宋晓国
- 作品数：151 被引量：368H指数：10
- 供职机构：军事医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- HCV血清分型方法的建立及其评价被引量：7
- 2012年
- 目的建立HCV血清分型方法,评价其在慢性丙型肝炎(丙肝)抗体阳性标本中的分型率及血清型与基因型的相关性。方法克隆表达HCVCore、非结构蛋白(non-structural protein,NS)4两个区段的型别特异性表位嵌合抗原,并应用酶联免疫竞争抑制法建立血清分型方法。分别应用酶联免疫吸附试验和聚合酶链反应法检测200例慢性丙肝患者的血清抗体和HCVRNA,并用建立的方法进行血清分型。同时采用该方法检测90例乙型肝炎患者、11例戊型肝炎患者和16例其他肝病患者的血清,评价其特异性。结果在200例慢性丙肝患者的血清标本中,基因1b型128例,2a型72例,型别特异性抗体阳性157例,分型率为78.50%,与基因型一致率为98.09%。而在另外117例乙型肝炎、戊型肝炎和其他肝病患者的血清中,均未检测出HCV型别特异性抗体。结论建立的HCV血清分型方法具有较高的分型率和特异性,可用于HCV抗体的血清学分型和预测干扰素疗效。
- 杨锡琴修冰水王国华陈堃宋晓国李卓严艳张贺秋彭瑞云
- 关键词：丙型肝炎病毒血清分型基因型
- 密码子优化的肺炎支原体P1蛋白在大肠杆菌中的克隆表达被引量：4
- 2012年
- 目的：获得密码子优化的肺炎支原体P1黏附蛋白优势表位抗原基因,并在大肠杆菌中表达,为临床诊断试剂和疫苗研制打下基础。方法：采用生物信息学分析肺炎支原体P1蛋白的抗原表位,筛选特异性P1蛋白优势表位区;采用大肠杆菌优势密码子,设计上述P1蛋白优势表位基因序列;采用退火PCR技术合成上述基因,并利用载体pGEX-4T-2实现P1优势表位抗原在大肠杆菌中的表达;采用ELISA法对纯化的P1抗原活性进行测定。结果：肺炎支原体P1蛋白特异性抗原表位主要位于1154~1521 aa,获得的P1优化密码子基因平行突变37个稀有密码子和2个终止密码子;在大肠杆菌中表达的GST-P1融合蛋白的相对分子质量为65.9×103,纯化后重组抗原能与肺炎支原体感染者血清发生特异性的免疫反应。结论：采用密码子优化基因合成技术实现了肺炎支原体P1优势表位抗原在大肠杆菌中的高效表达,为肺炎支原体感染的诊断试剂研究提供了重要参考。
- 张奇舒修冰水宋晓国张贺秋谢宝贵
- 关键词：肺炎支原体原核表达
- 利用6× His/ Ni-NTA 表达纯化系统一步纯化乙型肝炎前S抗原被引量：1
- 1999年
- 目的：利用 ６× Ｈｉｓ／ Ｎｉ Ｎ Ｔ Ａ 表达纯化系统表达并纯化带有 ６ 个 Ｈｉｓ 纯化标签的乙型肝炎前 Ｓ抗原。方法：利用 Ｎｉ Ｎ Ｔ Ａ Ｓｕｐｅｒｆｌｏｗ 亲和层析，比较了 Ｐｒｅ Ｓ１／２ 与 Ｐｒｅ Ｓ２ 蛋白分别在非变性和变性条件下的各种纯化条件和产率，并用三种方式对 Ｐｒｅ Ｓ２ 蛋白进行了复性。结果： Ｐｒｅ Ｓ１／２ 与 Ｐｒｅ Ｓ２ 蛋白均存在于 ２５０ ｍ ｍ ｏｌ／ Ｌ 咪唑洗脱峰中。从 １ Ｌ 诱导菌体中可以分别纯化 Ｐｒｅ Ｓ１／２ 与 Ｐｒｅ Ｓ２ 蛋白 １０～１５ ｍ ｇ，纯度达到电泳纯。三种复性方式中，在 Ｎｉ Ｎ Ｔ Ａ 柱上复性 Ｐｒｅ Ｓ２ 蛋白的复性率达 ６０．５％ 。结论：６× Ｈｉｓ／ Ｎｉ Ｎ Ｔ Ａ 表达纯化系统不仅可以使外源蛋白在大肠杆菌中获得高效表达，而且可以通过简单的纯化步骤得到较高纯度的目的蛋白。该表达纯化系统为利用大肠杆菌制备重组蛋白提供了一种简便可行的方法。
- 孟莉韩保光陈坤宋晓国张贺秋凌世淦马贤凯
- 关键词：重组蛋白质组氨酸标签乙型肝炎前S抗原
- 丙型肝炎病毒第一高变区抗原的筛选、克隆表达及临床初步应用
- 目的:本研究通过筛选丙型肝炎病毒第一高变区(HVR1)序列,组成多靶点抗原组合,分析HCV患者体内HVR1抗体的异质性,并对其临床初步应用进行评价.方法:采用生物信息学对现有HVR1序列筛选,并进一步克隆表达,用间接EL...
- 修冰水王国华张贺秋宋晓国陈坤阎瑾琦冯晓燕凌世淦朱翠霞
- 关键词：丙型肝炎病毒抗原克隆表达
- 文献传递
- 应用蛋白芯片技术筛选戊型肝炎病毒优势表位抗原被引量：3
- 2009年
- 目的筛选戊型肝炎病毒优势表位抗原以便研发新型戊型肝炎诊断试剂。方法通过计算机辅助软件分析,利用改构的高效表达载体表达了HEV 1型与HEV 4型ORF2和ORF3的17种表位抗原,利用蛋白芯片技术平台筛选优势表位抗原。结果在所获得的17种表位抗原中筛选到4种可以作为研发新型戊型肝炎诊断试剂候选抗原的优势表位抗原。结论利用蛋白芯片技术快速准确地筛选到4种可用于研发新型戊型肝炎诊断试剂的候选优势表位抗原。
- 陈坤宋晓国王国华朱翠侠冯晓燕王佑春李卓张贺秋
- 关键词：戊型肝炎病毒蛋白芯片
- 人IA-2基因的部分区段克隆表达及其在1型糖尿病诊断中的应用价值评估被引量：2
- 2010年
- 目的:构建人IA-2基因不同区段原核表达载体,诱导表达获得重组蛋白,并初步验证其在1型糖尿病蛋白酪氨酸磷酸酶自身抗体检测中的价值。方法:用RT-PCR方法调取目的基因,构建相应的原核表达质粒,转化大肠杆菌HB101,诱导表达获得纯化重组蛋白;以重组蛋白为包被抗原,初步建立检测蛋白酪氨酸磷酸酶自身抗体的ELISA方法,评价各片段在1型糖尿病诊断中的价值。结果:获得了2种可被1型糖尿病患者血清识别的重组人蛋白酪氨酸磷酸酶抗原区段IA-2(601～979)和IA-2(683～979),检测敏感性和特异性相当,但IA-2(683～979)检测的阳性D450nm值明显高于IA-2(601～979),成为首选的抗原区段。结论:所选重组人IA-2(683～979)抗原区段具有良好的抗原性,可作为1型糖尿病患者辅助诊断试剂的候选抗原。
- 王国华张贺秋宋晓国陈坤朱翠侠楚晓燕刘喜明戴振华方平冯晓燕
- 关键词：1型糖尿病蛋白酪氨酸磷酸酶酶联免疫吸附测定法
- 丙型肝炎病毒第一高变区抗原及其在制备丙型肝炎病毒检测试剂中的用途
- 本发明公开了本发明提供丙型肝炎病毒(HCV)第一高变区抗原，还公开了该抗原在制备丙型肝炎病毒检测试剂中的用途。本发明采用生物信息学技术对现有丙型肝炎病毒第一高变区序列分析，筛选出17条具有变异株特异性HVR1多靶点抗原，...
- 修冰水王国华张贺秋宋晓国凌世淦阎瑾琦李昭
- 文献传递
- 甲型H1N1流感病毒NA、PB2和PA表位抗原区段的克隆和表达被引量：3
- 2010年
- 目的:分析比对甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)、聚合酶B2(PB2)和聚合酶A(PA)抗原的序列,克隆表达保守的和变异的表位抗原区段,为免疫学诊断试剂的研究提供候选抗原。方法:采用BioSun生物学软件比较新近公布的A/H1N1流感病毒和我国猪流感病毒浙江株NA、PB2和PA抗原序列,并预测筛选NA、PB2和PA抗原表位保守区段与变异区段,采用PCR逐步合成法合成NA、PB2和PA表位抗原区段基因序列,并利用原核表达载体pBVIL1进行克隆表达。结果:筛选的保守表位抗原区段和变异表位抗原区段为NA/135～180aa、NA/310～350aa、PB2/1～80aa、PA/41～90aa、PA/231～280aa和PA/341～400aa;获得6条表位抗原区段基因序列,且6条表位抗原区段均获得了高效表达,得到纯化后的抗原。结论:获得了A/H1N1流感病毒NA、PB2和PA表位抗原区段,为进一步研制特异的甲型流感病毒快速诊断试剂提供了抗原储备。
- 宋晓国王国华朱翠侠戴振华修冰水何竞陈坤张向颖凌世淦杨静王升启张贺秋冯晓燕
- 关键词：甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶克隆
- 丙型肝炎病毒核心蛋白不同区段在HEK293T细胞内的定位被引量：1
- 2004年
- 目的 :为进一步探讨HCV核心蛋白致癌机制 ,观察了HCV核心蛋白不同区段在HEK2 93T细胞内的定位情况。方法 :构建增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)和不同长度核心蛋白区段融合表达的pEGFP_C1系列重组载体 ,对HEK2 93T细胞进行瞬时转染 ,并在激光扫描共聚焦显微镜下观察核心蛋白不同区段在细胞内的定位。结果 :全长核心蛋白定位于细胞质 ;核心蛋白 1～ 5 9aa区段完全定位于细胞核 ;5 0～ 14 0aa区段和 1～ 14 0aa区段在细胞核和细胞质中均存在 ;130～ 191aa区段完全存在于细胞质中。结论 :核心蛋白不同区段在细胞内的定位不同 ,将导致其参与细胞调节的途径和功能的不同。
- 冯晓燕凌世淦刘荷中张贺秋宋晓国周涛
- 关键词：丙型肝炎病毒病毒核心蛋白质类
- 甲型H1N1流感血凝素抗原及其在抗体检测试剂中的用途
- 本发明公开了一种甲型H1N1流感血凝素(HA)抗原，还公开了该抗原在制备甲型H1N1流感血凝素抗体检测试剂中的用途。本发明采用生物信息学技术对现有甲型H1N1流感HA序列进行分析，筛选出5个抗原区段进行克隆表达，并通过甲...
- 修冰水张贺秋房涛宋晓国王国华陈坤冯晓燕朱翠侠何竞
- 文献传递
