杨银峰
- 作品数：16 被引量：70H指数：4
- 供职机构：昆明医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金云南省中青年学术和技术带头人后备人才项目云南省教育厅科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学更多>>
- 虚拟实验技术在分子生物学实验教学中的应用被引量：9
- 2013年
- 目的建立医学分子生物学虚拟实验教学平台,探索出有效的虚拟实验教学运行机制.方法将昆明医科大学2011级临床专业学生随机分为2组,虚拟实验技术教学组195人,传统实验教学组205人,采用问卷调查了解学生对教学效果的评价,并统计学分析2组期末考试成绩.结果同学对虚拟实验的教学方式接受程度较高,有助于同学对实验实际操作及理论知识的理解和掌握.2组期末考试成绩无统计学差异(P>0.05).结论虚拟实验技术作为一种新的教学手段,具备许多传统实验所不具备的优点,但其不能完全代替传统实验,在医学分子生物学实验教学中,应合理运用虚拟实验与传统实验两种教学手段.
- 杨银峰朱月春王昕童淑芬李治纲李小洁
- 关键词：分子生物学教学方法虚拟实验
- 基于医学分子生物学PBL的学生自主学习实践被引量：1
- 2013年
- 培养学生"自主学习"能力是医学教学研究和改革的重要方面。本文通过医学分子生物学教学中设置问题、分小组收集信息和讨论并达成共识、制作幻灯片并汇报学习成果、教师点评的方式探讨了考查和培养学生的自主学习能力的途经,讨论了问题设置的要求和学生学习的结果,并对今后的教学改革提出了建议。
- 范浩赵敏杨银峰李治纲朱月春
- 关键词：医学分子生物学
- 分子医学整合课程中基于微课程的翻转课堂设计与实施被引量：3
- 2017年
- 医学课程整合是高等医学教育改革趋势。昆明医科大学将《医学细胞生物学》《医学遗传学》《医学生物化学》《医学分子生物学》整合为包括《分子医学理论基础》和《分子医学实验技术》的分子医学课程体系。在整合课程的具体教学实践中，以微课程结合翻转课堂为主，并联合运用多种教学法；在教学评价中，以形成性考核为主、终结性考核为辅，且建设了相应的网络教学评价体系。
- 李思熳李树德朱月春杨银峰张巧王昕武静何永蜀李清杨芳
- 关键词：分子医学课程整合
- G6PD缺陷型A375稳转细胞株及其构建方法
- 本发明涉及到医学分子生物学技术，尤其是采用siRNA干扰技术构建研究细胞模型。本发明所述的G6PD缺陷型A375稳转细胞株是将A375细胞株经siRNA－慢病毒表达系统靶向沉默了内源性G6PD的表达量80％以上，并含有D...
- 朱月春李丹怡吕会茹杨银峰童淑芬李治纲
- 文献传递
- 中国西南阿昌族G6PD缺陷的特征及新单体型487G>A/IVS5-612(G>C)的鉴定被引量：4
- 2007年
- 探讨中国西南部疟疾高发区云南省梁河县阿昌族人群的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）缺陷的发生率及其分子特征. 四氮唑蓝纸片法和G6PD/6PGD活性测定筛查490阿昌族个体 （男260人, 女230人）, 发现男性G6PD缺陷的发生率为7.31% （19/260）; 女性为4.35 （10/230）. PCR-DHPLC-Sequencing 或PCR-Direct Sequencing分析19个阿昌族无关个体G6PD基因外显子2～13, G6PD Mahidol （487G＞A）的突变率为84.2% （16/19）; 所有G6PD Mahido均与新的多态性IVS5-612 （G＞C）连锁. G6PD 487G＞A/IVS5-612 （G＞C） 构成新的单体型成为这一阿昌族群体G6PD缺陷的分子特征之一, 已提交GenBank （登录号： EF190463）. 阿昌族G6PD Mahidol 的高发与缅甸人群G6PD Mahidol 突变率 （91.3%, 73/80） 极为相似, 这一结果提示阿昌族与缅甸人群之间有着广泛的基因交流 （gene flows）. 而中国其他少数民族最常见的突变G6PD Canton （1376G＞T） 和G6PD Kaiping （1388G＞A） 在这一阿昌族人群中没有找到, 提示阿昌族与其他少数民族的G6PD基因突变热点不同. 本研究数据是有关阿昌族G6PD遗传学的首次报道, 将为研究阿昌族起源、迁移提供线索并有助于上述地区疟疾的防治.
- 杨银峰朱月春李丹怡李治纲吕会茹吴静唐璟童淑芬
- 关键词：阿昌族G6PD基因突变
- 云南阿昌族G6PD基因突变G487A在DF213中的表达被引量：5
- 2007年
- 为获得阿昌族G6PDWT和G6PDG487A重组蛋白,研究G6PDG487A的结构和功能改变,从云南省德宏州梁河县杞木寨乡湾中村阿昌族聚集地的G6PD缺陷家系先证者和正常阿昌族个体全血提取RNA,经RT-巢式PCR得cDNA,将cDNA克隆至pMD18-Tsimple载体中并测序;错配碱基经定点突变修复后,目的基因亚克隆至pThioHis(A)载体,构建了阿昌族G6PD基因野生型和G487A突变型原核表达载体:pThioHis(A)-AChang-G6PDWT和pThioHis(A)-AChang-G6PDG487A。用重组质粒转化E.coli Competent Cells DF213(G6PD defeciency),经IPTG诱导G6PD表达、10%SDS-PAGE电泳检测表达蛋白和紫外340nm定量测定G6PD活性的分析表明,pThioHis(A)-AChang-G6PDWT和pThioHis(A)-AChang-G6PDG487A在DF213中成功表达,分子量约为59kDa。IPTG诱导0、3、6、9、和12h后,G6PD活性逐渐增高,G6PD基因WT表达的酶活性约是G487A的20-25倍。表达载体的构建以及G6PDcDNA在DF213中成功表达,为重组酶G6PDG487A的进一步研究奠定了基础。
- 杨银峰朱月春李鸿钧李治纲吕会茹李丹怡崔映波冯维杨余果宇黄尤光
- 关键词：阿昌族葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因
- 实时定量PCR测定人皮肤黑色素瘤细胞G6PD的表达
- 2007年
- 目的建立一种灵敏特异、重复性和稳定性好的检测G6PD表达的方法,以探究G6PD与肿瘤的相关性及其机理.方法用Real-time PCR技术测定了野生型、siRNA干扰型和无关序列对照型人皮肤黑色素瘤A375细胞的G6PD基因表达.绘制出β-actin和G6PD的标准曲线,标定了方法的稳定性和重复性,并以内参照β-actin较对G6PD的量.结果β-actin和G6PD标准曲线的回归系数分别为1.086和0.940;稳定性及重复性验证的Ctβ-actin值变异系数分别为2.46%和1.47%,而CtG6PD值变异系数分别为1.76%和1.87%.以野生型A375细胞作对照,无关序列不干扰A375细胞内源性G6PD基因表达(P>0.05),针对G6PD基因表达的siRNA的干扰效率为49%(P<0.01).结论实时荧光定量PCR在检测细胞G6PD基因表达时具有高灵敏度、高重复性和高稳定性的特点,可进一步用于G6PD与肿瘤的相关性研究.
- 朱月春李丹怡吕会茹杨银峰童淑芬
- 关键词：A375细胞G6PD
- G6PD通过细胞周期蛋白D1/D2调控人黑色素瘤细胞周期的进程被引量：4
- 2011年
- 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)在人皮肤黑色素瘤A375细胞中处于高表达与高活性状态,但G6PD在黑色素瘤发生发展过程中的作用及其具体机制尚不明确.本文在前期运用siRNA方法构建G6PD敲减的黑色素瘤A375稳转细胞(A375-G6PDΔ)基础上,构建表达载体pBabe-puro-G6PDWT在A375-G6PDΔ细胞中过表达野生型的G6PD基因,从而构建G6PD表达恢复的稳转细胞(A375-G6PDΔ-G6PDWT).3株细胞A375-WT、A375-G6PDΔ和A375-G6PDΔ-G6PDWT经G6PD酶活性测定、MTT测定、克隆形成实验、流式细胞仪分析细胞周期和Western印迹检测.结果显示,A375-G6PDΔ-G6PDWT细胞的G6PD蛋白表达量(0.847±0.080)及其活性(0.394±0.029)分别是A375-G6PDΔ的3.28倍(P<0.01)和7.34倍(P<0.01),分别是A375-WT细胞的91.57%和2.12倍(P<0.05).与A375-WT细胞相比,A375-G6PDΔ细胞G0/G1期细胞数增加,S期细胞数减少,增殖指数PI降低了25.70%(P<0.05),细胞周期蛋白D1/D2、细胞周期蛋白E表达分别下降37.4%、54.3%(P<0.01)和17.3%;而A375-G6PDΔ-G6PDWT细胞呈现G1/S期阻滞解除,细胞周期蛋白D1/D2蛋白分别恢复到A375-WT细胞的89.5%和87.6%,细胞周期蛋白E表达未见恢复,呈现生长增殖和克隆形成率的恢复并接近于A375-WT细胞.结果提示,G6PD通过细胞周期蛋白D1/D2调控人皮肤黑色素瘤A375细胞G1期向S期转换的进程,这为黑色素瘤发病机制的研究提供了新的思路.
- 唐琼玲张春华胡滔陈龙杨银峰李治纲朱月春
- 关键词：葡萄糖-6-磷酸脱氢酶黑色素瘤细胞周期细胞周期蛋白
- “四合一”分子医学整合课程的构建与实践被引量：3
- 2017年
- 整合课程是将各学科知识横向或纵向组合,注重学生整体思维学习的一种新型课程。整合课程教学方式为跨专业的团队教学,教学特点是注重学生思维能力和学习能力的培养,是当今医学教育改革的趋势。昆明医科大学目前尝试将"以学科为主"的教学模式转化为以"以器官系统为中心"的整合课程教学模式。为顺应这一教育改革的趋势,作者在基础医学课程建设中,将"细胞生物学、医学遗传学、生物化学、分子生物学"四门课程整合为"分子医学"课程。作者就"四合一"分子医学整合课程改革的背景、顶层设计、教学模式、实践中存在的问题等进行讨论。
- 何永蜀杨银峰李思熳李清杨芳狄勇张璐朱月春
- G6PD缺陷型A375稳转细胞株及其构建方法
- 本发明涉及到医学分子生物学技术，尤其是采用siRNA干扰技术构建研究细胞模型。本发明所述的G6PD缺陷型A375稳转细胞株是将A375细胞株经siRNA-慢病毒表达系统靶向沉默了内源性G6PD的表达量80%以上，并含有D...
- 朱月春李丹怡吕会茹杨银峰童淑芬李治纲
- 文献传递
