李洁
- 作品数：7 被引量：9H指数：2
- 供职机构：内蒙古大学生命科学学院哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家基础科学人才培养基金内蒙古自治区高等学校科学研究项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 细粒棘球蚴FABP基因的原核表达及蛋白鉴定
- 2010年
- 构建原核表达载体pET-FABP,优化表达条件,采用免疫学方法鉴定纯化的FABP融合蛋白。载体pMD19-T-FABP和pET-44a(+)经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切,将回收的FABP片段与pET-44a(+)连接,构建原核表达载体pET-FABP并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,优化表达条件,纯化FABP融合蛋白,Western blotting鉴定。成功构建了原核表达载体pET-FABP并在大肠杆菌中高效表达。纯化后的蛋白经SDS-PAGE和Western blotting鉴定正确。构建的表达载体pET-FABP可以在大肠杆菌中大量表达Nus-FABP融合蛋白,为进一步研制FABP亚单位疫苗奠定了基础。
- 郝慧芳王志钢高连山赵云龙白健金永周华从李洁陈献威
- 关键词：细粒棘球蚴脂肪酸结合蛋白原核表达
- 细粒棘球蚴特异性抗原基因P-29的原核表达及免疫学鉴定
- 细粒棘球蚴病(echinooocoosis)又称囊性包虫病(cystic echinooocoosis,CE),是因棘球绦虫的幼虫寄生于人体组织而引起的人兽共患性寄生虫病,呈全球性分布,在我国内蒙古、新疆、甘肃、宁夏、青...
- 李洁郝喜燕陈献威王红霞李树裕王媛媛王志钢
- 文献传递
- 细粒棘球蚴内蒙株特异性抗原基因AgB8/2克隆及原核表达体系的构建
- 目的细粒棘球蚴病(Hydatidosis)又称囊性包虫病(Cystic Echinococcus,CE),是由细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,Eg)的幼期细粒棘球蚴寄生于人体和动物引起的一类...
- 陈献威王红霞李树裕李洁王媛媛王志钢
- 文献传递
- 内蒙古羊源细粒棘球蚴Eg95基因原核表达及蛋白鉴定被引量：1
- 2010年
- 在克隆内蒙古羊源细粒棘球蚴疫苗候选基因Eg95的基础上,构建原核表达载体pET-Eg95并转化E.coliBL21(DE3),优化表达体系,获得Eg95纯化蛋白。将Eg95基因从克隆质粒pMD19-T-Eg95亚克隆到原核表达载体pET44a(+)上,构建原核表达载体pET-Eg95,转化E.coli BL21(DE3)诱导表达,优化表达条件。纯化的Eg95融合蛋白经SDS-PAGE和Western Blot鉴定其正确性和免疫学活性。原核表达载体pET-Eg95在大肠杆菌中高效表达,优化的原核表达条件为:当菌液OD600值为0.6时,加入终浓度为0.1mmol/L的IPTG,37℃,振荡培养5h。纯化后的蛋白经SDS-PAGE和Western blot鉴定为目的蛋白并具有生物学活性。原核表达载体pET-Eg95构建正确并可高效表达可溶性Nus-Eg95融合蛋白,可作为特异性抗原应用于免疫印迹法检测血清抗体。
- 李志伟王志钢湛奎陈献威杨军李洁
- 关键词：细粒棘球蚴EG95原核表达蛋白纯化
- 核酸疫苗pcDNA3.1-EG95的构建及在绵羊胎儿成纤维细胞中的表达被引量：3
- 2010年
- 克隆细粒棘球蚴EG95基因cDNA并构建核酸疫苗pcDNA3.1-EG95。根据GenBank中细粒棘球蚴EG95基因序列(AF134378)设计引物并在上游引物起始密码子前加上Kozak序列(CCACC),提取细粒棘球蚴总RNA,RT-PCR扩增目的基因EG95cDNA,扩增片段克隆到pcDNA3.1(+)中构建重组载体pcDNA3.1-EG95后测序。重组质粒pcDNA3.1-EG95采用脂质体法转染绵羊胎儿成纤维细胞并用G418筛选,RT-PCR检测稳定转染细胞中目的基因的转录。测序结果表明克隆的目的基因包含了471bp的完整ORF并与载体连接正确。RT-PCR检测表明EG95基因在稳定转染的绵羊胎儿成纤维细胞中得到转录。成功构建pcDNA3.1-EG95核酸疫苗并可在绵羊胎儿成纤维细胞中转录目的基因,可进一步用于活体动物免疫研究。
- 杨娇馥王志钢高连山郝慧芳李志伟李洁湛奎
- 关键词：细粒棘球蚴核酸疫苗
- 细粒棘球蚴特异性抗原基因P-29的原核表达及免疫学鉴定
- 2010年
- 目的对细粒棘球蚴P-29基因进行克隆、表达和免疫反应性分析。方法以细粒棘球蚴总RNA为模板,反转录PCR扩增P-29基因,将其克隆至原核表达载体pET44a(+)中,构建重组原核表达载体pET-P-29,转入大肠埃希菌BL21(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察重组蛋白的表达情况,用蛋白纯化试剂盒纯化蛋白,蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白与细粒棘球蚴病患者血清的免疫反应性。结果PCR、双酶切和DNA测序结果表明,重组质粒pET-P-29构建成功。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白Nus-P-29的相对分子质量(Mr)约为93000,纯化后的蛋白浓度为0.78mg/ml。重组蛋白Nus-P-29能被细粒棘球蚴病患者血清识别。结论细粒棘球蚴P-29基因表达成功,纯化后的重组蛋白Nus-P-29具有较强的免疫反应性。
- 李洁王志钢郝喜燕陈献威王红霞李树裕杨娇馥杨军
- 关键词：细粒棘球蚴原核表达
- 细粒棘球蚴AgB8/2基因的原核表达及免疫学鉴定被引量：5
- 2009年
- 旨在克隆细粒棘球蚴AgB8/2基因,优化原核表达体系,鉴定纯化蛋白并初步确定其诊断价值。采用RT-PCR扩增AgB8/2基因cDNA,构建原核表达载体pET-AgB8/2并在大肠杆菌BL21（DE3）中表达,优化表达条件。纯化的AgB8/2融合蛋白经Western blot鉴定正确后,采用斑点免疫金渗滤法初步验证其血清学诊断价值。结果显示,克隆的AgB8/2基因包含了273bp的完整ORF,序列分析表明与其它已报道的AgB8/2cDNA序列的同源性在99%-100%之间。优化的表达条件为,当菌液OD600值为0.6时,加入终浓度为0.05mmol/L的IPTG,37℃,振荡培养5h。纯化的蛋白经Western blot鉴定为目的蛋白。克隆的AgB8/2基因高度保守,原核表达载体pET-AgB8/2构建正确并高效表达可溶性融合蛋白,可作为特异性抗原应用于斑点免疫金渗滤法检测血清抗体。
- 陈献威王志钢王红霞毕玉新李树裕李洁王媛媛
- 关键词：细粒棘球蚴基因克隆原核表达斑点免疫金渗滤法
