郭东春
- 作品数：119 被引量：324H指数：10
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省科技攻关计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 鸭疫里氏杆菌的分离鉴定及外膜蛋白OmpA的序列分析
- 从哈尔滨某鸭场的病鸭体内分离到细菌,经菌落形态观察、染色镜检、生化鉴定确定为鸭疫里氏杆菌。通过动物回归试验分离的鸭疫里氏杆菌有很强的致病性。药敏试验结果显示对嗯诺沙星等高度敏感。克隆扩增了鸭疫里氏杆菌外膜蛋白A,测序结果...
- 郭东春曲连东刘家森姜骞韩凌霞司昌德孟庆文
- 关键词：鸭疫里氏杆菌外膜蛋白A
- 文献传递
- 一种与兔出血症病毒VP60蛋白相结合的蛋白及其应用
- 本发明公开了一种与兔出血症病毒VP60蛋白相结合的蛋白及其应用，其特征在于至少包含如SEQ ID NO：1所示的序列。在发明中，通过酵母双杂交技术，从兔肝脏组织cDNA文库中钓取得到与兔出血症病毒结构蛋白VP60相互作用...
- 刘家森曲连东郭东春姜骞林欢
- 文献传递
- 口蹄疫病毒VP1-3免疫表位基因与猪γ-干扰素基因的融合表达被引量：7
- 2007年
- 将人工合成的口蹄疫病毒VP1-3上的抗原表位基因和猪γ-干扰素基因串联入原核表达载体pGEX-KG中,经酶切鉴定及测序表明重组载体中二者以接头融合的形式构建成重组表达质粒。将该质粒转化BL21后经IPTG诱导,实现了重组融合蛋白的高效表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析,重组蛋白分子量约为66 Ku,与预期大小相符。薄层扫描分析显示表达的重组蛋白占菌体总蛋白的37.4%,且主要以包涵体的形式存在。包涵体以SKL变性后,经PEG4000、氧化型谷胱苷肽和还原型谷胱苷肽复性。粗提产物以CPE_(50)测得重组蛋白在MDBK细胞上的抗水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)的活性达到1600 U/mL,说明表达产物具有干扰素的生物学活性,为下一步基因工程疫苗的研究奠定了基础。
- 姚清侠钱平曹毅郭东春徐卓菲何雁南司有辉陈焕春
- 关键词：口蹄疫病毒抗原表位猪Γ-干扰素
- 携带猪γ干扰素基因逆转录病毒载体的构建及其在猪肾细胞(PK-15)中的表达被引量：2
- 2007年
- 将梅山猪γ干扰素基因定向插入逆转录病毒载体pLXSN(neor),构建逆转录病毒重组质粒,利用脂质体介导法将重组质粒转染逆转录病毒包装细胞系PA317,转染细胞经含G418(400μg/mL)培养基筛选一周后获得稳定产毒的PA317细胞系。从细胞培养上清中提取RNA,进行RT-PCR检测,扩增到目的片段;将上清感染猪肾细胞(PK-15),经含G418(400μg/mL、600μg/mL和800μg/mL)的DMEM筛选一周,间接免疫荧光表明表达的猪γ干扰素主要锚定于细胞膜。收取PK-15细胞上清,在牛肾细胞(MDBK)上进行干扰素抗病毒活性检测,结果显示重组病毒表达的猪γ干扰素抗水泡性口炎病毒(VSV)的活性为1200IU/106cells.48h。以表达的干扰素处理PK-15细胞后,经细胞病变抑制法测定,重组猪γ干扰素可以抵抗口蹄疫病毒(FMDV)感染。试验结果表明猪γ干扰素基因已成功插入逆转录病毒基因组并在PK-15细胞中表达,表达的重组猪γ干扰素具有较强的抗病毒生物活性。
- 姚清侠刘新文钱平郭东春陈焕春
- 关键词：猪Γ干扰素逆转录病毒PK-15细胞抗病毒活性水泡性口炎病毒
- 兔多杀性巴氏杆菌热休克蛋白60基因的原核表达及抗原性分析
- 2012年
- 为了研究多杀性巴氏杆菌(P.multocida,Pm)热休克蛋白60(Hsp60)基因表达产物的抗原性,试验根据已发表的Pm 70株序列(AE004439)设计了1对引物,采用PCR技术扩增了兔多杀性巴氏杆菌C51-17株Hsp60的基因序列,将扩增产物与表达载体pPRO-EX-htb连接,得到重组表达质粒pHT-Hsp60,再用BamHⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定并测序确认正确后,将重组表达质粒pHT-Hsp60转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达,进行SDS-PAGE分析和Western-blot检测。结果表明:SDS-PAGE表达蛋白约为60 ku,与预期的Hsp60分子质量一致;表达产物与兔多杀性巴氏杆菌阳性血清发生特异性反应,说明表达产物具有良好的抗原性。
- 卢艳郭东春刘家森原冬伟姜骞司昌德林欢崔玉东曲连东
- 关键词：多杀性巴氏杆菌HSP60原核表达
- 实验用巴马小型猪SLA-DRB1基因克隆及分子特征分析
- 目的：为了研究实验用巴马小型猪SLA-DRB1基因的分子特征,为实验用巴马小型猪SLA单倍型猪群的建立奠定基础.
方法：采集20头(7♂,13♀)小型猪的抗凝血,分离外周血淋巴细胞,提取RNA,RT-PCR扩增...
- 高彩霞姜骞刘家森郭东春韩凌霞曲连东
- 关键词：实验动物巴马小型猪分子特征
- 文献传递
- 犬瘟热病毒F1蛋白的原核表达及其抗原性分析被引量：2
- 2010年
- 为表达和鉴定犬瘟热病毒(CDV)F1蛋白,本研究通过RT-PCR扩增了CDV HLJ2-07株F1基因,并将其克隆至pET-30a(+)载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下获得大小约为47.5ku以包涵体形式表达的F1重组蛋白,重组蛋白占菌体总蛋白31.5%。Western blot分析表明,表达产物能够被兔抗CDV阳性血清所识别,具有良好的抗原性。间接ELISA检测表明,重组蛋白与犬细小病毒、犬副流感病毒、犬传染性肝炎病毒及犬波特氏杆菌等疾病的阳性血清无交叉反应。本研究为进一步建立检测CDV抗体间接ELISA方法及研制F1蛋白亚单位疫苗奠定了基础。
- 江勇姜骞林欢刘家森郭东春韩凌霞司昌德曲连东
- 关键词：犬瘟热病毒抗原性
- 空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌双重PCR鉴别检测方法的建立被引量：6
- 2016年
- 为快速检测和鉴定空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌,本研究设计并合成了空肠弯曲杆菌马尿酸酶基因hipO和结肠弯曲杆菌cdtC基因的2对特异性引物,建立并优化了快速检测空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌的双重PCR方法。结果显示,双重PCR对空肠弯曲杆菌hipO基因和结肠弯曲杆菌cdtC基因的扩增产物的大小分别为653bp和313bp。PCR扩增条件最终确定为退火温度为52℃,dNTP终浓度为0.4mmol/L,hipO和cdtC基因引物的终浓度均为2 5μmol/L。该双重PCR的灵敏度可达到6.6 8×1 0-2μg/mL,对多杀性巴氏杆菌、产单核细胞李氏杆菌、产气荚膜梭菌、伤寒沙门菌和金黄色葡萄球菌扩增均无目的条带,说明该PCR方法具有良好的灵敏性和特异性。符合试验结果与单一PCR方法结果相同。用所建立的方法对本实验室采集的鸡肛拭子划线培养后的可疑菌落进行PCR鉴定,结果显示2株为空肠弯曲杆菌,2株为结肠弯曲杆菌。结果表明,本研究建立的双重PCR可以用于同时检测空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌。
- 孙久鹤郭东春李安刘家森刘春国刘大飞侯振中曲连东
- 关键词：空肠弯曲杆菌双重PCR
- 环介导等温扩增技术在兔出血症病毒检测中的应用被引量：7
- 2013年
- 根据GenBank中的中国兔出血症病毒(RHDV)分离株VP60基因保守序列设计合成了内、外2对引物,在Bst DNA聚合酶的作用下完成等温核酸扩增反应,对反应条件逐一优化,并对临床样品进行检测。结果表明,该方法简便、快速、特异性好,灵敏性较常规反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)高100倍。该方法可同时扩增7株RHDV中国分离株,说明其对检测国内RHDV分离株的有效性。对15份临床样品的检测结果显示,环介导等温扩增(LAMP)阳性检出率达80%,RT-PCR检测阳性率为60%。该LAMP方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便快速、不需要复杂仪器设备、便于肉眼观察等优点,可作为临床检测RHDV的新方法,适合国内基层和实验室对RHDV的快速检测,具有广泛的推广应用价值。
- 原冬伟刘家森郭东春姜骞林欢司昌德曲连东
- 关键词：兔出血症病毒环介导等温扩增病毒检测
- 多杀性巴氏杆菌PurF蛋白的原核表达及多克隆抗体制备被引量：2
- 2013年
- 为了获得多杀性巴氏杆菌PurF蛋白及其多克隆抗体,通过PCR扩增了多杀性巴氏杆菌C51-17株purF基因,将其克隆到表达载体pPROEX-HTa中,构建重组表达质粒pHT-PurF,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达。SDS-PAGE检测表明,获得重组蛋白分子质量约56.5ku,主要以包涵体形式存在;Western blot检测表明,表达的蛋白可与多杀性巴氏杆菌制备的高免血清发生特异性反应。将制备的重组蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,ELISA检测血清抗体效价,结果显示制备的多克隆抗体滴度达到1∶128 000,Western blot表明可与多杀性巴氏杆菌PurF蛋白发生反应。本研究制备了多杀性巴氏杆菌的PurF蛋白及其多克隆抗体,为进一步研究PurF蛋白在多杀性巴氏杆菌致病中的作用奠定了基础。
- 张爱芹郭东春刘家森原冬伟姜骞林欢崔玉东曲连东
- 关键词：多杀性巴氏杆菌原核表达多克隆抗体
