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符梅: 作品数：13 被引量：35H指数：5; 供职机构：西南民族大学生命科学与技术学院更多>>; 发文基金：国家科技支撑计划中央高校基本科研业务费专项资金国家公益性行业科研专项更多>>; 相关领域：农业科学生物学更多>>

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牦牛雌激素受体ERα和ERβ基因分子特征及组织表达研究被引量：7: 2014年; 为研究牦牛雌激素受体(ERα和ERβ)基因序列特征及其在不同组织中的表达差异.根据NCBI上已公布的普通牛ERα和ERβ基因序列,设计特异性引物,利用RT-PCR技术克隆麦洼牦牛ERα和ERβ基因序列,同时利用荧光定量PCR技术检测ERα和ERβ基因在牦牛不同组织的表达分布.结果表明,分别获得2 100 bp ERα(Gen Ban K登录号:KJ011123)和1 791 bp ERβ(Gen Ban K登录号:KJ011124)基因序列,其中ERα的ORF为1 658 bp,编码596个氨基酸,ERβ的ORF为1 584 bp,编码527个氨基酸.多重序列分析表明,牦牛ERα和ERβ与普通牛、原鸡、人、小鼠、大鼠、扬子鳄、蟾蜍及斑马鱼的氨基酸序列同源性分别为45.3%-99.5%和53.9%-99.1%.荧光定量PCR结果显示,ERα和ERβ基因在牦牛的各种组织中均有表达,且除睾丸外,ERα在输卵管、子宫及乳腺中的表达高于ERβ.此外,就ERα而言,ERα在牦牛乳腺中表达最高,子宫、输卵管及卵巢次之,心、肝、脾、肺、肾及睾丸相对表达较低.而牦牛ERβ基因在卵巢中表达最高,子宫和输卵管次之,心、肝、脾、肺、肾、睾丸及乳腺表达较低.为进一步了解牦牛ERα和ERβ基因的生物学功能及其分子繁殖机制提供了基础.; 李键符梅兰道亮熊显荣; 关键词：牦牛基因特征

牦牛β-防御素5基因的原核表达及乳腺特异性表达载体的构建: 本研究以牦牛β-防御素5基因为研究对象，分别对牦牛β-防御素5基因进行原核和真核表达研究。原核表达以pET-32a（+）为表达载体，将构建好的重组原核表达载体转化大肠杆菌BL21（DE3）进行表达，检测其重组蛋白的体外抑...; 符梅; 关键词：牦牛原核表达; 文献传递

麦洼牦牛乳腺上皮细胞系的建立及其生物学特性: 2013年; 为建立麦洼牦牛乳腺上皮细胞的体外培养方法，采用组织块贴壁法及Ⅰ型胶原酶消化法，从麦洼牦牛乳腺组织中成功分离并获得纯化的乳腺上皮细胞，并利用细胞角蛋白18的免疫荧光染色对乳腺上皮细胞进行鉴定。; 符梅熊显荣高川; 关键词：麦洼牦牛生物学特性牦牛乳体外培养方法胶原酶消化法免疫荧光染色

金川多肋牦牛HOXC10基因的克隆、序列分析及组织表达: 2014年; 旨在克隆牦牛HOXC10基因,并进一步分析该基因的结构与功能以及揭示其组织特异性表达规律。以金川多肋牦牛为材料,根据GenBank已公布的绵羊HOXC10基因序列设计引物,采用RT-PCR技术对HOXC10基因的cDNA全长进行扩增,并对其进行生物信息学分析及在各组织中的表达谱。对测序结果进行生物信息学分析表明,扩增的牦牛HOXC10基因长度是1 272bp,其中包含一个1 029 bp的开放阅读框,共编码342个氨基酸;同源性分析表明,牦牛与黄牛的相似性较高,为93.2%;预测HOXC10蛋白质的分子量为38.2 kD,理论等电点为8.45;进化树分析显示,牦牛与黄牛的亲缘关系最近,处于同一个分支上;组织表达谱分析表明,该基因在牦牛各组织中均有不同程度的表达,其中在肝脏中的表达量最高,胃中的表达量最低。; 张亚南熊显荣兰道亮符梅张雁侯定超马定美李善荣李键; 关键词：牦牛克隆

供体细胞来源和TSA处理对牦牛iSCNT胚胎重编程的影响被引量：5: 2012年; 【目的】探讨不同来源的供体细胞和TSA处理对牦牛异种体细胞核移植(Interspecies nuclear trans-fer,iSCNT)胚胎的影响。【方法】以黄牛卵母细胞为受体,分别以牦牛50日龄胎儿及6和18月龄个体成纤维细胞为供体,构建牦牛iSCNT胚胎,研究供体细胞来源对牦牛iSCNT胚胎的影响。分别用0(对照),20,40,60和80nmol/L的TSA处理50日龄胎儿成纤维细胞12h,构建iSCNT胚胎,比较其发育情况,确定TSA的最佳处理浓度;用最佳浓度的TSA处理50日龄胎儿成纤维细胞0(对照),6,12和18h,构建iSCNT胚胎,比较其发育情况,确定TSA的最佳处理时间。用最佳TSA作用时间和浓度处理供体细胞,构建牦牛iSCNT,之后用40和80nmol/L的TSA分别处理iSCNT胚胎6和12h,比较不同处理方式对牦牛iSCNT胚胎发育的影响。采用qRT-PCR方法检测40nmol/L TSA处理供体细胞6h的iSCNT胚胎及40nmol/L TSA处理供体细胞6h且处理iSCNT胚胎12h的iSCNT胚胎去乙酰化酶2(HDAC2)基因mRNA的表达水平,以不进行TSA处理的iSCNT胚胎为对照。【结果】以50日龄胎儿成纤维细胞作为供体细胞,牦牛iSCNT胚胎的囊胚率最高,但与其他组差异不显著(P>0.05)。40nmol/L TSA处理供体细胞6h能显著提高牦牛iSCNT胚胎的囊胚率(30.6%),且与对照组差异显著(P<0.05)。用40nmol/L TSA处理牦牛iSCNT胚胎12h组的囊胚率高于80nmol/L TSA处理iSCNT胚胎6h组,2组间差异不显著(P>0.05)。用TSA处理供体细胞和iSCNT胚胎之后,HDAC2mRNA表达水平降低,且与对照组差异显著(P<0.05)。【结论】不同来源的供体细胞对iSCNT胚胎发育的影响不明显;40nmol/L TSA处理供体细胞6h和iSCNT胚胎12h能显著提高牦牛iSCNT胚胎体外发育及重编程能力。; 熊显荣高川符梅李键字向东钟金城; 关键词：牦牛异种核移植

麦洼牦牛乳腺上皮细胞系的建立及其生物学特性被引量：2: 2012年; 为建立麦洼牦牛乳腺上皮细胞的体外培养方法,采用组织块贴壁法及Ⅰ型胶原酶消化法,从麦洼牦牛乳腺组织中成功分离并获得纯化的乳腺上皮细胞,并利用细胞角蛋白18的免疫荧光染色对乳腺上皮细胞进行鉴定。通过细胞生长曲线、群体倍增时间、细胞接种存活率、细胞活力等生物学特性的检测,建立并鉴定麦洼牦牛乳腺上皮细胞系。结果显示,乳腺细胞形态良好,细胞接种存活率达91%,群体倍增时间26.97h,细胞生长曲线呈典型"S"型,细胞传至25代以上仍保持旺盛的增殖活力。可见,通过对细胞传代及反复冻存和复苏已成功建立麦洼牦牛乳腺上皮细胞系,获得大量的乳腺上皮细胞,使麦洼牦牛物种在细胞水平上得以保存,为建立牦牛乳腺生物反应器及泌乳调控机制研究提供基础。; 符梅熊显荣高川李宇王树茂李键; 关键词：麦洼牦牛乳腺上皮细胞生物学特性

牦牛β-防御素5基因的原核表达及表达产物的抑菌活性被引量：2: 2014年; 【目的】克隆与表达牦牛β-防御素5(BNBD5)基因,检测其重组蛋白的体外抗菌活性。【方法】采用RT-PCR方法从牦牛肺组织中扩增BNBD5基因成熟肽编码区,根据已发现的哺乳动物β-防御素5和部分禽β-防御素5的序列构建遗传进化树。将BNBD5基因亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)的BamHⅠ和XhoⅠ双酶切位点上,构建重组表达质粒pET32a-BNBD5。将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21,用IPTG于37℃进行诱导表达,SDSPAGE检测融合蛋白的表达情况,并对该重组蛋白进行纯化,测定其体外抑菌活性。【结果】克隆得到了BNBD5基因成熟肽编码片段,其长度为138bp,编码45个氨基酸残基,内含6个位置保守的半胱氨酸残基。经遗传进化分析发现,该基因序列与黄牛的mRNA同源性最高,可达到86.2%。经IPTG诱导,获得了分子质量为25ku的牦牛β防御素-5成熟肽融合蛋白。琼脂糖扩散结果表明,0.08mg/mL的纯化蛋白对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌均有抗菌作用。【结论】牦牛BNBD5成熟肽在大肠杆菌中得到了成功表达,其产物对革兰氏阴性菌(大肠杆菌)和革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌)均有抗性。; 符梅熊显荣兰道亮李键; 关键词：牦牛重组蛋白抑菌活性

快速检测猪嵴病毒的荧光定量PCR试剂盒及应用: 本发明公开了一种用于检测猪嵴病毒的SYBRGreen<Image file="2013105215448100004DEST_PATH_IMAGE002.GIF" he="5" imgContent="undefined...; 兰道亮陈亚冰李键熊显荣符梅王长松华修国; 文献传递

NOBOX基因在麦洼牦牛卵母细胞、早期胚胎及胎儿卵巢的表达被引量：5: 2014年; 旨在研究牦牛胚胎发育过程中NOBOX基因表达与卵母细胞、胚胎发育及胎儿卵巢的关系。利用RTPCR技术检测NOBOX基因在颗粒细胞、牦牛胎儿卵巢及牦牛各组织中的表达;并采用荧光定量PCR技术检测NOBOX基因在卵母细胞体外受精胚胎发育过程中(GV期、MII期、2-细胞、4-细胞、8-细胞、16-细胞、桑椹胚和囊胚)的相对表达变化。结果表明,NOBOX基因在牦牛各组织中均有表达,其中肾表达量最高。在GV期卵泡中,NOBOX基因仅在卵母细胞中有表达,颗粒细胞中未检测到表达。早期胚胎发育过程中,随着胚胎发育,其表达量逐渐降低,在GV期时表达量最高(P<0.05),随后逐渐降低,在16-细胞表达量最低并趋于稳定。胎牛发育成长过程中,NOBOX基因在胎儿卵巢中表达量随着胎儿年龄的增长表达呈上升趋势。综上表明,NOBOX基因在牦牛早期胚胎发育过程中mRNA表达量存在差异性,可能与早期胚胎的正常发育和不同的生理活动有关。; 符梅陈亚冰李键熊显荣兰道亮; 关键词：牦牛卵母细胞成熟早期胚胎发育胎儿卵巢

牦牛乳腺上皮细胞体外培养及鉴定被引量：2: 2015年; 本研究旨在建立牦牛乳腺上皮细胞系,并对建立的细胞系生物学特性进行鉴定,采用组织块种植法,分离培养乳腺上皮细胞;通过胰酶消化法纯化细胞;利用免疫荧光及Western blot技术对其进行鉴定;脂质体介导法将绿色荧光蛋白基因转染进乳腺上皮细胞中,荧光显微镜下检测绿色荧光蛋白基因表达;金黄色葡萄球菌侵染牦牛乳腺上皮细胞,流式细胞仪(AnnexinV/PI双染法)检测乳腺上皮细胞的凋亡,RT-PCR检测感染细胞中抗菌肽以及凋亡因子表达。结果表明,分离纯化获得牦牛乳腺上皮细胞,细胞角蛋白18表达呈阳性,波形蛋白表达呈阴性,证明培养的细胞是上皮细胞并且没有成纤维细胞污染;β-酪蛋白表达呈阳性,说明建立的乳腺上皮细胞具有一定的泌乳功能;荧光显微镜能够检测到绿色荧光蛋白表达,表明EGFP基因成功导入了乳腺上皮细胞;金黄色葡萄球菌感染牦牛乳腺上皮细胞3h后,Annexin V/PI双染法检测发现感染组细胞凋亡率明显升高,差异显著(P<0.05);感染细胞中TAP(P<0.01)、BNBD5(P<0.01)及BAX(P<0.01)表达量明显增高,BCL-2(P<0.05)表达量降低。综上表明,本研究成功建立了一株稳定的牦牛乳腺上皮细胞系,该细胞系能够作为研究牦牛乳腺发育及分化的体外研究模型。; 陈亚冰符梅兰道亮林宝山黄偲李键; 关键词：牦牛乳腺上皮细胞

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