林欢
- 作品数：72 被引量：162H指数：7
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：黑龙江省科技攻关计划国家自然科学基金国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学一般工业技术医药卫生更多>>
- 犬瘟热病毒敏感细胞系及其建立方法和应用
- 本发明公开了一株犬瘟热病毒敏感细胞系及其建立方法和应用，属于生物技术领域。本发明采用慢病毒四质粒包装系统，获得了一株表达犬源SLAM的稳定细胞系MDCK-CSL，其菌种保藏编号为：CGMCC No.5881。通过比较CD...
- 姜骞曲连东林欢刘加森郭冬春司昌德
- 文献传递
- 汉坦病毒L基因的分段克隆及原核表达被引量：2
- 2012年
- 为原核表达汉坦病毒(HV)L蛋白,本研究根据HV 76-118株全长L基因序列分段设计合成了6对引物。通过RT-PCR方法分段扩增L基因的6个片段,分别克隆于原核表达载体pET-30a中,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。SDS-PAGE分析表明,获得与预期分子量一致的特异的目的蛋白。Western blot检测表明,重组蛋白与小鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性反应。
- 李茂中刘家森郭东春姜骞林欢曲连东
- 关键词：汉坦病毒原核表达
- 抗鸡传染性法氏囊病病毒VP3单克隆抗体制备及抗原表位的初步分析被引量：7
- 2006年
- 用纯化的原核表达的IBDVVP3蛋白免疫6～8周龄的雌性BALB／c小鼠，经过3次免疫后，取其脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞进行融合，经过3次有限稀释，获得分泌抗IBDVVP3抗体的4株（HRB-7B、HAR-7C、HRB-3F、HRB-10E）杂交瘤细胞系。结果表明，4株杂交瘤细胞分泌的抗体均能够特异地与IBDVVP3蛋白反应，细胞上清EuSA效价均在5．0×10^2以上，腹水EuSA效价为6．4×10^6以上；相加ELISA及肽扫描结果表明，4株中仅HRB-7C和HRB-10E2株单抗针对的抗原表位相近，并利用肽扫描的方法初步定位4株单克隆抗体的抗原表位。本研究对进一步分析IBDV的结构与功能以及建立以表位为基础的抗原抗体诊断方法具有重要的意义。
- 程宇邓小芸高玉龙高宏雷林欢王晓艳王笑梅
- 关键词：传染性法氏囊病病毒单克隆抗体抗原表位
- 鸡传染性法氏囊病超强毒Gx与疫苗毒Gt在鸡体内的复制研究被引量：1
- 2012年
- 本试验利用鸡传染性法氏囊病超强毒Gx及其致弱疫苗毒Gt为对象,研究超强毒与弱毒株在鸡体主要免疫器官内的复制情况,以探讨两类毒株表现不同生物特性的原因。分别利用鸡胚半数致死量和鸡胚成纤维细胞半数感染量对超强毒Gx和疫苗株Gt进行病毒滴度的测定;再利用荧光定量RT-PCR对两类毒株进行病毒量的校准。以相同量的病毒对2周龄SPF鸡进行攻毒。攻毒试验表明超强毒Gx能造成47.5%的死亡,法氏囊、脾脏、胸腺等免疫器官均严重损伤;而疫苗毒Gt无致死,且未能造成任何病理可见的损伤。病毒的体内复制情况表明超强毒相对于疫苗毒复制更为迅速,病毒载量更高。
- 李久宽王永强康忠惠王琦高玉龙高宏雷祁小乐秦立廷林欢王笑梅许修宏
- 关键词：传染性法氏囊病病毒超强毒
- 鸭肠炎病毒糖蛋白gB-gD主要抗原域的串联表达被引量：1
- 2013年
- 为了研究鸭肠炎病毒gB和gD基因串联表达后的免疫学活性,根据已发表的鸭肠炎病毒糖蛋白gB和gD基因序列设计两对引物,分别扩增了gB和gD基因主要抗原域,将其克隆到表达载体pPRO-EX—HTb中,构建重组表达质粒pHTb—gB-gD。将重组表达质粒pHTb-gB-gD转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达,SDS—PAGE表明:获得串联表达的gB和gD重组蛋白约60.5 Ku,与预期蛋白的分子质量一致,主要以包涵体的形式存在。Western-blot表明:串联表达的gB和gD重组蛋白可与鸭肠炎病毒阳性血清发生特异性反应,具有良好的抗原性。串联表达的gB和gD重组蛋白为下一步建立针对鸭肠炎病毒的诊断方法奠定基础。
- 王雅静郭东春刘家森王淑亚原冬伟姜骞林欢司昌德曲连东
- 关键词：鸭肠炎病毒糖蛋白D
- 鸭疫里默氏菌的分离鉴定及其对SPF鸭的致病性研究被引量：1
- 2013年
- 为研究鸭疫里默氏菌(RA)对SPF鸭的致病性,本实验室从不同省份疑似RA感染鸭场分离到4株细菌,经菌落形态观察、染色镜检、生化鉴定确定为RA。药敏试验表明这4个分离株对嗯诺沙星、氧氟沙星和先锋霉素V相对敏感,但对卡那霉素和庆大霉素均耐药。外膜蛋白A(OmpA)基因的克隆测序结果显示,4个RA分离株的ompA基因全长均为1 164 bp,编码387个氨基酸;核苷酸同源性为89%～100%。将5×108cfu的HLG1分离株经颈部皮下接种SPF鸭,病死SPF鸭的心、肝、脾、肺、脑和肾具有典型的病变。RA的分离鉴定技术为SPF鸭群RA的检测和监测以及为培育和净化SPF鸭作为RA的致病机理和疫苗研究中的实验动物模型奠定了基础。
- 帕提古丽.吾马尔郭东春张爱芹刘家森原冬伟姜骞林欢曲连东
- 关键词：鸭疫里默氏杆菌
- 同时检测小鼠微小病毒(MVM)和小鼠细小病毒(MPV)的荧光定量PCR的建立及应用
- 目的建立同时检测小鼠微小病毒(MVM)和小鼠细小病毒(MPV)的荧光定量PCR方法,并进行初步应用。方法比对NCBI上发表的MVM和MPV基因组序列,设计1对引物和探针,可同时检测MVM和MPV。考察MVM-MPV引物探...
- 王淑菁林欢付瑞李晓波王吉岳秉飞贺争鸣
- 关键词：荧光定量PCR
- 文献传递
- 鸡传染性法氏囊病病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立
- 根据GenBank中鸡传染性法氏囊病病毒基因组设计了一对针对病毒VP5基因的引物和一条特异的TaqMan水解探针,建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测鸡传染性法氏囊病病毒核酸载量的TaqMan荧光定量RT-PCR方法...
- 王永强祁小乐高宏雷高玉龙宇文延青林欢秦立廷宋修庆王笑梅
- 关键词：鸡传染性法氏囊病毒荧光定量RT-PCR
- 文献传递
- 鸭疫里氏杆菌PCR方法初步建立及应用被引量：6
- 2011年
- 为了建立针对鸭疫里氏杆菌的病原学检测方法,试验根据已发表的鸭疫里氏杆菌的外膜蛋白A(OmpA)的基因序列(GenBank登录号为AF104937)设计1对引物,对7株不同血清型鸭疫里氏杆菌进行扩增并建立PCR方法。结果表明:均扩增出与预计大小一致的目的片段,PCR方法敏感性可达到8.6 pg;而多杀性巴氏杆菌、沙门菌、大肠杆菌和金色葡萄球菌均未扩增出预计大小的片段,说明该PCR方法具有良好的特异性。同时用建立的PCR方法对鸭疫里氏杆菌攻毒鸭病例和临床疑似病鸭的脏器分离菌进行扩增,均可扩增出目的条带,与细菌的分离结果相一致。
- 孙郭东春刘家森姜骞司昌德林欢曲连东
- 关键词：鸭疫里氏杆菌OMPAPCR
- 鸡贫血病毒vp1和vp2基因在毕赤酵母中的表达及产物免疫学特性的初步研究被引量：1
- 2008年
- 利用特异性引物从pBluemCAV中PCR扩增得到鸡贫血病病毒(CAV)vp1、vp2基因,经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切处理,纯化后,克隆至EcoRⅠ和NotⅠ双酶切处理的表达载体pPIC9K中,构建了真核表达质粒pPIC9K-VP1和pPIC9K-VP2。将pPIC9K-VP1和pPIC9K-VP2转化至毕赤酵母SMD1168中,在0.5%甲醇诱导下表达CAV-VP1、CAV-VP2蛋白,运用Westernblot和Dot-ELISA鉴定表达蛋白。结果表明,重组酵母菌株表达出约54ku和24ku的目的蛋白,与针对鸡贫血病毒的单克隆抗体发生特异性反应。将表达产物乳化后免疫6周龄BALB/c小鼠,用ELISA、IFA检测免疫小鼠血清,均检测到抗体。
- 林欢高宏雷王晓艳高玉龙宋修庆李术强王笑梅
- 关键词：鸡贫血病毒VP1基因VP2基因毕赤酵母
