关小珊
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 供职机构：广州医学院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌CHIPS基因的克隆、序列分析及原核表达被引量：3
- 2013年
- 目的对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)趋化抑制蛋白(CHIPS)进行扩增、克隆、序列分析、原核表达及纯化,为后续的疫苗研究奠定基础。方法根据GenBank中趋化抑制蛋白(CHIPS)的序列,设计一对特异性引物,以耐甲氧西林金黄色葡萄球菌DNA为模板PCR扩增CHIPS基因,纯化DNA进行EcoRI、XhoI双酶切鉴定及测序鉴定,并将CHIPS亚克隆入表达载体PET-28α,转化感受态大肠杆菌BL21,对质粒进行双酶切鉴定及基因序列分析,用IPTG诱导表达重组蛋白,His标签单克隆抗体进行免疫印迹验证重组蛋白的表达。结果以金黄色葡萄球菌临床儿童分离株基因组为模板,成功扩增CHIPS基因,基因大小为450bp;重组PET-28a(+)-CHIPS双酶切鉴定可见目的片段,测序结果显示CHIPS在正确读框中,序列比对分析显示其与相关报道核苷酸序列一致性达99.98%。经IPTG诱导后,pET-28a(+)-CHIPS/BL21在相应分子量(17kDa)可见融合蛋白在上清表达,免疫印迹检测到目的蛋白。结论成功从儿童分离株MRSA中构建了CHIPS的原核表达系统,并成功在大肠杆菌BL21中融合表达,为后续的疫苗研究奠定基础。
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- 关键词：MRSACHIPS克隆原核表达
- 嗜麦芽窄食单胞菌Smqnr耐药基因的序列分析及原核表达被引量：1
- 2012年
- 目的:对嗜麦芽窄食单胞菌临床分离株gzch770(SMgzch770)携带的喹诺酮耐药基因Smqnr进行扩增、测序及原核表达,为研究Smqnr蛋白的功能奠定基础。方法:提取SMgzch770基因组染色体,PCR扩增Smqnr全基因并克隆入pMD18-T载体进行核苷酸序列分析;将Smqnr基因克隆至表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌BL21,SDS-PAGE分析融合蛋白表达情况。结果:以染色体DNA为模板,成功扩增660bpSmqnr基因;序列比对分析显示其与相关报道序列核苷酸和氨基酸一致性达98%以上;SMgzch770Smqnr序列已登录GenBank(登录号:HQ315851);SDS-PAGE显示,融合基因表达的蛋白约为50kDa,其中Smqnr蛋白约为24kDa。结论:从SMgzch770中成功克隆及表达了Smqnr基因,为进一步进行Smqnr蛋白高级结构测定的结晶试验提供了必须材料。
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- 关键词：嗜麦芽窄食单胞菌克隆原核表达
- 新生儿红细胞压积两种检测方法的比较被引量：1
- 2004年
- 目的 探讨血细胞分析仪法和温氏法在新生儿红细胞压积 (Hct)检测中的差异和相关性 ,及其在临床的使用价值 .方法 利用两法同时测定贫血和血红蛋白 (Hgb)正常的新生儿Hct对测定结果进行配对t检验及相关性分析 .结果 两种方法于贫血组和Hgb正常组中的测定结果均有显著性差异 (p=0 .0 0 0 ) .仪器法 (y)和温氏法 (x)测定Hct的回归方程为y =0 .94 2 8x - 0 .0 0 4 4 .结论 在临床上 ,仪器法适用于绝大多数的新生儿Hct的测定 .
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- 关键词：新生儿红细胞压积温氏法贫血仪器法血红蛋白
