康喜龙
- 作品数：31 被引量：44H指数：4
- 供职机构：扬州大学兽医学院江苏省人兽共患病学重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省高校优势学科建设工程资助项目公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 家禽沙门菌免疫学研究进展被引量：8
- 2018年
- 沙门菌是一种重要的人兽共患病原菌,不仅可以感染畜禽,而且还可以感染人类。鸡白痢沙门菌、鸡伤寒沙门菌、肠炎沙门菌等感染家禽后可以引起禽沙门菌病,导致隐性带菌感染,甚至引发死亡,给养禽业带来巨大的经济损失。沙门菌感染的家禽及其污染的产品是食源性沙门菌的主要来源之一,不仅阻碍了家禽相关产业的发展,而且也对人类健康构成了巨大威胁。疫苗的使用是防控沙门菌的手段之一,但是疫苗并不能完全有效地控制沙门菌的感染和传播。阐明沙门菌诱导家禽免疫应答规律有助于疫苗的理性设计。文章就沙门菌在家禽中的免疫应答研究进展进行了总结,为禽沙门菌疫苗的研制提供参考。
- 康喜龙唐娟焦扬王超胡茂志周晓辉潘志明潘志明
- 关键词：沙门菌家禽天然免疫获得性免疫免疫逃避
- 鸡毒害艾美耳球虫Api AP2转录因子的克隆、表达与虫体内定位
- 2022年
- 顶复门原虫的AP2结构域蛋白(ApiAP2)可能是调控虫体生长发育的转录因子。本研究旨在克隆、表达毒害艾美耳球虫ApiAP2转录因子,检测其天然蛋白及其在虫体内的亚细胞定位。以毒害艾美耳球虫第3代裂殖子的总RNA为模板,RT-PCR扩增毒害艾美耳球虫EnApiAP2基因后,连接至pMD18-T载体,测序后构建pET28a(+)-EnApiAP2表达载体,转化至表达菌BL21(DE3),重组菌经测序鉴定后诱导表达,并纯化复性重组蛋白。用重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备鼠抗rEnApiAP2多克隆抗体。利用多克隆抗体,分别用Western blot和间接免疫荧光试验检测裂殖子中天然EnApiAP2蛋白及其定位。最后,应用荧光定量PCR分析EnApiAP2基因在第2、3代裂殖子中的转录水平。结果显示,该基因全长1830 bp,编码610个氨基酸,含有一个AP2结构域,预测分子质量67.69 ku;重组蛋白大小约为74 ku,主要以包涵体形式存在,可以被6×HIS标签单抗、鸡抗毒害艾美耳球虫康复血清和鸡抗柔嫩艾美耳球虫康复血清识别;在第3代裂殖子中检测到天然EnApiAP2蛋白,分子质量约为85 ku;EnApiAP2蛋白定位在第2、3代裂殖子细胞核内;第3代裂殖子EnApiAP2转录水平显著高于第2代裂殖子(P<0.01)。成功克隆、表达了EnApiAP2基因,证实该基因表达的蛋白定位在裂殖子的细胞核内,为进一步研究EnApiAP2蛋白的转录因子功能奠定了基础。
- 王礼跃冯茜茜蔡为民刘丹丹候照峰康喜龙张知之康喜龙朱玉许金俊潘志明许金俊
- 关键词：毒害艾美耳球虫克隆
- 鸡白细胞介素-2原核表达及其活性鉴定
- 2024年
- 试验旨在获得具有生物活性的鸡白细胞介素-2(ChIL-2)重组蛋白。试验以克隆获得的ChIL-2基因为模板,分别构建原核重组表达菌BL21(pCold-ChIL-2)和BL21(pGEX-6P-1-ChIL-2),进行诱导表达和纯化;通过BrdU ELISA法检测重组蛋白诱导鸡脾脏淋巴细胞的增殖情况,评估其生物活性;以rHis-ChIL-2免疫小鼠制备多克隆抗体。结果显示:成功构建了原核重组表达菌BL21(pCold-ChIL-2)、BL21(pGEX-6P-1-ChIL-2);经表达纯化后分别获得纯度较高的rHis-ChIL-2和rGST-ChIL-2蛋白,大小分别为14 ku和39.4 ku;rHis-ChIL-2和rGST-ChIL-2蛋白分别能够促进脾脏淋巴细胞显著或极显著增殖(P<0.01或P<0.001),均具有良好的生物活性;以纯化的rHis-ChIL-2免疫小鼠制备的多克隆抗体效价为5.12×105,可识别rHis-ChIL-2和rGST-ChIL-2,与真核表达的ChIL-2蛋白反应。结果表明,原核表达的重组蛋白ChIL-2具有良好的生物活性,采用其制备的多克隆抗体可识别真核表达的ChIL-2蛋白,为后期ChIL-2的检测奠定基础。
- 韩顺子黄霞孟闯耿士忠耿士忠潘志明康喜龙
- 关键词：原核表达生物活性多克隆抗体
- 密码子优化的鸡白细胞介素-17在昆虫细胞中的表达研究
- 2013年
- 为了获得具有良好生物学活性且具有较高表达量的鸡白细胞介素-17(ChIL-17),本研究在前期研究工作基础上,将ChIL-17的编码基因按照真核细胞(昆虫细胞)偏爱的密码子进行优化改造,经全基因合成后插入到转座载体pFastBacTMⅠ中,构建重组转移质粒pfast-mod.ChIL-17并转化DH10Bac感受态细胞。通过位点特异性转座将mod.ChIL-17基因整合到穿梭质粒Bacmid中,获得重组穿梭质粒Bacmid-mod.ChIL-17。应用脂质体将重组穿梭质粒转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBac-mod.ChIL-17。重组病毒传代扩增感染Sf9细胞,通过间接免疫荧光检测目的蛋白的表达。结果表明,经过优化的ChIL-17在杆状病毒系统中获得表达。
- 康喜龙王静潘志明杨芸赵雯焦新安
- 关键词：密码子优化杆状病毒真核表达
- 肯塔基沙门菌的流行状况及其耐药性的研究进展被引量：2
- 2022年
- 肯塔基沙门菌是引发人类和畜禽肠道疾病的重要人兽共患病原菌之一,普遍具备多重耐药性。近年来,肯塔基沙门菌在全球流行趋势逐渐上升,严重威胁畜禽健康和公共卫生安全。本文综述了国内外肯塔基沙门菌的流行状况、耐药性及防控措施研究进展,以期为肯塔基沙门菌病的防控提供参考和思路。
- 訾凯元康喜龙孟闯孟闯焦新安
- 关键词：分子分型耐药
- 猪γ干扰素单克隆抗体的制备与特性研究
- 2024年
- 为了制备高特异性的抗猪γ干扰素(IFN-γ)抗体,试验采用原核表达的携带His标签的重组猪IFN-γ(PoIFN-γ)蛋白免疫小鼠,利用杂交瘤技术制备杂交瘤细胞;并以携带GST标签的重组蛋白PoIFN-γ(GST-PoIFN-γ)为包被抗原,通过间接ELISA方法筛选稳定分泌抗体的单克隆细胞株;而后通过间接ELISA方法、单克隆抗体亚型鉴定试剂盒、SDS-PAGE分析、Western-blot鉴定和间接免疫荧光方法对获得的单克隆抗体的腹水效价、亚型、反应特异性等生物学特性进行鉴定。结果表明:经筛选后共获得7株能稳定分泌PoIFN-γ的单克隆抗体细胞株;7株单克隆抗体的腹水效价在1∶2048000~1∶16384000之间,均为IgG1亚型,均能与原核表达及真核表达的PoIFN-γ蛋白发生特异性反应且反应性良好。说明试验成功制备了可特异性识别PoIFN-γ的单克隆抗体。
- 沈环环韩顺子孟闯潘志明潘志明康喜龙
- 关键词：猪Γ干扰素原核表达单克隆抗体效价特异性
- 展呈H5N1亚型禽流感病毒M2e表位鞭毛蛋白的构建及其免疫原性
- 游猛潘志明方强耿士忠康喜龙杨芸焦新安
- 鸡生产链沙门菌流行状况与防控技术被引量：8
- 2020年
- 沙门菌严重危害家禽养殖业,造成巨大经济损失,并引发公共卫生安全问题。文章比较了不同国家的沙门菌流行状况:欧美等发达国家能够有效减少沙门菌感染;新兴经济体国家养殖业迅速发展,沙门菌流行状况呈下降趋势;经济不发达地区沙门菌污染较严重;在我国,沙门菌则广泛存在于养殖场、屠宰场与市场中。疫苗免疫、微生态制剂及有机酸等替抗物质的使用是养殖行业沙门菌防控的主要措施,而在屠宰场则以物理防控为主,商品化制剂的应用前景仍值得探究。
- 刘博闻王凡彭通通康喜龙耿士忠耿士忠潘志明
- 关键词：家禽沙门菌养殖场屠宰场
- 展呈H5N1亚型禽流感病毒M2e表位鞭毛蛋白的构建及其免疫原性
- 以重组质粒pET-fliC和PUC57-M2e2为模板，通过重叠PCR将M2e2基因插入fliC的高变区域，构建嵌合鞭毛基因片段fliC/M2e2。将fliC/M2e2片段插入原核表达载体pET30a+，获得重组质粒pE...
- 潘志明游猛方强康喜龙杨芸焦新安
- 关键词：禽流感病毒鞭毛蛋白免疫应答
- 基于沙门氏菌PagN外膜蛋白的广谱单克隆抗体的制备与鉴定被引量：1
- 2023年
- 为制备针对沙门氏菌特异性外膜蛋白PagN的单克隆抗体(MAb),研究通过构建重组质粒pColdⅠ-pagN和pGEX-6P-1-pagN,利用大肠杆菌系统表达并纯化了肠炎沙门氏菌His-PagN和GST-PagN重组蛋白,免疫6~8周龄BALB/c小鼠,利用B淋巴细胞杂交瘤技术筛选获得2株能稳定分泌PagN蛋白MAb的杂交瘤细胞株3B3和3F10。结果显示:3B3和3F10的亚型均为IgG2b,ELISA效价分别为1.14×10^(9)和1.32×10^(8),Westernblot分析显示其均能特异性结合His-PagN蛋白;进一步分析显示3B3和3F10可特异性识别9种不同血清型沙门氏菌,而不与9种非沙门氏菌菌株反应;全菌包板间接ELISA结果显示3F10能特异性识别不同血清型沙门氏菌,显示出用于沙门氏菌检测的潜能。研究表明制备的单克隆抗体3B3和3F10可特异性识别不同血清型沙门氏菌PagN蛋白,为沙门氏菌检测提供了重要生物材料。
- 孟闯丁睿清尚月月刘钧徐双媛康喜龙康喜龙潘志明
- 关键词：沙门氏菌外膜蛋白单克隆抗体反应谱
