- 关键词：肠道病毒71型克隆表达
- 狂犬病病毒优势表位肽抗原及其用途
- 本发明公开了属于狂犬病疫苗技术领域的狂犬病病毒优势表位肽段抗原及其用途。本发明利用生物信息学软件筛选优势表位抗原区段，通过PCR扩增出优势表位抗原区段编码基因，并在大肠杆菌中高效表达，获得高纯度抗原，经间接ELISA实验...
- 冯晓燕张贺秋宋晓国王国华陈堃修冰水何竞朱翠侠杨锡琴
