刘春国 作品数:136 被引量:340 H指数:11 供职机构: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 更多>> 发文基金: 黑龙江省自然科学基金 国家科技支撑计划 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 轻工技术与工程 更多>>
哈尔滨市猫感染杯状病毒风险因素病例对照研究 引言猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)感染是猫的一种高度传染性疾病,广泛分布于猫群中。尤其是新型变异株的出现,严重危害猫的健康。当前的商品化疫苗亦不能够提供完全保护。因此,有效控制办法是及早发现疾... 刘春国 刘大飞 肖雨墨 韦欣捷 曲连东H5亚型禽流感病毒样颗粒的构建及生物学活性鉴定 被引量:2 2012年 为构建H5亚型禽流感病毒(AIV)病毒样颗粒(VLPs),并鉴定其生物学活性,本研究通过杆状病毒/昆虫细胞表达系统,分别单独表达H5亚型AIV血凝素(HA)及共表达HA和基质蛋白(M1),并采用免疫组织化学法、SDS-PAGE、western blot和血凝试验等对重组蛋白进行鉴定。实验结果表明:透射电子显微镜观察结果显示,共表达HA和M1的重组蛋白可以形成VLPs,而单独表达HA未观察到VLPs;表达的重组蛋白HA和HA-M1均能够凝集鸡红细胞,血凝效价分别为1∶27和1∶28。结果显示该方法获得的AIV结构蛋白具有良好的生物学活性和抗原活性,从而为禽流感VLPs疫苗的研究提供依据。 张超林 刘春国 王寿山 石薇琳 李建辉 王伟 王伟 刘彦云关键词:流感病毒 血凝素基因 杆状病毒表达系统 H5N1亚型禽流感病毒NS1基因在昆虫细胞中的表达 将H5N1亚型禽流感病毒NS1基因插入到杆状病毒转移载体pFastBac1中,获得重组转移载体pFastBac1-NS1.将pFastBac1-NS1转化到DH10Bac感受态细胞中,筛选到重组转座子rBacmid-NS... 刘春国 刘明 杨涛 张云关键词:禽流感病毒 H5N1亚型 NS1基因 杆状病毒表达 文献传递 新城疫病毒F_(48)E_9株M NP F和HN基因的真核表达 被引量:17 2006年 将新城疫病毒(NDV)F48E9株的M、NP、F和HN基因克隆到真核细胞表达载体 pCAGG上,经酶切、PCR鉴定和序列分析,分别筛选出了含有M、NP、F和HN基因的重组质粒, 命名为pCAGG-M、pCAGG-NP、pCAGG-F和pCAGG-HN。纯化后的重组质粒通过脂质体单独转染HeLa细胞,经间接免疫荧光试验检测到了M、NP、F和HN蛋白的表达。pCAGG-M、 pCAGG-NP、pCAGG-F和pCAGG-HN重组质粒组合共转染HeLa细胞48 h后,可以观察到明显的细胞融合现象。试验结果表明,NDV F48E9株的M、NP、F和HN蛋白均在HeLa细胞内得到了成功表达,同时证明在该表达系统中F蛋白不足以诱导细胞融合。 闻晓波 闫丽辉 曹殿军 刘培欣 刘春国 步志高关键词:新城疫病毒 M基因 NP基因 HN基因 真核细胞表达 重组禽流感病毒毒株、其制备方法及由其制得的疫苗 本发明公开了一种新的重组禽流感病毒毒株,命名为rgH5N3,该毒株的保藏号为CGMCC No.1339。该重组禽流感病毒毒株含有经分子修饰的H5亚型血凝素基因、N3亚型神经氨酸酶基因和具有高产性状禽流感病毒的6个内部基因... 刘明 张云 刘春国 童光志文献传递 重组H5N3亚型禽流感细胞毒灭活疫苗免疫佐剂效果的评价 被引量:1 2009年 为评价佐剂对疫苗免疫效果的影响,本试验以反向遗传学技术拯救的重组H5N3亚型禽流感病毒为种毒,对国产矿物油以及赛比克公司提供的MontanideTM ISA 70MVG(简称70M)和MontanideTM ISA 206 VG(简称206)3种佐剂制备的灭活疫苗进行了SPF鸡免疫攻毒试验。结果表明国产矿物油佐剂组与70M佐剂组都能对SPF鸡100%保护,206佐剂组仅能保护40%,攻毒的SPF鸡发病,但不死亡;从抗体水平上比较发现70M佐剂组稍好于国产矿物油佐剂组,但两组之间差异不显著,而这两组与206佐剂组差异极显著。这3种佐剂组免疫鸭均能够诱导产生较高的抗体水平,70M佐剂组优于国产矿物油佐剂组和206佐剂组,但3者差异不显著。用70M系的8种佐剂MontanideTM ISA 70 essai Mi(i=1-8)(简称70Mi)佐剂乳化的疫苗免疫SPF鸡,结果表明70M佐剂组效果最好,攻毒后免疫鸡不排毒,而且无临床症状;统计学分析显示70M佐剂组与所有70Mi佐剂组差异均显著。这些结果表明70M佐剂可以作为新型疫苗佐剂用于禽流感疫苗的制备。 刘春国 刘明 万春和 陈浩 李洪涛 孙恩成 杜金玲 刘大飞关键词:禽流感 H5N1亚型 细胞苗 佐剂 重组H5N3亚型禽流感细胞毒灭活疫苗免疫佐剂效果的评价 为评价不同佐剂对疫苗免疫效果的影响,本试验以利用反向遗传操作技术拯救的重组H5N3亚型禽流感病毒疫苗株为种毒,对国产矿物油以及赛比克公司提供的MontanideTM ISA 70M VG(简称70M)和Montanide... 刘春国 刘明 刘大飞 李洪涛 杨涛 孙恩成 杜金玲关键词:禽流感 H5N1亚型 疫苗免疫 灭活疫苗 禽流感病毒A/Turkey/Canada/63毒株HA和NA基因的克隆及序列分析 被引量:8 2006年 用SPF鸡胚增殖禽流感病毒(AIV)A/Turkey/Canada/63毒株,提取病毒基因组总RNA,应用RT-PCR技术分别扩增该病毒分离株的HA和NA基因全片段,并克隆到pMD18-T载体上。测序结果表明,该毒株的HA基因全长为1745bp,含有完整的阅读框架,编码566个氨基酸;NA基因全长1467bp,编码469个氨基酸。BLAST序列比较结果显示,该毒株HA基因属于H6亚型,NA基因属于N2亚型。将获得的HA和NA基因与AIV数据库中H6和N2基因进行遗传演化分析,表明该毒株HA基因与其他H6基因核苷酸的同源性为80.5%~87.3%,氨基酸的同源性为88.0%~93.1%;NA基因与其他N2基因核苷酸的同源性为86.0%~93.5%,氨基酸的同源性为90.6%~96.3%。 潘蔚绮 刘明 刘春国 张云 杨涛关键词:HA基因 NA基因 马流感疫苗研究进展 被引量:2 2013年 马流感(Equine influenza,EI)是由正黏病毒科、流感病毒属的A型流感病毒中的马流感病毒(Equine influenzavirus,EIV)引起的马属动物一种严重的上呼吸道急性高度接触性传染疾病,多呈暴发性流行,传播迅速而且范围广泛。OIE规定马流感为法定报告动物疫病,我国将其列为三类传染病。 刘春国 刘飞 彭永刚 刘明 相文华关键词:马流感病毒 A型流感病毒 传染疾病 上呼吸道 马属动物 法定报告 空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌双重PCR鉴别检测方法的建立 被引量:6 2016年 为快速检测和鉴定空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌,本研究设计并合成了空肠弯曲杆菌马尿酸酶基因hipO和结肠弯曲杆菌cdtC基因的2对特异性引物,建立并优化了快速检测空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌的双重PCR方法。结果显示,双重PCR对空肠弯曲杆菌hipO基因和结肠弯曲杆菌cdtC基因的扩增产物的大小分别为653bp和313bp。PCR扩增条件最终确定为退火温度为52℃,dNTP终浓度为0.4mmol/L,hipO和cdtC基因引物的终浓度均为2 5μmol/L。该双重PCR的灵敏度可达到6.6 8×1 0-2μg/mL,对多杀性巴氏杆菌、产单核细胞李氏杆菌、产气荚膜梭菌、伤寒沙门菌和金黄色葡萄球菌扩增均无目的条带,说明该PCR方法具有良好的灵敏性和特异性。符合试验结果与单一PCR方法结果相同。用所建立的方法对本实验室采集的鸡肛拭子划线培养后的可疑菌落进行PCR鉴定,结果显示2株为空肠弯曲杆菌,2株为结肠弯曲杆菌。结果表明,本研究建立的双重PCR可以用于同时检测空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌。 孙久鹤 郭东春 李安 刘家森 刘春国 刘大飞 侯振中 曲连东关键词:空肠弯曲杆菌 双重PCR