刘凯于
- 作品数：49 被引量：223H指数：8
- 供职机构：华中师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金国家大学生创新性实验计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- 卡那霉素对杨树和刺槐外植体生长与分化的影响被引量：4
- 2006年
- 卡那霉素(Km)对中嘉8号杨芽苗生长具有明显的抑制作用,随着浓度的提高,芽苗存活率逐渐降低,当Km≥60 mg/L时,存活率为0。Km对宽叶刺槐茎段的分化和芽的生长有较大影响,Km=10 mg/L时,促进分化,分化频率达100%,高出对照11.1%;Km≥40mg/L时,抑制芽的生长,芽的黄化率为100%;Km≥60mg/L时,没有芽的分化。因此,中嘉8号杨、宽叶刺槐遗传转化用卡那霉素为选择剂是合适的。
- 郑进康薇王慧刘凯于洪华珠彭建新
- 关键词：杨树刺槐抗生素
- 抗苏云金杆菌毒素Cry1Ac粉纹夜蛾细胞系的特性研究被引量：3
- 2004年
- 为了从离体细胞水平探讨昆虫对苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白的部分抗性机制,本文采用活化的Cry1Ac 毒素对粉纹夜蛾BTI-TN-581-4细胞连续筛选86代,获得了高水平抗性细胞,研究了其某些特性。它对Cry1c 产生了低水平的交互抗性,对低渗溶液的耐受性显著增强,双向电泳图谱表明抗性细胞膜蛋白组分发生了明显的变化。膜蛋白组分的变化可能导致了筛选细胞的耐低渗透压和抗Cry1C。
- 刘凯于杨红蒋才富彭建新洪华珠
- 关键词：交互抗性膜蛋白苏云金芽孢杆菌
- 浓核病毒研究概述被引量：3
- 2011年
- 浓核病毒属于细小病毒科浓核病毒亚科,病毒颗粒为二十面体,无包膜,直径在18～30nm左右,基因组为单链DNA,末端具有发卡结构,大小为4～6kb,只感染无脊椎动物细胞。本文介绍了浓核病毒基因组的表达策略、宿主域及其决定因子、昆虫对浓核病毒的抗性机制,以及浓核病毒在卫生和农业领域潜在的应用价值。此外,也概括了浓核病毒对无脊椎动物养殖业潜在的威胁。
- 刘凯于彭建新洪华珠李毅
- 关键词：浓核病毒抗性基因组进化
- 棉铃虫c-Myc基因的原核表达纯化、抗体制备、时空表达谱测定与功能分析
- 2023年
- 细胞致瘤基因(cellular-myelocytomatosis viral oncogene,c-Myc)编码的c-Myc蛋白通过Wnt/β-catenin信号通路调节相关基因的表达,近年来引起了广泛的研究关注。本研究旨在利用原核表达系统体外表达棉铃虫(Helicoverpa armigera)c-Myc(Ha-c-Myc)基因,制备多克隆抗体,明确Ha-c-Myc的时空表达模式,并探究Ha-c-Myc在调控棉铃虫胆固醇载体蛋白-2(sterol carrier protein-2,SCP-2)基因表达中的潜在作用。通过PCR扩增Ha-c-Myc基因并克隆至pET-32a(+)原核表达载体中,构建重组表达质粒pET-32a-Ha-c-Myc,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)细胞,使用IPTG诱导蛋白表达,并通过Ni2+-NTA柱纯化重组蛋白,用重组蛋白免疫新西兰兔制备抗Ha-c-Myc多克隆抗体。利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)法检测棉铃虫不同发育时期(卵、幼虫、预蛹、蛹和成虫)和预蛹期不同组织(中肠、脂肪体、头部和表皮)中Ha-c-Myc基因的表达水平。设计合成Ha-c-Myc siRNA并转染棉铃虫Ha细胞,通过qRT-PCR分析Ha-c-Myc基因的RNA干扰后棉铃虫Ha-c-Myc基因和HaSCP-2基因mRNA表达的情况。结果表明,本实验构建了pET-32a-Ha-c-Myc重组质粒,在大肠杆菌中获得了高效表达的、大小约为65 kDa的可溶性Ha-c-Myc蛋白。经纯化得到纯度较高的蛋白,免疫新西兰兔制备了多克隆抗体,免疫印迹实验(Western blotting)表明抗体的特异性较好,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)分析显示抗体具有较高的效价。qRT-PCR实验发现Ha-c-Myc基因在棉铃虫各发育阶段均有表达,在幼龄和大龄幼虫及预蛹中表达量较高,其中预蛹的表达量最高。组织表达结果显示,Ha-c-Myc基因在预蛹不同组织均有一定表达但存在差异,在中肠部位具有高表达,而在表皮和脂肪体表达水平较低。RNA干扰的结果显示,Ha-c-Myc表达的敲降对HaSCP-2基因的转录有较大影响,导致HaSCP-2基因的相对表�
- 索倩孙晓燕张莹张莹刘凯于刘凯于杨红洪华珠彭建新
- 关键词：棉铃虫原核表达脂质代谢
- 与宿主昆虫液化相关的杆状病毒基因及其蛋白被引量：5
- 2005年
- 昆虫被杆状病毒感染后会发生液化现象,这有利于病毒向周围环境扩散。目前在杆状病毒苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒NPV和GV中,发现与昆虫宿主液化相关的基因有组织蛋白酶基因V-cath基因和几丁质酶基因。V-cath基因表达产物在苜蓿银纹夜蛾多角体病毒(AcMNPV)中能特异性降解昆虫细胞内的肌动蛋白。几丁质酶不仅参与了虫体体表面几丁质的降解,同时还参与V-CATH蛋白前体的加工过程,起分子伴侣的作用。对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)的研究表明其FP25K基因表达产物通过影响组织蛋白酶的释放与分泌而参与虫体液化。简要综述了此3种基因及其表达产物的结构、功能与特性,并讨论了它们在生产上的应用前景。
- 金利容刘凯于胡秋婷
- 关键词：几丁质酶基因
- 甲醛致斜纹夜蛾SL-1细胞DNA损伤作用的研究
- 2006年
- 为了研究甲醛致昆虫细胞DNA-蛋白质的交联作用(DNA-protein crosslinks,DPC)和DNA的断裂作用,以斜纹夜蛾SL-1细胞为材料,采用KCl-SDS沉淀法和彗星实验来检测液态甲醛染毒后SL-1细胞中DPC的含量及DNA的断裂效应.KCl-SDS沉淀法的结果表明,低浓度的液态甲醛(25μmol/L,125μmol/L)不能引起DPC,较高浓度(625μmol/L)可以引起明显的DPC(P<0.01);而彗星实验的结果则显示甲醛在低浓度(5μmol/L,25μmol/L)时可以引起DNA链的断裂(P<0.01),在较高浓度(625μmol/L)时尾部DNA%和尾矩比空白对照显著降低(P<0.01),表明此时甲醛所致的DPC掩盖了DNA断裂的作用.结论是甲醛在较高浓度时可以导致明显的DPC作用,而在低浓度时以DNA断裂为主.
- 甘耀坤杨光涛彭光银吴凯刘凯于杨旭
- 关键词：甲醛DNA损伤细胞
- 鳞翅目昆虫细胞抗菌肽的诱导、筛选及抗菌活性的研究被引量：3
- 2006年
- 选取3种离体培养的鳞翅目昆虫细胞系,采用热灭活的大肠杆菌诱导的方法,诱导其产生抗菌肽,并进行抗菌活性检测、诱导动力学研究及Tricine SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测分析.结果筛选到1株诱导抗菌活性较高的昆虫细胞系———粉纹夜蛾BTI-Tn-5B1细胞系,并发现该粉纹夜蛾5B1细胞在诱导后16 h产生了1个分子量大约为8 000的抗菌肽,抗菌活性检测表明其对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌(Escherichia coliK12D31)、德氏卑沙门氏菌(Salmonella derby)均有不同程度的抑制作用,其中特别是对革兰氏阴性菌———大肠杆菌K12D31和德氏卑沙门氏菌有较强的抑菌活性.
- 彭蓉杨忠刘凯于姚汉超杨红崔艳芳洪华珠
- 关键词：抗菌肽SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳抗菌活性
- 杨树高效受体系统的构建及转Bt基因研究
- 郑进康薇刘凯于洪华珠
- 1、所属技术领域林木遗传育种。2、立项背景及意义：杨树是湖北的主栽树种，随着规模的扩大，杨扇舟蛾等食叶害虫危害严重，每年累计发生120多万亩。Bt(苏云金芽孢杆菌)是一种安全、高效的生物杀虫剂，国内外已培育Bt杨在内的抗...
- 关键词：
- 关键词：杨树遗传育种生物杀虫剂
- 苏云金芽孢杆菌Cry1A毒素抗性相关受体类钙粘蛋白的研究进展被引量：3
- 2004年
- 综述了Cry1A毒素的受体类钙粘蛋白的结构 ,受体与毒素的结合特性 ,受体基因在离体细胞中的表达和表达产物介导Cry1A毒素裂解细胞的功能 ,以及受体基因的突变与抗性的关系 。
- 刘凯于郑进彭蓉洪华珠
- 关键词：基因表达突变抗性
- 对虾白斑症病毒体内外感染的研究被引量：4
- 2001年
- WSSV可经注射、投喂或共居感染克氏螯虾和日本沼虾 ,病毒感染的组织匀浆物注射后发病很快 ,但蔗糖介质纯化的 WSSV注射后发病较慢 ,Ficoll-4 0 0介质纯化的 WSSV注射后发病时间介于前二者之间 .中国对虾细胞内 WSSV一般每个囊膜只含一个核衣壳 ,但此毒种经克氏螯虾反复增殖后 ,多粒包埋的病毒粒子明显增多 .从病虾的每克鳃可提出约 0 .66mg的 WSSV.含WSSV的血淋巴或组织匀浆液感染 8种昆虫细胞后 ,传代
- 余泽华刘凯于杨凯王家坤虢华珊邱宝国姚汉超陈曲侯
- 关键词：对虾白斑症病毒WSSV体外感染发病情况
