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S100A6通过PI3K/Akt信号通路促进人骨肉瘤细胞143B增殖和迁移被引量：11: 2013年; 目的：研究PI3K/Akt信号通路在S100A6介导的人骨肉瘤细胞143B的增殖和迁移中的作用.方法：首先制备重组的人S100A6蛋白（recombinant human S100A6,rhS100A6）;rhS100A6与PI3K抑制剂（LY294002和wortmannin）单独或同时处理143B细胞,其中rhS100A6的终浓度为30 mg/L,LY294002和wortmannin的终浓度分别为10 μmol/L和0.5 μmol/L;采用Western blotting分析143B细胞中PI3K/Akt信号通路相关分子总Akt（total Akt,t-Akt）及磷酸化Akt（phosphorylation of Akt,p-Akt）蛋白的表达变化,MTT检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移.结果：（1）成功制备rhS100A6蛋白,rhS100A6显著增强143B细胞的增殖和迁移能力（P〈0.05）;（2）rhS100A6上调143B细胞中Akt的磷酸化;（3）与rhS100A6组相比,rhS100A6与LY294002或wortmannin联合处理组143B细胞的p-Akt减少（P〈0.05）,细胞的增殖和迁移能力降低,在不同时点细胞的增殖率下降10.3%～69.7%,细胞迁移率下降37.9%～41.6%,差异均有统计学意义（P〈0.05）.结论：S100A6促进人骨肉瘤细胞143B增殖和迁移的作用至少部分是通过激活PI3K/Akt信号通路实现的.; 王海燕邹正渝段亮陈娴李欢袁世梅何通川周兰; 关键词：S100A6 骨肉瘤 P13K AKT信号通路

过表达FGD6对肝干细胞分化的调控作用: 2019年; 该文主要探讨过表达FGD6(faciogenital dysplasia 6)基因对肝干细胞分化的调控作用及其可能的机制。将FGD6基因插入腺病毒载体使其过表达,并包装成腺病毒(Ad-FGD6),感染小鼠胚胎肝干细胞HP14.5,以空载体腺病毒(Ad-null组)和未感染腺病毒组(Blank control组)作为对照;半定量PCR和Western blot分别检测FGD6、肝干细胞标志物(AFP)、肝细胞标志物(ALB)、胆管上皮细胞标志物(CK19、SOX9)及Wnt经典通路中的标志物(β-catenin、wnt3a)的m RNA和蛋白表达水平;并通过糖原染色法(PAS染色)检测细胞内糖原合成的变化情况;CCK8检测各组细胞增殖情况。结果显示,感染Ad-FGD6腺病毒后,与Ad-null组及Blank control组相比,HP14.5细胞中的FGD6的m RNA和蛋白表达水平升高(P<0.05),肝干细胞标志物(AFP)及胆管上皮标志物(CK19、SOX9)的m RNA及蛋白的表达水平降低(P<0.05),而肝细胞标志物ALB及Wnt经典通路中的标志物(β-catenin、wnt3a)的m RNA和蛋白的表达水平均升高(P<0.05);PAS染色发现,Ad-FGD6组存在紫红色颗粒,呈阳性反应,这说明有糖原合成。CCK8检测发现,Ad-FGD6组能促进肝干细胞增殖(P<0.05)。因此,过表达HP14.5细胞的FGD6会使HP14.5细胞向肝细胞分化并促进细胞增殖,而这一过程可能通过Wnt经典信号通路实现。; 余师师沙鸥李宛玲胡倩何通川张秉强; 关键词：肝干细胞分化调控重组腺病毒

生长激素与BMP9协同促进间充质干细胞向成骨分化的研究: 目的:在体外、器官培养和体内三个层面上研究生长激素(GH)和骨形态发生蛋白9(BMP9)对间充质干细胞成骨分化的影响,并试图探讨其中的分子机制. 方法:通过RT-PCR检测BMP9腺病毒感染的C3H10T1/2...; 黄恩毅杨力何通川; 关键词：间充质干细胞生长激素

过表达S100A6对BMP9诱导的小鼠间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化的影响被引量：2: 2013年; 以骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)作为诱导小鼠间充质干细胞C3H10T1/2定向成骨分化的细胞因子,观察过表达S100A6对成骨分化的影响。用重组腺病毒AdBMP9与AdS100A6共感染C3H10T1/2细胞,随后检测成骨分化标志物,包括Runx2、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨桥素(osteopontin,OPN)和钙盐沉积;检测方法包括免疫细胞化学、ALP染色、活性分析以及茜素红S染色;同时,用Western blot检测β-catenin的表达。过表达S100A6对所诱导的间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化的早期指标Runx2的蛋白水平无明显影响(P>0.05;ICC法),对第7天的ALP和第18天钙盐的沉积也无明显影响(P>0.05);但是,能够引起第12天的OPN升高(P<0.05);同时,S100A6对BMP9诱导的C3H10T1/2细胞中的β-catenin水平的影响在第3、7天不明显(P>0.05),但在第12天时可致β-catenin水平下调(P<0.05)。过表达S100A6可促进BMP9诱导的C3H10T1/2细胞中OPN的表达,但对最终的成骨分化无明显影响。; 叶立伟武睿段亮张昀源杨霞陈娴王海燕何通川周兰; 关键词：S100A6 成骨分化 Β-CATENIN

S100A6蛋白对细胞中β-catenin水平的影响及可能机制被引量：2: 2011年; 探讨S100A6蛋白对细胞中β-catenin水平的影响及可能机制。用表达S100A6及其siRNA的重组腺病毒AdS100A6和AdsiS100A6处理人骨肉瘤细胞系143B,Western blot分析处理前后细胞中β-catenin水平的变化;再以人胚肾细胞HEK293为研究对象,通过免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)联合Western blot检测S100A6与Wnt经典信号通路主要成员β-catenin、糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)、散乱蛋白(Dishevelled,DVL)和轴蛋白(Axin)之间的相互作用。结果:1)AdS100A6作用48h后,143B细胞中β-catenin水平较实验对照组(AdGFP组)增加了64%(P<0.01),而AdsiS100A6处理的细胞中β-catenin较AdGFP组减少了20.2%(P<0.05),AdGFP组与空白组之间的差异无统计学意义;2)在S100A6抗体的沉淀物中,检测到β-catenin、GSK-3β和DVL,而无Axin检出;3)β-catenin、GSK-3β和DVL的抗体沉淀物中,均有S100A6检出,而Axin抗体的沉淀物中无S100A6检出。结论:S100A6能够上调人骨肉瘤细胞系143B中的β-catenin水平;并与β-catenin、GSK-3β和DVL之间存在直接相互作用;S100A6与这三个分子之间的直接相互作用可能抑制了β-catenin的降解,使之在胞浆内聚集,水平升高。这可能是S100A6上调β-catenin的部分机制。; 黎玉叶李星星孙双双邹正渝张昀源段亮叶立伟武睿杨霞何通川周兰; 关键词：蛋白质相互作用

外源性FrzB拮抗Wnt信号转导并抑制人骨肉瘤细胞143B增殖被引量：2: 2010年; 目的 Wnt信号异常激活与肿瘤发生有关,观察Wnt信号的天然拮抗剂FrzB对Wnt信号转导的影响和对肿瘤细胞增殖抑制。方法采用AdEasy系统构建重组腺病毒AdFrzB;卡那霉素抗性筛选、酶切鉴定及荧光显微镜和Western blot检测标记基因GFP和His表达等方法鉴定AdFrzB。AdFrzB与AdWnt3A共感染人骨肉瘤细胞株143B,AdGFP与AdWnt3A共感染为对照,β-catenin/Tcf荧光素酶反应系统检测FrzB对Wnt信号转导的影响;MTT实验检测FrzB对细胞增殖的抑制。结果卡那霉素抗性筛选及酶切鉴定获得pAdFrzB-His;检测到报告基因GFP和His表达,确证AdFrzB构建成功。FrzB抑制了Wnt信号转导并抑制了143B细胞增殖。结论 AdEasy系统有效构建了AdFrzB;外源性FrzB拮抗Wnt信号转导并抑制143B细胞增殖,FrzB可能是一种天然抗肿瘤因子。; 司维柯赵辰赵宸李军潘静李招权何通川; 关键词：WNT信号重组腺病毒

人骨形态发生蛋白2和9对人胃癌MNK-45细胞增殖、凋亡和迁移的影响及其机制被引量：2: 2012年; 目的:研究人骨形态发生蛋白2和9(BMP2和BMP9)对人胃癌MNK-45细胞增殖、凋亡和迁移的影响,并初步探讨其作用机制。方法:用重组腺病毒AdBMP2和AdBMP9感染MNK-45细胞,采用MTT法、Hoechst 33258染色、流式细胞术(FCM)、划痕愈合实验和Transwell小室检测BMP2和BMP9对MNK-45细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响,Western blotting检测总GSK-3β、磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)及β-catenin的表达水平。结果:(1)MTT显示AdBMP2和AdBMP9转染后,MNK-45细胞的增殖自第3 d开始被抑制并呈时间依赖性;(2)Hoechst 33258染色与FCM一致显示上调BMP2和BMP9表达可以促进MNK-45细胞的凋亡;(3)划痕愈合与Transwell迁移实验结果一致提示上调BMP2和BMP9表达均可抑制MNK-45细胞的迁移;(4)Westernblotting显示BMP2组和BMP9组的p-GSK-3β均较GFP组升高,但对β-catenin的表达量无明显影响(P>0.05);上述结果与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:上调BMP2和BMP9表达对MNK-45细胞的增殖具有抑制作用,其机制与β-catenin无明显关系。; 叶立伟陈娴武睿段亮张昀源杨霞王海燕何通川周兰; 关键词：骨形态发生蛋白细胞增殖细胞凋亡

外源性S100A6对人骨肉瘤细胞株U2OS的增殖、凋亡及β-catenin表达的影响被引量：11: 2009年; 目的:探讨外源性S100A6对骨肉瘤细胞株U2OS的生物学作用及其可能机制。方法:MTT法检测S100A6对U2OS细胞增殖的影响及浓度依赖性,台盼蓝拒染法计数活细胞检测S100A6对U2OS增殖作用的时间依赖性,Hoechst染色检测细胞凋亡,Westernblot法及免疫细胞化学法检测细胞内β-catenin的表达变化。结果:S100A6作用3d时,浓度为30、100、300和1000μg/ml的重组S100A6(GST-S100A6)组的OD值分别比相应浓度的GST对照组的OD值减少20.5%、23.7%、32.2%和36.8%,P<0.05;蛋白浓度为100μg/ml时,GST-S100A6组的细胞数在前2d与GST组相似,第3、4、5d的细胞数分别降低到GST组的59%、46%、48%,P<0.05;GST-S100A6干预3d后细胞凋亡率增高3.16倍,P<0.01;免疫细胞化学法测得经GST-S100A6处理3d后β-catenin的平均光密度值比GST组增加22.9%,P<0.01;经携带S100A6基因的重组腺病毒(Ad-S100A6)处理3d后,Westernblot法检测细胞中β-catenin的校正灰度值为1.4204±0.1999,比对照组(Ad-GFP组,0.9996±0.1000)显著增高,P<0.01。结论:外源性S100A6能够抑制U2OS细胞的增殖、促进其凋亡和增加U2OS细胞中β-catenin水平。; 陈英华卫佳李星星吴丽美马闻张彦何通川周兰; 关键词：S100A6 骨肉瘤

协同诱导成骨分化的BMP组合物及其应用: 本发明公开了协同诱导成骨分化的BMP组合物，由BMP9与BMP2、4、6或7组成，可获得较单一BMP更强的诱导成骨分化作用；还公开了在真核细胞中表达所述协同诱导成骨分化的BMP组合物的BMP基因重组病毒组合物以及BMP双...; 何通川邓忠良康权罗进勇陈亮何百成罗小辑; 文献传递

重组人S100A6促进人乳腺癌细胞MCF-7的增殖和迁移侵袭并抑制其凋亡被引量：8: 2011年; 该研究旨在探讨重组人S100A6蛋白对乳腺癌细胞株MCF-7的增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响。利用原核表达制备重组人S100A6蛋白(GST-hS100A6),SDS-PAGE显示其大小为36 kDa,Western blot显示其可以被S100A6抗体特异识别,BCA法测定1 L菌液共收获约16.7 mg蛋白;将其作用于人乳腺癌细胞MCF-7,MTT显示细胞培养48 h时,浓度为100μg/mL和300μg/mL的GST-hS100A6组的D_(492)值较GST组增加29.1%和84.6%(P<0.05),提示S100A6促进MCF-7细胞增殖;平板克隆形成实验显示GST-hS100A6组的克隆形成率较GST组高38.7%(P<0.05),提示S100A6促进MCF-7的克隆形成;Hoechst染色显示GST-hS100A6组在24 h时细胞凋亡率较GST组减少67.8%(P<0.05),48 h时细胞凋亡率较GST组减少58.4%(P<0.05),提示S100A6抑制MCF-7细胞凋亡;划痕实验显示在24 h时GST-hS100A6组的划痕愈合率为GST组的2.2倍(P<0.05),提示S100A6促进MCF-7细胞迁移;Transwell显示GST-hS100A6组在24 h时穿膜细胞数较GST组增加88.1%(P<0.05),提示S100A6促进MCF-7细胞侵袭。以上结果显示S100A6对人乳腺癌具有一定的促进作用,有可能成为乳腺癌分子诊断的标志物和治疗的新靶标。; 游莉徐兰兰郭元元孙双双邹正渝黎玉叶罗进勇何通川周兰; 关键词：S100A6 乳腺癌增殖凋亡迁移

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何通川

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