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一种细胞核质蛋白分离方法的建立被引量：3: 2010年; 目的拟建立一种方便快捷、经济有效的细胞核质蛋白分离方法。方法利用自建方法、Ambion和Thermo公司的试剂盒分别提取细胞核蛋白和质蛋白,利用Western blot检测Bag-1、ING5和parafibromin蛋白亚细胞定位,通过选择不同的内参蛋白标记细胞组分蛋白的污染。结果自建核质蛋白提取方法与试剂盒相比,在操作时间和分离效果上无显著差别。发现大小不同Bag-1蛋白在胃癌细胞质和核中定位不同,ING5和parafibromin蛋白分别定位在胃癌和肺癌细胞系的细胞核中。结论自建方法可用于实验室常规细胞核质蛋白分离,具有操作简单、方便快捷和经济有效的特点,对后续蛋白组学研究有重要作用。; 徐小燕杨雪夏蒲邢亚楠关一夫郑华川; 关键词：核蛋白

REIC/Dkk-3蛋白在肿瘤发生发展中的作用: 2011年; REIC基因在永生化的细胞系和部分肿瘤细胞系中发现并且表达下调,在许多人的肿瘤组织中表达也减少.目前研究认为,REIC/Dkk-3表达下调可能与启动子的甲基化有关.异常REIC/Dkk-3表达所致细胞表型异常在恶性肿瘤发生和演进过程中发挥重要作用.细胞浆型和分泌型REIC与靶蛋白作用后启动细胞信号传导,但是REIC/Dkk-3的生物学功能尚未深入阐述.对REIC/Dkk-3的研究在理论上可以大大推动肿瘤病因学的发展,为肿瘤的诊断和治疗提供一个新的分子靶点,对提高肿瘤患者生存率和生存质量具有很大的促进作用.如果能研发REIC/Dkk-3抗肿瘤重组多肽及增强REIC/Dkk-3作用的化疗药物,也将为肿瘤患者治疗开辟新的途径和思路.本文就REIC/Dkk-3蛋白在肿瘤发生发展中作用进行综述.; 徐小燕夏蒲杨雪聂小毳郑华川; 关键词：肿瘤甲基化分子靶点

选择性剪接变异体的RT-PCR检测及结果分析被引量：1: 2012年; 目的利用RT-PCR方法检测并分析mRNA选择性剪接变异体。方法针对糖原合成酶激酶(GSK)3β和B细胞转位基因(BTG)3基因变异体差别设计引物,利用RT-PCR扩增后进行电泳和克隆DNA测序。结果 GSK3β和BTG3的RT-PCR产物电泳均出现3条带,经过电泳和克隆DNA测序发现GSK-3β中上面2条带为同一产物。对BTG3上(位于319 bp)、下(位于70 bp)2条带进一步PCR扩增后测序,结果发现3个条带均为同一产物。结论 RT-PCR法检测选择性剪接产物操作方便,对Western蛋白印迹结果评价具有指导意义,但是产生的非特异条带可能是由于某种特殊原因造成,如选择性剪接部位的特异核酸序列,需DNA测序做进一步确定。; 勾文峰杨雪徐小燕王建平郑华川; 关键词：选择性剪接 RT-PCR

地高辛标记核酸病理形态学检测方法的建立及应用: 2012年; 目的建立地高辛标记原位杂交(ISH)和原位PCR(ISP)方法,探讨其在病理形态学检测中的应用。方法以细胞cDNA或质粒DNA为模板制备地高辛探针,ISH检测肺癌、胃癌或结直肠癌切片上JCV T抗原DNA、beclin 1和SERCA3 mRNA表达水平。在肺癌和胃癌切片上扩增地高辛标记的JCV T抗原DNA。杂交或标记后,进行抗地高辛碱性磷酸酶反应并行NBT/BCIP或Fuchsin显色。结果 PCR扩增获得高纯度地高辛标记DNA探针,甲酰胺杂交液杂交显示JCV T抗原存在于JCI细胞的细胞核中,beclin 1和SERCA3 mRNA阳性信号见于结肠癌和癌旁黏膜上皮细胞质中。ISP扩增了地高辛标记的JCV T抗原DNA,显色后发现JCV T抗原主要定位在JCI细胞、肺泡上皮细胞和肺癌细胞核、胃癌及癌旁黏膜细胞核中。NBT/BCIP显色比Fuchsin显色更为敏感,甲基绿复染使得上述2种显色更加清晰。结论地高辛标记的ISH和ISP操作简便,敏感度高,NBT/BCIP显色和甲基绿复染图像美观。; 杨雪勾文峰丁蕾肖丽君高野康雄郑华川; 关键词：原位杂交原位PCR 核酸

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杨雪