石朔
- 作品数：11 被引量：15H指数：2
- 供职机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市教育委员会重点学科基金上海市科技人才计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- miR-143靶向抑制己糖激酶-2治疗乳腺癌的实验研究被引量：1
- 2014年
- 目的在乳腺癌细胞MDA-MB-231中验证miR-143靶向抑制己糖激酶-2(HK2)改变其能量代谢达到治疗作用,并探讨18F-氟代脱氧葡萄糖(18F-FDG)和3'-脱氧-3'-18F-氟代胸苷(18F-FLT)在评估其疗效中的价值。方法实验分为三组,实验组转染miR-143模拟物(miR-143 mimic),阴性对照组转染无义序列小RNA,空白组不做任何处理。通过qRT-PCR和Western blot分别检测治疗前后HK2 mRNA和蛋白表达水平的改变,检测葡萄糖代谢和乳酸生成速率的变化,MTT法检测细胞增殖活性的变化,测定细胞对18F-FDG和18F-FLT摄取的动态变化,判断两种示踪剂在评估其疗效中的价值。结果实验组HK2 mRNA和蛋白的表达均降低;葡萄糖消耗和乳酸生成速率、细胞增殖活性较阴性对照组明显下降。18F-FDG与18F-FLT分别孵育细胞30、60、90和120 min后,摄取呈时间依赖性递增的趋势,并且各时间点的18F-FLT摄取率均低于18F-FDG。30 min时,实验组18F-FDG摄取率明显低于阴性对照组(21.81±2.75 vs.36.71±4.36),差异具有统计学意义(P<0.05),此时两组摄取18F-FLT无明显差异(12.03±1.53 vs.15.23±2.31,P>0.05)。60 min时,18F-FDG与18F-FLT在两组中的摄取率均出现统计学差异(P<0.05)。结论 miR-143能靶向抑制HK2改变其能量代谢达到治疗作用,18F-FDG在评估其疗效中具有更好的价值。
- 苗莹张凌飞梁胜石朔刘默芳李彪
- 关键词：乳腺癌18F-FDG18F-FLT
- 双启动子杆状病毒介导131I肿瘤靶向治疗的实验研究
- 2014年
- 目的构建由人端粒酶逆转录酶（hTERT）启动子调控的N1S基因以及由早期生长应答因子1（Egr1）启动子调控的人纤溶酶原Kringle5（K5）基因的双启动子重组杆状病毒载体，探讨同时靶向肿瘤细胞与血管内皮细胞的基因治疗模式的可行性。方法将hTERT启动子和N1S基因片段以及Egr1启动子和麟基因片段分别亚克隆至杆状病毒载体，经草地贪夜蛾卵巢细胞（Sf9）包装并扩增得到重组杆状病毒（Bac—hTERT-N1S—Egr1-K5），同时将CMV启动子调控的重组杆状病毒（Bac—CMV-NIS—Egr1-K5）以及不含NIS基因或不含硒基因的重组杆状病毒（Bac—hTERT-O—Egrl-K5、Bac-hTERT-NIS—Egr1-0）作为对照组。采用荧光定量PCR及Westernblot分析NISmRNA和蛋白在人宫颈癌细胞HeLa中的靶向表达，以及131I辐射对K5mRNA和蛋白的表达调控。通过摄碘实验、NaClO4抑制实验以及细胞增殖抑制实验验证NIS蛋白的功能及由其介导的131I抑瘤作用。通过细胞凋亡实验评估K5蛋白对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的促凋亡作用。统计学检验采用方差分析。结果成功构建重组杆状病毒Bac—hTERT-NIS—Egr1-K5。荧光定量PCR及Westernblot显示肿瘤特异性启动子hTERT介导的NIS基因仅在HeLa细胞中有表达，而在正常肺纤维细胞MRC5中无表达。131I可以调控辐射敏感启动子Egr1下游您基因的转录和翻译。细胞摄碘实验显示Bac-hTERT-NIS—Egr1-K5感染的HeLa细胞摄碘增加了5．6倍，与未加NaClO4组比，其摄碘能被NaClO4显著抑制（F=199．296，P〈0．05）。131I对Bac—hTERT-NIS—Egr1-K5感染的HeLa细胞的抑制效果明显，细胞存活率仅为38．3％。Bac—hTERT-NIS—Egrl一K5感染的HUVEC细胞在131I照射下的凋亡率（30．8％）显著高于Bac．hTERT-NIS—Egr1-0组和未加病毒组（11．2％和10．9％，F=19．926、45．409，均P〈0．05）。结论重组杆状病毒Bac-hTERT-NIS—Egrl．K5可使NIS基因在肿瘤细胞�
- 张敏郭睿石朔苗莹徐昊平李彪
- 关键词：末端转移酶钠碘转运体碘放射性同位素
- 氯化钴诱导心肌细胞化学性缺氧HIF-1α表达的研究被引量：8
- 2013年
- 目的：观察不同浓度的氯化钴（CoCl2）对H9C2心肌细胞的影响及其诱导化学性缺氧的最佳浓度和时间。方法：用100、300、600、900、1200μmol／L的CoCI2处理H9C2心肌细胞，建立化学性缺氧诱导心肌细胞损伤的实验模型，分别于12、18、24、36、48h用Hoechst33342细胞核染色法检测心肌细胞凋亡：CCK-8试剂盒检测心肌细胞存活率；确定最佳诱导浓度600μmol／L后，分别于0、3、6、9、12、18、24、36、48h采用蛋白印迹法检测缺氧诱导因子1α（HIF-1α）蛋白的表达；确定最佳诱导时间后，用蛋白印迹法检测100、300、600、900、1200μmol／LCoCl2处理H9C2心肌细胞12h后HIF-1α蛋白的表达情况。结果：在600～1200μmo1／L浓度范围内，CoCl2呈剂量依赖性地抑制H9C2心肌细胞的存活。600μmol／LCoCl2诱导12h后H9C2心肌细胞产生明显凋亡．诱导12～48h范围内．12h时H9C2心肌细胞表达的HIF-1α蛋白最高：100～1200μmoI／LCoCl2诱导H9C2心肌细胞12h．其中600μmol／LCoCl2诱导时H9C2心肌细胞表达的HIF-α蛋白最高。结论：CoCl2诱导H9C2心肌细胞化学性缺氧的最佳浓度为600μmol／L．此时最佳时间为12h。
- 石朔王利华郭睿张敏苗莹张淼李彪
- 关键词：氯化钴化学性缺氧缺氧诱导因子1ΑH9C2心肌细胞
- 促血管生成因子在治疗缺血性心脏病中的应用
- 2013年
- 缺血性心脏病严重危害着人类的健康，目前使用的常规治疗方法仍无法修复坏死的心肌，达到满意的治疗效果。基因治疗尤其是促血管生成因子的治疗为此类疾病的治愈带来了希望。该文就促血管生成因子基因治疗缺血性心脏病的研究进展进行综述。
- 石朔李彪
- 关键词：心肌缺血血管生成诱导剂基因疗法
- 经钠碘同向转运体监测骨髓间充质干细胞向颅内脑胶质瘤迁移的实验研究被引量：4
- 2015年
- 目的通过制备携带NIS及EGFP基因的重组慢病毒并转染骨髓间充质干细胞（BMSCs），探讨NIS基因监测BMSCs向颅内脑胶质瘤迁移的可行性。方法将NIS及EGFP基因片段分别亚克隆至慢病毒载体pLVX-puro，制备慢病毒pLVX-CMV-NIS-EGFP，同时构建对照组慢病毒pLVX-CMV-O-EGFP。分离培养BMSCs，转染后经嘌呤霉素筛选，得到稳定干细胞株BMSCs-NIS-EGFP及对照组干细胞株BMSCs-EGFP。Westernblot分析NIS蛋白在细胞中的表达。通过摄碘实验、NaClO4抑制实验验证NIS蛋白的功能。制备裸鼠颅内脑胶质瘤模型，经尾静脉注入BMSCs-NIS-EGFP，24h后行125^ImicroSPECT显像，观察N1S作为报告基因监测BMSCs-NIS-EGFP向颅内脑胶质瘤迁移的情况。结果成功构建并制备重组慢病毒pLVX-CMV-NIS-EGFP及pLVX-CMV一0-EGFP，完成BMSCs的分离培养。病毒转染经嘌呤霉素筛选得到稳定干细胞株BMSCs-NIS-EGFP及BMSCs-EGFP。Westernblot显示NIS基因在BMSCs-NIS-EGFP中大量表达．而在BMSCs-EGFP中无表达。细胞摄碘实验显示BMSCs-NIS-EGFP细胞具有摄碘功能，30min摄碘峰值是对照组BMSCs．EGFP细胞的近10倍，且其摄碘可被NaClO4显著抑制。成功制备裸鼠脑胶质瘤模型，面crosPEcT显像显示颅内脑胶质瘤部位有明显的125^I放射性摄取增高。结论重组慢病毒pLVX-CMV-N1S．EGFP可使NIS基因在BMSCs中表达并介导125^I的摄取，NIS基因可有效监测BMSCs向颅内脑胶质瘤的迁移，这为开展以BMSCs为载体、由NIS介导的脑胶质瘤基因靶向治疗奠定了基础。
- 石朔张敏郭睿苗莹李彪
- 关键词：神经胶质瘤钠碘转运体发射型计算机单光子
- miR-143靶向调控己糖激酶-2治疗碘难治性分化型甲状腺癌的分子影像研究
- 苗莹郭睿张敏石朔李彪
- 重组HIF—1α及NIS慢病毒表达载体的构建及功能鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的构建肌凝蛋白轻链-2（MLC-2v）启动下HIF-1α及人NIS慢病毒真核表达载体，探讨外源基因在心肌细胞中的特异性表达和NIS作为报告基因的可行性。方法应用基因重组技术构建慢病毒（Lv）-延长因子（EF）1-HIF-1α-内部核糖体进入位点（IRES）-NIS及Lv-MLC-HIF-1α-IRES-NIS慢病毒表达载体。对重组质粒进行酶切、测序鉴定后，采用脂质体转染法将重组质粒转入Hela细胞。细胞免疫荧光及Westernb1a分别验证HIF-1α及NIS蛋白在细胞中的定位及定量表达；制备重组病毒，分别以不同的感染复数（MOI）感染H9C2大鼠心肌细胞、NIH-3T3小鼠胚胎成纤维细胞和L6大鼠骨骼肌成肌细胞，Westernb1a确定最佳MOI并验证MLC·2v启动子的特异性；分别行H9C2细胞动态摄碘和NaClO4抑制实验。采用两样本t检验分析数据。结果成功构建Lv-EFl-HIF-1a-IRES-NIS及Lv-MLC-HIF-1α-IRES-NIS慢病毒表达载体。2种质粒分别转染Hela细胞，免疫荧光显示HIF-1α蛋白表达于胞质，NIS蛋白表达于胞膜；Westernb1a显示EFl启动下2种蛋白质的表达量多于MLC-2v启动下相应表达。Westernb1a蛋白检测后测定蛋白灰度值，阳性对照组NIS及HIF-1α灰度值分别为69-8和71-9，EF1启动下分别为109-4和92-7，MLC-2v启动下分别为141-9和132-4。Lv-MLC-HIF-1α-IRES-NIS病毒感染H9C2细胞，MOI为20时NIS蛋白表达最高，为最佳MOI。2种病毒以MOI为20分别感染H9C2、NIH-3T3及L6细胞，Westernb1a显示EF1启动下NIS蛋白在3种细胞中均有表达，灰度值分别为23.4、29.8和28.6，相差较小。MLC-2v启动下仅H9C2细胞中有大量NIS蛋白表达，NIS蛋白在H9C2、L6及NIH-3T3细胞的灰度值分别为157.9、178.8和2173。H9C2细胞的摄碘高峰时间为40min，峰值为4287.2计数·min-1，是阴性对照组（254.g计数·min-1）的16.85倍（t=5.34，P〈0.01）。摄碘可被NaC国O4抑制，抑制率达85.5％（t=21.3，P〈0.01）。结论MLC-2v可启动治疗基因HIF
- 石朔郭睿王利华张敏张淼苗莹李彪
- 关键词：缺氧诱导因子1Α亚基碘转运体
- 钠碘同向转运体慢病毒介导188Re靶向治疗宫颈癌的实验研究
- 张敏石朔郭睿苗莹李彪
- 治疗基因VEGF_(165)和报告基因NIS共表达载体的构建和鉴定
- 2011年
- 目的:利用内部核糖体进入位点(IRES)序列,构建含有血管内皮生长因子(VEGF165)和人钠碘同向转运体(NIS)的真核双表达载体pIRES-VEGF165-NIS,并在体外检测NIS蛋白和VEGF165蛋白在HEK293细胞中的表达。方法:采用聚合酶链反应(PCR)扩增得到目的基因VEGF165和NIS,通过酶切将其连接克隆至pIRES载体以构建pIRES-VEGF165-NIS质粒,再通过脂质体将构建好的质粒转染入HEK293细胞,并采用蛋白印迹法和免疫荧光法检测VEGF165和NIS蛋白的表达。结果:成功构建了双基因双表达载体pIRES-VEGF165-NIS,且其受巨细胞病毒(CMV)极早期基因启动子调控。蛋白印迹法检测显示,VEGF165和NIS可同时在HEK293细胞中表达,而免疫荧光显示转染的HEK293细胞可同时表达VEGF165蛋白和NIS蛋白。结论:IRES序列调控VEGF165和NIS双基因可在细胞中同时独立表达,为进一步构建双基因表达重组腺病毒,并利用人NIS作为报告基因,实时监测VEGF165治疗基因的表达和分布奠定基础。
- 王利华张淼石朔郭睿李彪
- 关键词：治疗基因报告基因钠碘同向转运体共表达
- 治疗基因VEGF和报告基因NIS共表达载体的构建和鉴别
- 目的通过引入内部核糖体进入位点(IRES)序列,构建含有血管内皮生长因子(VEGF_(165))和人钠碘同向转运体(hNIS)的真核分泌载体pIRES-VEGF-NIS。体外检测NIS蛋白和VEGF蛋白在HEK293细胞...
- 王利华张淼石朔
