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熊显荣: 作品数：102 被引量：216H指数：7; 供职机构：西南民族大学更多>>; 发文基金：中央高校基本科研业务费专项资金四川省科技支撑计划国家科技支撑计划更多>>; 相关领域：农业科学生物学文化科学更多>>

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麦洼牦牛Hoxa10基因克隆、原核表达及组织表达谱被引量：3: 2013年; 从麦洼牦牛肾脏组织提取总RNA,以已公布牛Hoxa10编码区序列设计引物,RT-PCR法克隆麦洼牦牛Hoxa10基因;构建原核表达载体pET-32a(+)-Hoxa10,并在大肠杆菌表达系统中表达,SDS-PAGE检测融合蛋白;采用RT-PCR检测该基因在麦洼牦牛各组织中的表达分布。结果表明:从麦洼牦牛肾脏中克隆Hoxa10基因的CDs区,大小为285bp,编码94个氨基酸残基,与牛、猪和绵羊的Hoxa10同源性高;经IPTG诱导,pET-32a(+)-Hoxa10在BL21中可表达1个大小约为28ku的特异蛋白;在牦牛各组织中,肾脏和肺脏中表达较高,但在心脏表达量极低或不表达。; 李宇熊显荣兰道亮宋虎李键; 关键词：HOX基因表达谱原核表达麦洼牦牛

一种牦牛养殖用栓系装置: 本实用新型提供了一种牦牛养殖用栓系装置，属于机械技术领域。它解决了现有的牦牛生产用简易拴系装置实用性不佳的问题。本牦牛养殖用栓系装置包括滑轨和位于滑轨内的滑块，滑块有若干块，滑块的两个相对的侧壁上均开设有盲孔，盲孔内插设...; 兰道亮熊显荣李键钟金城字向东陈有军; 文献传递

犏牛L-PGDS基因克隆及其在各组织和睾丸不同发育阶段的表达研究: 2020年; 本研究旨在克隆犏牛前列腺素D合成酶(prostagland D synthase,L-PGDS)基因序列,并检测其在不同组织及不同发育时期睾丸中的表达水平,从而为深入研究L-PGDS基因在犏牛睾丸发育过程中的作用机制提供依据。采集成年健康犏牛心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、大肠、小肠、胃、大脑及不同发育时期犏牛睾丸组织:胎牛期(5~6月)、幼年期(1~2岁)、青春期(2.5~4岁)、老年期(7~9岁),Trizol法提取各组织总RNA,利用RT-PCR技术扩增、克隆L-PGDS基因序列并利用相关生物学软件进行分析,利用实时荧光定量PCR检测犏牛各组织及4个不同发育阶段睾丸中L-PGDS基因mRNA的表达水平。结果显示,L-PGDS基因序列全长624 bp,包括完整的开放阅读框576 bp,编码191个氨基酸。同源性比对发现,犏牛与黄牛和绵羊的同源性最高,分别为99.28%和94.0%。系统进化树分析结果显示,犏牛与黄牛亲缘关系最近,其次是绵羊、马。L-PGDS蛋白为不稳定疏水蛋白,分子质量为21.229 ku,分子式为C953H1471N251O281S9,等电点为6.43,不稳定指数为47.25,不含跨膜区及信号肽,蛋白质二级结构预测显示α-螺旋、无规则卷曲、延伸链分别占25.65%、53.40%和20.94%。实时荧光定量PCR检测结果显示,L-PGDS基因在犏牛睾丸组织中特异性高表达,极显著高于其他组织(P<0.01);随着年龄增长L-PGDS基因mRNA在犏牛睾丸中呈先上升后下降趋势,其中在青春期相对表达量最高,极显著高于其他时期(P<0.01)。本研究结果为深入探究L-PGDS基因在犏牛睾丸发育过程中的作用机制提供了基础资料。; 穆松银熊显荣马鸿程海卓李键; 关键词：犏牛睾丸组织表达谱

牦牛雌激素受体ERα和ERβ基因分子特征及组织表达研究被引量：7: 2014年; 为研究牦牛雌激素受体(ERα和ERβ)基因序列特征及其在不同组织中的表达差异.根据NCBI上已公布的普通牛ERα和ERβ基因序列,设计特异性引物,利用RT-PCR技术克隆麦洼牦牛ERα和ERβ基因序列,同时利用荧光定量PCR技术检测ERα和ERβ基因在牦牛不同组织的表达分布.结果表明,分别获得2 100 bp ERα(Gen Ban K登录号:KJ011123)和1 791 bp ERβ(Gen Ban K登录号:KJ011124)基因序列,其中ERα的ORF为1 658 bp,编码596个氨基酸,ERβ的ORF为1 584 bp,编码527个氨基酸.多重序列分析表明,牦牛ERα和ERβ与普通牛、原鸡、人、小鼠、大鼠、扬子鳄、蟾蜍及斑马鱼的氨基酸序列同源性分别为45.3%-99.5%和53.9%-99.1%.荧光定量PCR结果显示,ERα和ERβ基因在牦牛的各种组织中均有表达,且除睾丸外,ERα在输卵管、子宫及乳腺中的表达高于ERβ.此外,就ERα而言,ERα在牦牛乳腺中表达最高,子宫、输卵管及卵巢次之,心、肝、脾、肺、肾及睾丸相对表达较低.而牦牛ERβ基因在卵巢中表达最高,子宫和输卵管次之,心、肝、脾、肺、肾、睾丸及乳腺表达较低.为进一步了解牦牛ERα和ERβ基因的生物学功能及其分子繁殖机制提供了基础.; 李键符梅兰道亮熊显荣; 关键词：牦牛基因特征

多胎和单胎山羊品种Bcl-2和Bax基因的克隆及组织表达研究被引量：5: 2015年; 以低繁藏山羊和高繁金堂黑山羊卵巢等组织为试验材料,通过RT-PCR,对Bcl-2和Bax基因c DNA进行克隆、序列分析,并采用Real-time PCR对其在发情前期母羊垂体、卵巢、子宫和输卵管等组织的表达进行检测。结果:山羊Bcl-2基因编码区全长为690 bp,共编码229个氨基酸,2个品种间有3处碱基差异,但未导致氨基酸的差异;Bax基因编码区全长为579 bp,共编码192个氨基酸,2个品种的同源性为100%。Bcl-2和Bax mRNA在2个品种山羊的卵巢、子宫、输卵管、垂体中均有表达,但品种间差异不显著(P>0.05)。说明Bcl-2和Bax基因在动物进化中比较保守,与山羊多羔性状的相关性有待进一步研究。; 胡亮字向东卢建远马力熊显荣王永任称罗尔日任陶; 关键词：藏山羊金堂黑山羊 BAX

一种适用于牦牛体外受精与胚胎移植的操作台: 本实用新型涉及生物科技技术领域，具体为一种适用于牦牛体外受精与胚胎移植的操作台，包括装置主体，所述装置主体包括操作台面，所述操作台面底端的四个拐角处皆固定安装有装置支撑腿，所述操作台面的底端通过安装支架固定安装有控制面板...; 兰道亮吉文汇熊显荣朱江江泽让东科; 文献传递

牦牛IGF-Ⅱ干扰载体的构建及其转染对睾丸支持细胞的影响: 2020年; 旨在构建干扰胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor-Ⅱ, IGF-Ⅱ)的重组质粒载体,研究IGF-Ⅱ对牦牛睾丸支持细胞的影响。本研究设计并合成针对牦牛IGF-Ⅱ的shRNA寡核苷酸,并将其克隆至pLKO.1质粒载体上,转染牦牛睾丸支持细胞后经嘌呤霉素筛选获得稳定的细胞株,并采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法检测IGF-Ⅱ基因和蛋白的表达,采用细胞生长分析仪分析支持细胞的增殖凋亡情况。结果显示,干扰牦牛IGF-Ⅱ表达的pLKO.1质粒载体构建成功,其可在睾丸支持细胞中稳定表达,且能有效抑制IGF-Ⅱ基因的表达。与对照组相比,pLKO.1-shRNA2的干扰效率最显著,IGF-Ⅱ的表达量下调至19.1%(P<0.05),且pLKO.1-shRNA2可使内源性IGF-Ⅱ蛋白的表达量减少76.3%(P<0.05)。pLKO.1-shRNA2质粒转染及筛选得到的稳定细胞株培养48 h后的细胞分裂增殖活性显著低于对照组(P<0.05)。qRT-PCR结果显示,干扰内源性IGF-Ⅱ后,睾丸支持细胞中的IGF-Ⅰ和IGF-ⅡR基因表达出现了显著的上调(P<0.05),IGF-IR与Bcl-2的表达出现了显著的下调(P<0.05)。综上表明,牦牛IGF-Ⅱ干扰质粒构建成功,其转染至牦牛睾丸支持细胞有效抑制了IGF-Ⅱ的表达,改变了IGF-IR与Bcl-2的表达模式,潜在影响了牦牛支持细胞的分裂增殖,具体作用机制有待进一步研究。; 张磊阿果约达谢拉准吴锦波李键熊显荣; 关键词：牦牛支持细胞细胞增殖

牦牛PIK3CB基因克隆及其在卵泡发育过程中的表达研究被引量：2: 2021年; 旨在探讨磷脂酰肌醇-3激酶催化亚基β(Phosphoinositide-3 kinase,PI3K,catalytic subunit beta,PIK3CB/P110β)基因序列特征,比较分析其在牦牛不同发育阶段卵泡中的表达规律。通过RT-PCR技术从牦牛卵巢组织中克隆获得PIK3CB基因序列并对其进行生物信息学分析;采用RT-qPCR方法检测PIK3CB基因在牦牛不同组织中的表达水平;将采集的牦牛卵泡根据直径大小分为大(≥7 mm)、中(3.0~6.9 mm)、小(≤2.9 mm)3组,分别收集各组卵泡中的壁颗粒细胞及卵母细胞提取总RNA,采用RT-qPCR方法检测PIK3CB mRNA在各级别卵泡壁颗粒细胞及卵母细胞中的相对表达量。结果显示:克隆获得牦牛PIK3CB基因CDS区长3213 bp,共编码1070个氨基酸。蛋白质分析显示,PIK3CB蛋白为亲水酸性蛋白,无跨膜结构无信号肽,二级结构主要由α-螺旋和无规卷曲组成。PIK3CB核苷酸同源性及遗传进化树分析显示,牦牛与野牦牛和黄牛亲缘关系最近。PIK3CB基因在牦牛心脏、脾脏、肾脏、肌肉、肝脏、肺脏、子宫、胃、小肠、卵巢组织中均有表达,尤其在脾脏、子宫和卵巢组织中表达量显著高于其他组织(P<0.05)。RT-qPCR结果显示,PIK3CB基因在卵泡发育过程中均有表达,其中在各级别卵泡壁颗粒细胞中,mRNA表达量随着卵泡发育进程呈现上升趋势,且大、中级别卵泡中的表达量极显著高于小卵泡组(P<0.01);但是卵母细胞中mRNA表达量差异不显著(P>0.05)。结果提示,mRNA基因参与了牦牛卵泡发育调控,是PI3K信号通路在调节颗粒细胞的功能中不可或缺的催化亚基之一,具体调控机制有待进一步研究。本研究为深入探讨PI3K-AKT信号通路在卵巢发育中的调控机理提供基础资料。; 马鸿程熊显荣王晗海卓闵星宇李键; 关键词：牦牛卵泡

牦牛KAT8基因在组织及卵泡发育过程中的表达被引量：2: 2021年; 探究组蛋白乙酰化酶8(KAT8)在牦牛卵泡发育及卵母细胞成熟过程中的表达规律,为深入探讨KAT8在雌性牦牛生殖过程中的作用机制提供参考。采集3~5周岁成年未妊娠母牦牛卵巢,分离培养出生发泡时期(GV)、第1次减数分裂中期(MⅠ)和第2次分裂中期(MⅡ)的卵母细胞,分别提取上述3个时期卵母细胞总RNA,反转录获得cDNA。以卵巢cDNA为模板,采用分段扩增方法,利用RT-PCR技术克隆牦牛KAT8基因编码区(CDS)序列,运用相关生物信息学分析软件预测KAT8编码蛋白的结构功能。利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测KAT8 mRNA在牦牛卵巢、肾脏、胃、小肠、肌肉、心脏、子宫、脾脏、肺脏和肝脏组织及GV、MⅠ、MⅡ期卵母细胞中的相对表达量,采用免疫组织化学技术分析KAT8在牦牛卵泡发育不同时期的表达定位。结果显示,克隆出牦牛1938 bp KAT8基因,其中CDS区全长为1377 bp,共编码458个氨基酸。物种进化树结果表明,牦牛与黄牛、野牛、绵羊及山羊的核苷酸序列同源性较高,分别为99.64%,99.27%,98.33%,98.04%。KAT8在牦牛各组织中广谱表达,肌肉、心脏和卵巢中的表达量相对较高,极显著高于其他7个组织(P<0.01),其中肌肉和心脏中的相对表达量显著高于卵巢组织(P<0.05)。免疫组织化学检测发现,KAT8在各发育阶段的牦牛卵泡中均有表达,主要定位于卵母细胞及颗粒细胞,卵泡膜细胞中表达相对较少。在卵母细胞减数分裂过程中,KAT8表达水平呈下降趋势,GV期卵母细胞KAT8 mRNA表达量相对较高,但与MⅠ和MⅡ期均无显著性差异(P>0.05)。KAT8基因在遗传进化过程中高度保守,并在牦牛卵泡发育及卵母细胞减数分裂进程中呈现动态表达模式,提示KAT8参与卵泡发育及卵母细胞减数分裂成熟过程。; 海卓熊显荣马鸿程张贺闵星宇张贺; 关键词：牦牛组蛋白乙酰化组织表达谱卵泡发育卵母细胞

牦牛卵巢小RNA高通量测序及生物信息学分析被引量：8: 2016年; 本研究旨在利用高通量测序技术描绘牦牛卵巢sRNA图谱,为探析牦牛繁殖性能提供基础。以牦牛卵巢组织作为研究对象,构建牦牛sRNA文库,进行高通量测序和生物信息学分析,最后利用RT-qPCR技术验证miRNA在牦牛卵巢组织中的表达。经测序后得到包含12 126 208条clean reads,其中特异序列为212 757条;比对分析显示,只有7 383 536(60.89%)条总序列及80 981(38.06%)条特异序列能与牦牛基因组匹配。与黄牛相比,牦牛sRNA中有56个表达量上调,其中miR-135a表达上调最显著;有33个表达下调,其中miR-2316表达下调最显著。RT-qPCR验证6个miRNA在牦牛卵巢组织中的表达情况,定量结果和测序结果基本一致。与牦牛EST序列信息比对后共预测出5个新miRNA。本研究成功绘制牦牛卵巢sRNA图谱,同时证实RNA-Seq高通量测序技术在完善sRNA信息及挖掘新miRNA方面的优势,对研究sRNA在牦牛遗传育种以及以牦牛为重要高原动物模型来进行高原适应性和抗逆性等相关领域的研究具有重要意义。; 熊显荣兰道亮李键字向东林亚秋马力; 关键词：牦牛卵巢高通量测序小RNA 生物信息学

熊显荣

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