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外源性S100A6对黑色素瘤B16细胞增殖、凋亡的影响及其机制被引量：3: 2012年; 目的探讨外源性S100A6对黑色素瘤B16细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法采用MTT、台盼蓝拒染、Hoechst、Western blot、免疫细胞化学、免疫荧光和荧光素酶活性分析法检测S100A6对B16细胞增殖、凋亡、β-catenin的水平和分布、β-catenin/TCF4转录活性及经典Wnt信号途径(即Wnt/β-catenin信号)的下游靶基因c-myc表达的影响。结果 GST-hS100A6可抑制B16细胞的增殖,且呈时间-剂量依赖性;GST-hS100A6作用72 h后,B16细胞的凋亡率较GST对照组增加1.43倍;携带S100A6基因的重组腺病毒AdS100A6作用72 h后,B16细胞中β-catenin的表达量较对照腺病毒AdGFP组增加43.9%;GST-hS100A6可使B16细胞中β-catenin的表达增加,且以胞核增加为主;GST-hS100A6作用后,B16细胞的β-catenin/TCF4转录活性增至GST对照组的7.4倍,且该信号途径的靶基因之一c-myc的表达也增加70.4%。上述结果与GST对照组之间的差异均有统计学意义(P均<0.05或0.01)。结论 S100A6具有抑制黑色素瘤增殖、促进凋亡和上调其Wnt/β-catenin信号途径活性的作用,且上调Wnt/β-catenin信号途径活性可能是S100A6对黑色素瘤抑制性作用的机制之一。; 陈英华孙双双卫佳李星星游莉邹正渝黎玉叶何通川周兰; 关键词：S100蛋白质类黑色素瘤细胞增殖

重组人骨形态发生蛋白-2和-6对人骨肉瘤细胞株MG63和U2OS的作用: 2009年; 为研究重组人骨形态发生蛋白rhBMP-2和rhBMP-6对人骨肉瘤细胞株MG63和U2OS的作用,分别用含rhBMP-2和rhBMP-6及重组绿色荧光蛋白的条件培养液干预人骨肉瘤细胞MG63和U2OS,利用台盼蓝拒染法、TUNEL法、吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)荧光双染法、Transwell小室和碱性磷酸酶活性测定法分别检测细胞增殖、凋亡、迁移以及成骨分化能力的变化。结果显示与未实施任何干预的空白对照组和用rGFP干预实验对照组相比,rhBMP-2和rhBMP-6的干预致两种骨肉瘤细胞株:细胞存活率均随时间逐渐降低;凋亡率呈时间依赖性增加;穿膜数明显减低;碱性磷酸酶(ALP)活性逐渐增加。以上差异均有统计学意义(P<0.01)。表明rhBMP-2和rhBMP-6可抑制人骨肉瘤细胞株MG63和U2OS的增殖和迁移、诱导其凋亡和向成骨细胞分化。; 何焕玲李星星吴丽美陈英华卫佳苗静琨周兰; 关键词：骨形态发生蛋白细胞迁移碱性磷酸酶活性

hS100A6对人骨肉瘤细胞株143B的体内体外作用被引量：1: 2011年; 为研究hS100A6对人骨肉瘤细胞系143B的体内体外作用,利用整合有S100A6基因和SiS100A6基因的腺病毒(AdS100A6和AdSiS100A6)作用于143B细胞,MTT法和台盼蓝染色法检测其对细胞的增殖作用,Hoechst染色法检测其对凋亡的作用,Transwell实验检测其对迁移的作用,同时以143B裸鼠皮下移植瘤为动物模型,检测S100A6对143B的体内作用,结果显示AdS100A6干预后出现细胞增殖活性的减弱、凋亡率增高、迁移率降低,在体内试验中瘤体体积明显较对照组减小,而AdsiS100A6干预后出现时间依赖性地细胞增殖活性的增强、凋亡率降低、迁移率增高,体内试验中瘤体体积较对照组明显增大.提示hS100A6能抑制人骨肉瘤细胞株143B细胞的增殖和迁移,并促进细胞凋亡,同时能抑制人骨肉瘤细胞株143B的裸鼠皮下移植瘤的生长.; 李星星张昀源陈英华卫佳邹正渝吴丽美马闻游莉郭元元徐兰兰何通川周兰; 关键词：S100A6 骨肉瘤生物学效应

人S100A2-GST融合蛋白原核表达和纯化被引量：3: 2008年; 目的:制备人S100A2-GST融合蛋白(Human S100A2-GST fusion protein,hS100A2-GST),为进一步研究人hS100A2蛋白的功能及其与其它因子或系统的相互作用奠定基础。方法:从pHAHA-hS100A2中双酶切获取hS100A2基因,亚克隆至原核表达载体pGST-moluc,构建pGST-moluc-hS100A2,转化BL21后酶切鉴定,IPTG诱导重组菌表达融合蛋白hS100A2-GST,再经过Glutathion-Sepharose4B球珠分离纯化、SDS-PAGE及Western Blot鉴定,Bradford法蛋白定量。结果:XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切该重组质粒后获得2个片段,分别约300bp和5kb,提示pGST-moluc-hS100A2构建正确;重组菌株经过IPTG诱导后,表达分子量约为36kD的蛋白,产率达5mg/L菌液;Glutathion-Sepharose4B球珠纯化后,该融和蛋白纯度达92%;Western Blot显示该蛋白可以被S100A2的抗体特异识别,证实其为hS100A2-GST融合蛋白。结论:成功构建了hS100A2-GST原核表达质粒pGST-moluc-hS100A2;该质粒可在大肠杆菌中诱导表达hS100A2-GST融合蛋白,产率高;应用Glutathion-Sepharose4B球珠可获得纯度达92%的该蛋白。为后续有关hS100A2的研究打下了基础。; 卫佳王胜苗静琨陈英华李星星吴丽美左国伟何通川周兰; 关键词：蛋白纯化蛋白鉴定

外源性S100A6对人骨肉瘤细胞株U2OS的增殖、凋亡及β-catenin表达的影响被引量：11: 2009年; 目的:探讨外源性S100A6对骨肉瘤细胞株U2OS的生物学作用及其可能机制。方法:MTT法检测S100A6对U2OS细胞增殖的影响及浓度依赖性,台盼蓝拒染法计数活细胞检测S100A6对U2OS增殖作用的时间依赖性,Hoechst染色检测细胞凋亡,Westernblot法及免疫细胞化学法检测细胞内β-catenin的表达变化。结果:S100A6作用3d时,浓度为30、100、300和1000μg/ml的重组S100A6(GST-S100A6)组的OD值分别比相应浓度的GST对照组的OD值减少20.5%、23.7%、32.2%和36.8%,P<0.05;蛋白浓度为100μg/ml时,GST-S100A6组的细胞数在前2d与GST组相似,第3、4、5d的细胞数分别降低到GST组的59%、46%、48%,P<0.05;GST-S100A6干预3d后细胞凋亡率增高3.16倍,P<0.01;免疫细胞化学法测得经GST-S100A6处理3d后β-catenin的平均光密度值比GST组增加22.9%,P<0.01;经携带S100A6基因的重组腺病毒(Ad-S100A6)处理3d后,Westernblot法检测细胞中β-catenin的校正灰度值为1.4204±0.1999,比对照组(Ad-GFP组,0.9996±0.1000)显著增高,P<0.01。结论:外源性S100A6能够抑制U2OS细胞的增殖、促进其凋亡和增加U2OS细胞中β-catenin水平。; 陈英华卫佳李星星吴丽美马闻张彦何通川周兰; 关键词：S100A6 骨肉瘤

人骨形态发生蛋白2,3,6,12对大鼠骨肉瘤细胞株UMR106的作用: 2010年; 目的:研究人骨形态发生蛋白(human bone morphogenetic proteins,hBMP)对大鼠骨肉瘤细胞株UMR106的作用。方法:用hBMP2,3,6,12重组腺病毒(AdBMP2,3,6,12)干预大鼠骨肉瘤细胞株UMR106,利用台盼蓝拒染法、TUNEL法、吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)荧光双染法、Transwell小室和碱性磷酸酶活性测定法分别检测细胞增殖、凋亡、迁移以及成骨分化能力的变化。结果:与空白对照组和实验对照组比较,AdBMPs的干预致骨肉瘤细胞株细胞存活率降低,并呈一定的时间依赖性;凋亡率均随时间延长而增加,并且TUNEL和AO/EB两种检测方法的结果一致;3个检测时间点的细胞穿膜数均明显减低;碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性在干预第3天开始逐渐增加,至第9天仍可观测到,以上差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:以腺病毒介导基因转入的作用方式,hBMP2,3,6,12可以抑制大鼠骨肉瘤细胞株UMR106的增殖和迁移,并诱导其凋亡和向成骨细胞分化。; 李星星何焕玲吴丽美马闻陈英华卫佳苗静琨周兰; 关键词：骨形态发生蛋白细胞迁移碱性磷酸酶活性

hBMP9在人骨肉瘤细胞株MG63、U2OS和143B中的内源性表达被引量：1: 2010年; 目的:研究人骨形态发生蛋白(Human bone morphogenetic protein,hBMP)9在人骨肉瘤细胞株MG63、U2OS和143B中的内源性表达,为下一步研究hBMP9对骨肉瘤的体内外作用奠定实验基础。方法:利用免疫细胞化学法和Western blot法检测hBMP9在人骨肉瘤细胞株MG63、U2OS和143B中的内源性表达。结果:在MG63、U2OS和143B中,hBMP9均呈不同程度的阳性表达,并且两种检测方法所得结果一致。结论:hBMP9在人骨肉瘤细胞株MG63、U2OS和143B中均有内源性表达。; 吴丽美何焕玲李星星卫佳陈英华马闻周兰; 关键词：骨形态发生蛋白骨肉瘤细胞免疫细胞化学 BLOT

人S100A6对人骨肉瘤细胞系β-catenin的作用被引量：5: 2009年; 目的研究人S100A6对人骨肉瘤细胞系MG63和U2OS中β-catenin的作用。方法分别用携带人S100A6及其siRNA基因的重组腺病毒AdS100A6和AdSiS100A6感染MG63和U2OS,分别使细胞中S100A6表达上调和下调;RT-PCR、蛋白印迹和免疫细胞化学法分别检测细胞中β-catenin mRNA和蛋白表达。结果上调骨肉瘤细胞系MG63和U2OS中S100A6后,β-catenin mRNA和蛋白表达均增加(P<0.05),蛋白的增加以胞核更明显。下调S100A6则使细胞中β-catenin mRNA及蛋白表达减少(P<0.05),蛋白的减少也以胞核更甚。结论增加Wnt信号途径活性可能是S100A6参与肿瘤发生发展的机制之一。; 卫佳陈英华吴丽美马闻张彦何通川周兰; 关键词：S100A6 Β-CATENIN 骨肉瘤

β-catenin降低外源性hS100A6对骨肉瘤细胞的抑制作用被引量：1: 2010年; 目的研究外源性hS100A6抑制骨肉瘤细胞作用与Wnt/β-catenin信号途径的关系。方法用携带人β-catenin及其siRNA基因的重组腺病毒Adβ-catenin和AdSiβ-catenin分别上调和下调MG63和U2OS细胞中β-catenin水平,再用重组hS100A6处理这些细胞,然后通过MTT法检测细胞增殖能力的变化,Hochest染色法检测细胞凋亡的变化,划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞迁移能力的变化。结果①外源性hS100A6抑制2株骨肉瘤细胞的增殖(P<0.05);β-catenin过表达和低表达则分别减弱和增强hS100A6对这2株细胞的增殖抑制作用(P<0.05);②外源性hS100A6促进2株骨肉瘤细胞的凋亡(P<0.05);β-catenin过表达和低表达则分别增强和减弱hS100A6对这2株细胞的促凋亡作用(P<0.05);③外源性hS100A6抑制骨肉瘤细胞株MG63的迁移(P<0.05);β-catenin过表达和低表达则分别减弱和增强hS100A6对MG63的迁移抑制作用(P<0.05)。结论β-catenin负性调节hS100A6对骨肉瘤的抑制作用;hS100A6对骨肉瘤的抑制作用可能经由Wnt信号途径及其他信号途径共同调控。; 卫佳李星星陈英华吴丽美马闻何通川周兰; 关键词：Β-CATENIN S100A6 生物学作用骨肉瘤

人骨形态发生蛋白3抑制骨肉瘤细胞系MG63和U2OS的体外生长被引量：3: 2009年; 目的研究人骨形态发生蛋白3(hBMP3)对骨肉瘤细胞系MG63和U2OS的生物学作用。方法hBMP3的重组腺病毒和表达hBMP3的条件培养液(rhBMP3-CM)干预MG63和U2OS,台盼蓝拒染法、TUNEL法、吖啶橙/溴乙啶荧光双染法、Transwell小室和碱性磷酸酶活性测定法分别检测细胞增殖、凋亡、迁移以及成骨分化能力的变化;空白组不做任何处理,实验对照组用AdGFP和rGFP-CM处理。结果实验对照组和空白组间差别无显著性。与各自的对照组相比,在观察时间内,两种处理均致实验组细胞:(1)存活率降低;(2)凋亡率增加;(3)穿膜细胞数减少;(4)碱性磷酸酶活性增加。结论hBMP3对骨肉瘤细胞系具有抑制作用,并促其向成骨方向分化。; 吴丽美何焕玲李星星陈英华卫佳左国伟苗静琨王嫣周兰; 关键词：骨形态发生蛋白骨肉瘤细胞迁移

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