韩秀杰
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 供职机构：浙江农林大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 日本脑炎病毒prM蛋白的表达及免疫原性分析被引量：2
- 2014年
- 日本脑炎是一种由日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)引起的、经虫媒传播并可导致母猪流产的急性病毒性传染病。JEV的M蛋白参与病毒的感染过程且能诱生具有轻度中和作用的抗体。本研究提取JEV上海分离株的基因组RNA,反转录合成cDNA,RT-PCR扩增该病毒的prM基因片段,亚克隆到原核表达载体pET-28(a)上,构建重组原核表达质粒pET-28(a)-JEV-prM,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,IPTG诱导表达重组his-JEV-prM蛋白,SDS-PAGE结果表明,获得分子量大小为24 ku的重组蛋白,主要以包涵体形式表达,薄层扫描分析表明,表达量占总菌体蛋白的30%以上,纯化后获得高纯度重组蛋白,占总蛋白比例达60%以上。纯化蛋白his-JEV-prM免疫BALB/c小鼠,制备了小鼠抗JEV-prM抗体,Westernblotting和间接免疫荧光检测小鼠抗JEV-M抗体的特异性。纯化蛋白能诱导小鼠产生高滴度抗体,并且该抗体能特异识别原核、真核和病毒表达的prM。本研究表达纯化的prM蛋白和小鼠抗prM抗体,为基于M蛋白的疫苗开发、检测JEV的方法及致病机理研究提供了工具。
- 梅匀安袁庄川韩秀杰赵凡凡王晓杜
- 关键词：日本脑炎病毒原核表达免疫原性
- 猪日本乙型脑炎病毒NS5原核表达和多克隆抗体制备
- 2013年
- 提取猪日本乙型脑炎病毒(JEV)上海分离株的基因组RNA,反转录合成cDNA,扩增JEV-NS5基因片段,亚克隆到原核表达载体pET-28(a)上,构建重组原核表达质粒pET-28(a)-JEV-NS5,转化大肠埃希氏菌BL21(DE3)菌株,IPTG诱导表达重组JEV-NS5蛋白,获得分子质量为103 ku的重组蛋白.该蛋白主要以包涵体形式表达,表达量占总菌体蛋白的35%以上,His-band Ni+纯化后,获得高纯度重组蛋白占总蛋白的比例达75%以上.以纯化的蛋白免疫小鼠,制备小鼠抗JEV-NS5抗体,抗体效价达到3×104,并能与病毒感染的样本反应,证明该蛋白具有较好的特异性.
- 余风艳韩秀杰沈红霞张保新赵凡凡王晓杜
- 关键词：日本乙型脑炎病毒原核表达纯化
- 猪日本脑炎病毒NS3蛋白的基因克隆、原核表达及纯化
- 2012年
- 提取猪日本脑炎病毒(JEV)上海分离株的基因组RNA,反转录合成cDNA,RT-PCR扩增JEV的NS3基因片段,亚克隆到原核表达载体pET-28(a)上,酶切鉴定和PCR鉴定重组原核表达质粒pET-28(a)-JEV-NS3,转化大肠埃希菌BL21(DE3)菌株,IPTG诱导表达重组His-JEV-NS3蛋白,SDS-PAGE分析重组蛋白的表达,his-band试剂盒纯化重组蛋白。获得了1.8kb NS3基因片段,成功构建重组原核表达质粒pET-28(a)-JEV-NS3。IPTG诱导获得分子质量为64ku的His-JEV-NS3蛋白,该蛋白主要以包涵体形式表达,表达量占总菌体蛋白的30%以上,纯化后获得高纯度重组蛋白,其占总蛋白比例达70%以上。
- 韩秀杰张保新赵凡凡余风艳沈红霞王晓杜
- 关键词：日本脑炎病毒NS3原核表达
- 猪日本乙型脑炎病毒NS1基因的表达和抗体制备被引量：1
- 2013年
- 猪Sus scrofa domestica日本乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）是引起母猪繁殖机能障碍的重要病原之一,其NS1蛋白参与病毒复制和组装、调节宿主免疫反应功能。提取猪日本乙型脑炎上海分离株的基因组RNA,反转录合成cDNA,扩增该病毒的NS1基因片段,亚克隆到原核表达载体pET-28（a）上,构建重组原核表达质粒pET-28（a）-JEV-NS1,转化大肠埃希菌Escherichia co1i BL21（DE3）菌株,IPTG诱导表达重组JEV-NS1蛋白,获得分子量大小为46 kDa的重组蛋白。为了提高表达量,JEV-NS1基因的958~1 245 bp被截短。聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE）分析表明：JEV-NS1表达量明显提高,纯化后含量达到总蛋白的85%以上。纯化后的蛋白免疫ICR小鼠Mus musculus,制备了小鼠抗JEV-NS1多克隆抗体,western-blotting验证了JEV-NS1的抗原性和抗体的特异性。
- 沈红霞韩秀杰赵凡凡张保新余风艳王晓杜
- 关键词：动物学日本乙型脑炎病毒NS1原核表达纯化抗体
