张正
- 作品数：15 被引量：18H指数：3
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- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省自然科学基金更多>>
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- 新型表达骨形态发生蛋白2腺病毒真核细胞载体的构建和鉴定
- 2009年
- 目的构建同时表达具有抗原表位FLAG标记的骨形态发生蛋白2(BMP2)目的蛋白和报告分子绿色荧光蛋白(GFP)的新型腺病毒真核细胞表达栽体。方法将去除翻译终止密码子并添加新的酶切识别位点Xho I的BMP2基因定向连入腺病毒穿梭质粒pShuttle CMV-IRES-hrGFP-1。携带BMP2^+基因的重组腺病毒穿梭质粒经酶切鉴定、Pme I酶切线性化后转化BJ5183-AD-1大肠杆菌,利用细菌内同源重组机制将BMP2+和GFP基因连同其顺势表达元件重组入腺病毒基因组质粒。用Pac I酶切去除其质粒成分,暴露腺病毒基因组的反向末端重复序列,转染293细胞,进行腺病毒的包装,完成新型腺病毒载体Ad CMV-BMP2+-IRES-GFP-1的构建。作为阳性对照,同时制备多年来广为应用的BMP2腺病毒表达载体Ad CMV-BMP2。以两种载体感染骨髓基质细胞,通过RT-PCR和荧光显微镜分别检测骨形态发生蛋白2和绿色荧光蛋白表达情况;通过碱性磷酸酶活性检测判断BMP2诱导成骨分化作用。结果突变后骨形态发生蛋白2基因序列、重组腺病毒穿梭质粒和重组腺病毒质粒酶切图谱符合预定设计。感染骨髓基质细胞后,新型腺病毒载体可同时表达报告分子GFP和具有诱导成骨分化活性的BMP2。结论成功构建表达BMP2的新型腺病毒载体。
- 张正刘丹平陈峻江郭韬张男
- 关键词：绿色荧光蛋白腺病毒载体同源重组成骨诱导
- 玻璃酸钠和醋酸曲安奈德联合应用治疗膝关节重症骨性关节炎
- 目的玻璃酸钠治疗膝关节骨性关节炎疗效已被肯定,但临床观察表明,它对Ⅰ、Ⅱ期骨性关节炎的治疗疗效较佳,而对严重的骨性关节炎缓解症状较慢。对此类患者的疼痛,特别是患者同时患有髌骨软化症或慢性滑膜炎,关节有较多积液时,往往需要...
- 刘丹平张正张德志
- 关键词：玻璃酸钠醋酸曲安奈德骨性关节炎
- 文献传递
- 经皮A1滑车松解术治疗糖尿病患者扳机指疗效观察
- 2011年
- 目的观察经皮A1滑车松解术治疗扳机指的疗效。方法采用经皮A1滑车松解术治疗糖尿病患者扳机指32例47指(观察组),采用类固醇局部注射治疗46例60指(对照组)。结果两组均顺利完成治疗。观察组发生术后感染1例,对照组未见并发症。观察组治愈45指、复发1指、无效1指,对照组分别为17、28、5指。两组治愈率相比P<0.05。结论经皮A1滑车松解术治疗糖尿病患者扳机指疗效优于类固醇激素局部注射。
- 张正刘丹平
- 关键词：扳机指糖尿病类固醇
- 携带低氧诱导因子1α^(mu)和人源化海肾绿色荧光蛋白双基因真核表达载体构建及其在HEK293A细胞中的表达被引量：1
- 2010年
- 背景:低氧诱导因子1能够调控多种基因共同表达,在骨缺损部位可诱导成熟的血管生成,为各种细胞的成骨分化和成骨活动提供营养支持和代谢保证,促进骨愈合,但其真核表达载体的构建及表达却少见报道。目的:实验拟构建携带低氧诱导因子1αmu(hypoxia inducible factor 1 alpha,HIF-1α)目的蛋白和人源化海肾绿色荧光蛋白(human renilla reniformis green fluorescent protein,hrGFP)的双基因真核表达载体,并将其转染HEK293A细胞,观测其在细胞中的表达。方法:利用PCR技术定点突变目的基因供体质粒pCMV6-XL5-HIF1α携带的人HIF1α基因编码区的第402位、564位和803位氨基酸以及去掉其终止密码子,之后在基因序列前后添加新的酶切位点NotⅠ和PvuⅠ,酶切、测序检测突变情况,将正确突变的HIF1αmu定向连入腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV-IRES-hrGFP-1中。经测序鉴定、PmeⅠ酶切线性化后转化BJ5183-AD-1电感受态细胞,通过hrGFP基因荧光表达检测转染情况。结果与结论:经基因测序证实,HIF-1α基因编码区的第402位、564位和803位氨基酸均定点突变成丙氨酸,终止密码子成功去除。经酶切鉴定及测序证实,重组腺病毒表达载体构建成功。荧光显微镜下观察表明,感染重组腺病毒的HEK293A细胞内有大量绿色荧光表达证实通过Lipofectamine 2000途径可使得重组腺病毒载体成功转染HEK293A细胞。
- 张正李谌胡亮刘丹平
- 关键词：低氧诱导因子1Α腺病毒载体绿色荧光蛋白
- GFP示踪FLAG抗原表位标记BMP2转基因腺病毒穿梭质粒的构建被引量：1
- 2011年
- 目的构建同时表达具有抗原表位FLAG标记的重组人骨形态发生蛋白2(rhBMP2)目的蛋白和示踪绿色荧光蛋白(GFP)报告分子的腺病毒穿梭质粒pShuttle CMV-BMP2+-IRES-hrGFP-1。方法采用PCR技术对pcDNA3-BMP2携带的BMP2基因诱变,去除翻译终止密码子后的基因序列并添加新的酶切识别位点XhoⅠ。测序检测诱变情况,将诱变后的BMP2基因定向导入pShuttle CMV-IRES-hrGFP-1,将质粒分别转染人胚肾细胞HEK293A和兔骨髓间充质干细胞(MSCs)。通过限制性内切酶酶切图谱分析该质粒;采用荧光显微镜检查和免疫组化SP法测定HEK293A中的GFP和MSCs中的BMP2,行重组腺病毒穿梭质粒鉴定。结果质粒pShuttle CMV-BMP2+-IRES-hrGFP-1经双酶切鉴定图谱分析构建正确,HEK293A、MSCs中均有GFP和BMP2表达。结论 pShuttle CMV-BMP2+-IRES-hrGFP-1构建成功。
- 张正李谌陈峻江刘丹平
- 关键词：骨形态发生蛋白2重组腺病毒质粒抗原表位
- 采用S-ROM行全髋关节置换治疗老年股骨转子间骨折13例效果观察被引量：2
- 2011年
- 2009年2月～2010年7月,我们采用组配式髋关节假体（S-ROM）对13例老年股骨转子间骨折患者行人工全髋关节置换术,效果较满意。现报告如下。临床资料：本组男8例，女5例；年龄62～84岁，平均73．4岁。致伤原因：行走摔倒10例，车祸伤3例。
- 张明超张元和张正
- 关键词：老年股骨转子间骨折人工全髋关节置换术髋关节假体骨折患者致伤原因
- 应用半腱肌肌腱修复膝关节外侧结构损伤
- 目的:多种原因引起的膝关节外侧结构损伤所造成的关节不稳,有时应用传统的方法难以修复,我们应用关节镜器械把膝关节的内侧结构（半腱肌腱）导到外侧,加强外侧结构强度,恢复关节稳定,取得了较好的疗效。方法:本组共9例膝关节外侧结...
- 刘丹平张德志张正张勇
- 文献传递
- 腺病毒载体介导的BMP-2转基因诱导成骨研究进展被引量：1
- 2005年
- 骨形态发生蛋白2可诱导具有成骨分化潜能的间充质细胞向成骨细胞分化。腺病毒载体介导的BMP2转基因方法被认为是最有效的BMP2转基因诱导成骨手段。本文参考了大量的有关英文文献,从BMP2腺病毒载体及其介导的BMP2转基因基本途径、成骨诱导研究所取得的成果和存在的问题等几个方面,重点回顾了近五年来的研究进展,并对这一领域的前景进行了一些展望。
- 张正刘丹平
- 关键词：腺病毒载体介导BMP-2诱导成骨间充质细胞转基因方法成骨诱导
- 腺病毒骨形态发生蛋白2绿色荧光蛋白基因转染兔骨髓基质干细胞成骨及示踪作用被引量：4
- 2009年
- 目的观察腺病毒介导的人骨形态发生蛋白绿色荧光蛋白基因（Ad-GFP-hBMP-2）转染对骨髓间质干细胞（bMSCs）成骨能力的影响。方法取日本大耳白兔4只自双侧股骨远端抽取骨髓培养bMSCs。以Ad—GFP—hBMP-2基因（实验组）及Ad—GFP（对照组）基因转染bMSCs后，用ALP检测试剂盒检测两组细胞的ALP活性；原位杂交检测两组细胞Ⅰ型胶原的表达；Westernblot检测细胞中BMP-2的表达。将转染后24h的bMSCs接种到裸鼠体内，术后第4、8、12周观察成骨情况。结果转Ad—GFP—hBMP-2基因组和Ad—GFP组各时间段ALP分泌量差异分别有统计学意义（P〈0．01）；实验组Ⅰ型胶原原位杂交实验组为阳性。实验组成骨阳性率为90％，对照组为40％。结论bMSCs经Ad—GFP—hBMP-2基因转染后能高效表达BMP-2并诱导成骨。腺病毒介导人BMP-2转基因可以提高bMSCs的成骨能力。
- 胡汉祥刘丹平张正李晖王栋梁巴彩凤
- 关键词：基因转染骨形态发生蛋白-2
- 腺病毒穿梭质粒pShuttleCMV-BMP2^+-IRES-hrGFP-1的构建和鉴定被引量：5
- 2005年
- 目的 构建腺病毒穿梭质粒pShuttleCMV -BMP2 + -IRES -hrGFP - 1,为构建表达具有抗原表位标记的骨形态发生蛋白2 (bonemorphogeneticprotein 2 ,BMP - 2 ) ,并同时表达绿色荧光蛋白(greenfluorescentpro tein ,GFP)报告分子的腺病毒真核细胞表达载体打下基础。方法 对目的基因供体质粒pcDNA3-BMP2携带的BMP2基因测序和序列内部存在的限制性内切酶识别位点进行分析,利用PCR (polymeraschainreaction ,PCR)技术对pcDNA3-BMP2携带的BMP2基因突变,以去除翻译终止密码子后的基因序列并添加新的酶切识别位点XhoⅠ。测序检测突变情况,将突变后的BMP2基因(BMP2 + 基因)定向连入腺病毒穿梭质粒pShuttleCMV -IRES -hrGFP - 1,通过限制性内切酶酶切图谱分析鉴定获得的重组质粒。结果 重组质粒经双酶切鉴定图谱正确。结论 成功构建了pShuttleCMV BMP2 + IRES hrGFP -1。
- 张正刘丹平蒲勤郭韬张男
