张晓梅
- 作品数：22 被引量：158H指数：4
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 以Rtac2/3为抗原用于鼻咽癌病人检测的初步研究被引量：35
- 2006年
- 目的在大肠杆菌中表达EBV的早期基因BRLF1,并纯化这个重组蛋白。用纯化的蛋白作为抗原与鼻咽癌(NPC)病人血清中的特异性抗体发生反应,以寻找新的NPC筛检或诊断标志物。方法用表达和纯化的BRLF1基因C端2/3部分蛋白(Rtac2/3)建立间接ELISA方法,检测了59份NPC患者血清中的抗Rta IgG抗体,同时59份健康者血清作对照。结果59份NPC患者血清中50份阳性,而59份健康者对照血清中只有7份阳性。NPC组的阳性率与健康对照组之间差异有统计学意义(P＜0．01)。此方法的灵敏度为84．7％,特异性为88．1％。结论(1)检测人血清中的抗Rta-IgG可以作为NPC诊断的重要标志物之一。(2)如果检测抗Rta-IgG与检测Zebra IgG抗体试验联合使用,用于NPC的筛检和诊断能够进一步提高灵敏度或特异性。
- 任军张晓梅张晓光李红霞周玲曾毅
- 关键词：EBV鼻咽癌
- 含有H5N1 NA基因重组腺病毒疫苗在小鼠体内的免疫效果研究被引量：1
- 2009年
- 目的考察含有禽流感病毒A／Anhui／1／2005（H5N1）优化型NA基因的重组腺病毒在BALB／c小鼠体内的免疫效果，并筛选合适的免疫剂量。方法重组病毒以肌内注射方式在第0周和第4周免疫BALB／c小鼠两次，低、中、高组的免疫剂量分别是10^5、10^7和10^9 TCID50/次，第5周时分别使用神经氨酸酶活性抑制试验和ELISpot实验来检测和比较疫苗的体液和细胞免疫效果。结果重组病毒免疫后的小鼠均可检测出针对NA抗原的特异性体液和细胞免疫反应，并且免疫效果与免疫剂量呈正相关，10^7 TCID50／只／次是合适的免疫剂量。另外，从包含NA全长氨基酸残基的合成肽库中筛选到两个能够刺激BALB／c小鼠T淋巴细胞分泌IFN-γ的表位，即NA109-124：CRTFFLTQGALLNDKH和NA182-199：AVAVLKYNGIITDTIKSW。结论含有优化型NA基因的重组腺病毒疫苗能够诱导BALB／c小鼠同时产生NA抗原特异性的体液和细胞免疫反应，是较好的H5N1流感病毒候选疫苗株，值得进一步深入研究。
- 马晶张晓光李魁彪张晓梅王敏白天杨亮徐红舒跃龙曾毅
- 关键词：神经氨酸酶腺病毒免疫
- 河南省某市HIV感染者基因型耐药横断面调查
- 2012年
- 目的了解河南省某市HIV耐药毒株在HIV／AIDS患者中的情况。方法采集2011年河南省某市150份HIV／AIDS患者血清，提取RNA，逆转录及巢式PCR扩增HIV-1pol基因区。所得序列构建系统进化树分析亚型；并利用StanfordHIVDrugResistanceDatabase分析HIV基因耐药相关突变和耐药情况。结果150份样本中34份测序阳性，其中未接受抗病毒治疗样本9份，接受抗病毒治疗样本25份；B＋亚型占94．1％。测序阳性样本的基因突变率为58．8％，其中未接受抗病毒治疗的突变率为5．9％，接受抗病毒治疗的突变率为52．9％。结论接受抗病毒治疗的耐药样本中出现了对反转录酶抑制剂不同程度的耐药及多药耐药，说明仍需加强耐药监测及管理，尽量减少耐药株的产生，并根据耐药检测结果及时调整治疗方案。
- 闫晓马晶张晓梅常战军刘建勋兰琳徐兰英张胜勇白建敏钱建华张晓光曾毅
- 关键词：HIV基因
- HIV-1病毒感染因子基因克隆、表达、纯化及其抗体制备的研究被引量：1
- 2006年
- 目的制备HIV-1病毒感染因子(Vif)及其抗体。方法用PCR技术从HIV-1NL4·3cDNA质粒中扩增病毒感染因子(vif)基因,vif基因全长为579nt(核苷酸),翻译成含192个氨基酸的蛋白质。将测序鉴定过的vif基因克隆到原核表达载体pET-32a上,以包涵体的形式在大肠埃希菌BL21(DE3)中高效表达,Vif蛋白C端融合6×His标签便于纯化及鉴定。应用酶切鉴定、SDS-PAGE及WesternBlot等方法确保基因片段的正确性及表达蛋白的特异性。间接ELISA法测定兔多克隆抗体滴度。结果成功地获得了高纯度的Vif融合蛋白,纯度可达80%以上。用其制备多克隆抗体滴度可达1∶204800。结论获得高纯度的Vif融合蛋白及其高效价的抗体。
- 李岚杨怡姝张晓光张晓梅李泽琳曾毅
- 关键词：HIV-1基因表达抗体
- 多重RT-PCR结合反向杂交技术检测多种流感病毒方法的研究
- 2010年
- 目的 建立一种基于多重RT-PCR结合反向斑点杂交技术的多种流感病毒核酸快速检测方法.方法 对5种亚型流感病毒的HA基因序列进行比对分析,选择合适的保守区域设计引物序列,并在扩增产物序列内部选择高变区设计探针序列.首先,使用生物素标记的引物扩增出同样带标记的PCR产物;然后,产物与膜上的探针杂交,通过生物素-亲和素反应,最后以斑点显色的方式来检测和鉴别不同亚型的流感病毒.实验中还通过摸索不同的引物浓度和探针浓度来优化反应条件.结果 成功建立了一种基于多重RT-PCR结合反向斑点杂交技术的检测方法,该方法能够成功检测和鉴别5种不同亚型的流感病毒,检测灵敏度比传统的RT-PCR方法高100～1000倍.结论 成功建立了一种可高通量快速检测多种流感病毒的多重RT-PCR结合反向斑点杂交技术的检测方法.
- 杨亮张晓梅张晓光马晶王敏温乐英王大燕白天舒跃龙钱永华曾毅
- 关键词：聚合酶链反应杂交流感
- EBV 4型IgA/VCA IgA/EA IgG/EA IgG/ZEBRA抗体在鼻咽癌普查和早期诊断中的应用被引量：15
- 2006年
- 目的摸索以疱疹病毒4型(EBV)IgG/ZEBRA为捕捉抗原的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)条件,为大量人群普查奠定基础。方法将纯化的ZEBRA抗原用于对鼻咽癌(NPC)患者血清及健康人血清IgG/ZEBRA抗体的ELISA检测。结果检测NPC患者血清288份,其中ELISA实验显示阳性262份,敏感度91%,检测正常人血清96份,其中阳性5份,特异度94.8%。其结果显示NPC组的阳性率与健康对照组的数据之间差异有统计学意义(P<0.001)。本研究在此基础上对广东惠州5463份和广西桂平2017份血清进行检测,检出早期鼻咽癌患者5例。并将结果与免疫酶法检测IgA/VCA、IgA/EA、IgG/EA比较。结论以EBV早期抗原ZEBRA为捕捉抗原的间接ELISA方法具有较高的特异性和敏感性,可以用于大量人群的NPC早期筛查和早期诊断。
- 张晓梅钟建明汤敏中张晓光廖建郑裕明邓洪曾毅
- 关键词：疱疹病毒4型抗原病毒鼻咽肿瘤
- EB病毒Zebra/IgG抗体ELISA检测方法的建立和临床应用
- 汤敏中郑裕明蔡永林成积儒曾洪张晓梅张晓光曾毅李军莫永坤李少文
- 该课题是经梧州市科学技术局[2003]50号文件下达的科技计划项目，合同编号为200302009。由于鼻咽癌的病因仍未完全清楚，尚无确实可行的一级预防措施，因而对鼻咽癌的防治主要寄希望于二级预防。筛查作为二级预防的主要手...
- 关键词：
- 关键词：鼻咽癌诊断基因工程方法
- HIV11C亚型Gp120蛋白表达、纯化及其抗体制备的研究
- 2009年
- 目的制备HIV-1C亚型Gp120蛋白及其抗体。方法用PCR技术从表达C亚型HIV-1全长gp160基因的质粒上扩增gp120基因羧基末端部分片段，其长度为612个核苷酸，编码204个氨基酸。将测序鉴定正确的gP120基因片段克隆到原核表达载体pET-30a上，以包涵体的形式在大肠埃希菌B121（DE3）中高效表达，Gp120蛋白c端融合6×His标签便于纯化。将纯化的蛋白免疫新西兰大白兔制备C亚型Gp120特异性兔多克隆抗体，用间接ELISA法测定抗体滴度，并用WesternBlot方法验证该抗体是否可识别在哺乳动物细胞内表达的C亚型Gp160蛋白。结果成功地获得高纯度的C亚型Gp120融合蛋白，用其制备的多克隆抗体滴度可达1：204800，该抗体可特异性识别在COS-1细胞中瞬时表达的C亚型Gp160蛋白。结论获得了高纯度的C亚型Gp120融合蛋白及其高效价的抗体。
- 杨海儒冯霞余双庆张晓光张晓梅陈国敏李泽琳曾毅
- 关键词：HIV病毒包膜蛋白质类抗体病毒
- 含H5N1-HA基因重组腺病毒疫苗的构建及其诱导免疫应答的初步探讨
- 2009年
- 目的构建包含H5N1-HA基因的重组腺病毒疫苗并探讨其免疫效果。方法用Admax系统构建包含H5N1-HA基因的重组腺病毒疫苗，并用PCR、Western—Blot等方法对重组病毒疫苗进行鉴定；疫苗免疫小鼠后，通过H1实验和ELISPOT实验检测其体液免疫和细胞免疫反应，评价其免疫效果。结果成功得到了含有H5N1-HA基因的重组腺病毒疫苗；基因表达鉴定表明，HA基因能够在细胞中进行表达；血凝抑制实验结果显示小鼠产生的针对HA抗体滴度在1：320和1：640之间；ELISPOT结果显示实验组和对照组（PBS）相比斑点数量差异有统计学意义（P〈0．05），以上免疫结果表明重组腺病毒载体疫苗可以诱导小鼠产生良好的特异性体液和细胞免疫反应。结论含H5NA—HA的重组腺病毒疫苗可以诱导小鼠产生良好的免疫反应，为研制人禽流感疫苗打下基础。
- 张晓光李魁彪马晶王乃福张晓梅桑云虎董婕徐红曾毅
- 关键词：流感病毒A型流感病毒A型腺病毒疫苗
- 含有人H5N1流感病毒NA基因的重组腺病毒候选疫苗株在小鼠体内诱发细胞免疫反应被引量：4
- 2009年
- 本研究旨在构建人H5N1流感病毒NA基因的重组腺病毒候选疫苗株,并考察其在BALB/c小鼠体内的细胞免疫效果。本研究选用流感病毒A/Anhui/1/2005(H5N1)的NA基因为研究对象,分别将野生型和按照人密码子优化的NA基因插入重组腺病毒载体,构建并鉴定了两种重组腺病毒rAdV-WtNA和rAdV-Mod.NA,纯化后病毒在第0周和第4周以肌肉注射方式免疫BALB/c小鼠两次,免疫剂量是109TCID50/只/次,第5周时使用Elispot方法检测并比较病毒的细胞免疫效果。结果显示,所制备和纯化的两种重组病毒均可有效表达NA目的蛋白;免疫后的小鼠均可检测出明显的针对NA抗原的特异性细胞免疫反应,而且rAdV-Mod.NA组分泌IFN-γ细胞的数量显著高于rAdV-WtNA组(P=0.016)。说明rAdV-Mod.NA是较好的人H5N1流感病毒候选疫苗株,值得进一步深入研究。
- 马晶张晓光陈红李魁彪张晓梅张柯杨亮徐红舒跃龙谭文杰曾毅
- 关键词：H5N1神经氨酸酶重组腺病毒细胞免疫
