沈孝宙
- 作品数：35 被引量：127H指数：6
- 供职机构：中国科学院动物研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划美国洛克菲勒基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生化学工程更多>>
- 转基因动物的研究及其发展被引量：6
- 1989年
- 最近10年来,蒋外源基因导入动物体内已成为一项重要的基因工程技术,为众多的生物医学领域的研究实验室所采用,获得了许多有价值的研究成果,同时也引起了许多生物工程公司的广泛兴趣,进行了开发研究,成为商业上的热点。以下就动物基因转移的方法学、转基因的表达、遗传规律以及应用和立法等问题作一些简要的介绍与评价。 1.转基因的概念;借助基因工程技术将确定的外源基因通过生殖细胞或早期胚胎导入动物个体的染色体上,这个过程称“transgenesis”。一般译作“转基因作用”。
- 沈孝宙
- 关键词：转基因动物基因工程
- 哺乳动物细胞表达系统被引量：2
- 1991年
- (一)重要性在基因工程领域,哺乳动物细胞表达系统日益受到人们重视。许多重要的具医疗价值的蛋白在大肠杆菌表达系统中无生物活性或活性很低。这是由于在此系统中许多真核蛋白不能完成转译后修饰,如糖基化、酰胺化、二硫键的正确连接和亚基的正确装配。而在哺乳动物细胞表达系统中,这些转译后修饰过程能正常进行,产生与天然蛋白完全相同的分子。因此,哺乳动物细胞表达系统正在逐渐形成产业。在理论研究上,哺乳动物细胞表达系统也十分重要,它是研究真核基因调控的必不可少的模型。这个系统不仅对检验基因的同域作用(cis-acting)序列(如启动子)非常有用,而且对研究跨域作用因子(如一些调控蛋白)也极有价值。
- 沈孝宙
- 关键词：哺乳动物细胞
- 牛αS1-酪蛋白基因5’-调节区的分子克隆被引量：1
- 1990年
- 用牛αSl-酪蛋白cDNA作探针,从牛基因组文库中筛选出一段αSl-酪蛋白基因序列。由限制内切酶图谱和Southern印迹分析可以确定其中含有完整的αSl-酪蛋白基因的5’调节区。
- 杨卫民沈孝宙孙雪茵彭红劳为德陈受宜
- 关键词：基因分子克隆
- APP_(770) 转基因小鼠的空间学习记忆能力出现减退(英文)
- 2001年
- 目的 观察APP770 转基因小鼠的空间学习记忆能力是否出现变化以及该变化是否伴随着胆碱乙酰基转移酶(ChAT)活性的改变。方法 选用鼠龄分别为 3个月、6个月和 9个月的转基因和非转基因雌性小鼠 ,每组为 8只。行为学研究的手段有Y迷宫、Morris型水迷宫和十字迷宫。行为学实验后 ,对小鼠脑组织不同部位 (皮层、海马、纹状体和下丘脑 )中胆碱乙酰基转移酶的活性进行测定。结果 与同龄对照小鼠比较 ,9个月的转基因小鼠空间学习记忆能力出现了明显的减退 ,并且其皮层和海马组织里ChAT的活性也明显减少 ,但纹状体和下丘脑里ChAT的活性则没有明显变化。鼠龄为 3个月和 6个月的转基因小鼠与对照鼠比较 ,其空间学习记忆能力则没有变化 ,并且ChAT的活性也基本没有改变。结论 9个月的转基因小鼠空间学习记忆能力出现了明显减退伴随着皮层和海马组织里ChAT活性的明显减少 ,提示转基因小鼠胆碱能系统的变化可能与学习记忆能力的改变有关。
- 李辉沈孝宙陈永福
- 关键词：阿尔茨海默症胆碱能系统学习记忆转基因
- 应用RT-PCR检测基因的体外转录活性被引量：3
- 1998年
- 体外转录分析已广泛应用于分子生物学领域．由于体外转录所产生的ＲＮＡ的量极少，需有灵敏的方法检测生成的ＲＮＡ．本研究发展了一种基于ＲＴ－ＰＣＲ技术鉴定体外转录产物的方法．将待研究基因的启动区与任何一段已知的含转录起始位点的编码序列相连，制备成体外转录的模板．体外转录后，用ＤＮａｓｅⅠ将ＤＮＡ模板完全降解；生成的ＲＮＡ经反转录合成ｃＤＮＡ；再以ｃＤＮＡ为模板，用相应的引物进行ＰＣＲ扩增，产物用琼脂糖凝胶电泳检测．该法灵敏度高，操作简便，无需同位素，且体外转录模板制备方便．还可结合其他技术，如Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹分析，能获得更高的灵敏度．
- 卢震沈孝宙刘冬梅刘冬梅陈洪
- 关键词：体外转录RT-PCR基因转录调控
- 绵羊SRY基因的分子克隆及序列分析被引量：11
- 1994年
- 本研究利用常规方法提取绵羊基因组ＤＮＡ，根据人的ＳＲＹ基因核心序列设计合成了一对引物Ｐ１、Ｐ２。用ＰＣＲ技术对公、母绵羊基因组ＤＮＡ进行体外扩增，将所扩增出的公绵羊特异性ＳＲＹ基因片段重组到质粒ＤＮＡｐＵＣ１９的ＳｍａＩ部位并转化到Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ１０Ｂ中。挑选阳性克隆进行微溶分析，并用限制性内切酶ＥｃｏＲＩ、ＨｉｎｄⅢ酶解。鉴定结果表明，插入片段长度与ＰＣＲ扩增带相符，约２０３ｂｐ。用Ｓａｎｇｅｒ的双脱氧末端终止法测定绵羊ＳＲＹ基因核心序列的部分序列，结果表明，用ＰＣＲ分离并重组到质粒载体中的绵羊ＳＲＹ基因核心序列部分序列长度为２０３ｂｐ，这与设计完全相符。其中该序列的１５５个ｂｐ与人的ＳＲＹ基因相应序列的同源性为８２．５８％（１２８／１５５）。可见哺乳动物ＳＲＹ基因的核心序列具有高度保守性，种间差异很小。
- 葛宝生许罕华周鼎年朱裕鼎高军刘冬梅沈孝宙
- 关键词：绵羊SRY分子克隆DNA序列测定
- 类固醇激素对牛输卵管上皮细胞分泌的调节及其分泌物对小鼠胚胎发育的影响被引量：2
- 1997年
- 模拟发情期（０～６ｄ）母牛外周血浆雌激素和孕酮变化水平，在添加相应水平１７β－雌二醇和孕酮的ＴＣＭ－１９９液中，培养间情期牛输卵管上皮细胞（ＢＯＥＣ）。５％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析ＢＯＥＣ分泌物，发现上皮细胞受类固醇激素作用分泌的２类蛋白质分子量与自然发情期（０～６ｄ）分泌的特异蛋白相似。证明类固醇激素可以调节和启动间情期ＢＯＥＣ的分泌活动。当雌二醇浓度高达１ｍｇ／Ｌ时，即使不加孕酮，ＢＯＥＣ仍能分泌这２类蛋白质。在培养小鼠原核胚的ＣＺＢ培养液内添加牛输卵管上皮细胞分泌蛋白（ＢＯＥＰ），与添加间情期牛输卵管冲洗蛋白（ＢＯＰ）和小牛输卵管冲洗蛋白（ＣＯＰ）相比，能显著提高通过２－细胞阶段胚胎的百分率和桑囊形成率，表明ＢＯＥＰ能较好地促进胚胎的分裂和发育。但ＢＯＥＰ组的桑囊形成率显著低于对照组，表明ＢＯＥＰ中可能缺少某些低于Ｍｒ１．０×１０４的蛋白因子的协调作用，以及含有Ｍｒ３．０×１０４～５．６×１０４的分泌蛋白的抑制作用而阻碍胚胎分裂与发育。
- 杨文胜李建凡马云生程怀江许罕华朱裕鼎刘冬梅沈孝宙
- 关键词：类固醇激素输卵管上皮细胞胚胎发育
- hCGβ真核表达载体的构建和瞬时表达筛选
- 2002年
- 为探讨人绒毛膜促性腺激素 β亚基 (hCGβ)基因避孕疫苗的可能性。利用DNA重组技术将hCGβ的基因片段连接到真核表达载体pCMV4上 ,酶切分析鉴定正确构建了质粒DNApCMV4 -hCGβ。将质粒DNApCMV4 -hCGβ通过脂质体转染的方法导入体外培养的Hela细胞 ,双抗夹心ELISA法检测质粒DNApCMV4 -hCGβ在Hela细胞瞬时表达系统中特异性的表达了hCGβ。结果表明hCGβ表达含量 2 4h为 6 78ng/ml,4 8h为 1 5 2 4ng/ml,说明在体外瞬时表达了特异性hCGβ的pCMV4 -hCGβ真核表达载体能够作为DNA疫苗使用 ,为pCMV4 -hCGβ质粒DNA免疫小鼠进行DNA避孕疫苗的研究奠定了基础。
- 张富春王妮陈幼珍沈孝宙曹咏清王宾
- 关键词：HCGΒ真核表达载体
- 转基因禽类生物反应器及利用其生产重组蛋白或多肽的方法
- 本发明涉及一种转基因禽类生物反应器及利用该生物反应器生产重组蛋白或多肽的方法，更具体地，本发明所涉及的转基因禽类生物反应器为转基因禽类输卵管，另外本发明还涉及专门在禽类输卵管特异表达和分泌的基因表达载体。本发明的特点是所...
- 沈孝宙粱志清李建凡王小珂杨绍清许罕华陈雪秀王瑛
- 文献传递
- BGH转基因小鼠的建立及其特性研究
- 1993年
- 把小鼠的金属疏基组氨酸三甲内盐基因(MT-I)的启动子与牛生长激素(bGH)基因组DNA重组,再以紧邻(pSVCATLBGH)和相差2.3kb的距离(pSV2LBGH)两种形式与猴空泡病毒(SV40)的增强子融合;还有一种是把免疫球蛋白的启动子和增强子与不含内含子的牛生长激素基因融合(pSLBlll).把上述3种结构的重组子显微注射到ICR、昆明白(KB)和C57BL 3种品系供体鼠受精卵中,接着移植到昆明白假孕受体鼠的输卵管,其培育出116只F_0代鼠和13只死胎,经Southern Blot检测,其中27只(pSV2LBGH:ICR 5只;KB7只;pSVCATLBGH:ICR5只;KB8只;C57BL 2只)鼠的基因组中整合有bGH基因;另由pSLBlll重组子做外源基因导入受精卵所得到的13只不同发育阶段的死胎中有9只整合有pSLBlll重组子.对27只阳性鼠于出生后30d开始在饮水中加75mmol/L ZnSO_4进行诱导.结果表明,3种结构形式的bGH基因重组子均以头尾相连的串联体形式,以单点整合于鼠染色体中;所育成的27只bGH转基因鼠有18只不同程度表达了bGH;表达水平与整合的bGH基因拷贝数成正比,其中在肝脏有较高表达的4只鼠呈现明显的促生长效应,它们比正常鼠大0.8～1.2倍,促生长效应与鼠体内bGH的表达水平无对应关系;另外14只表达了bGH的小鼠与正常小鼠大小类似.所有18只小鼠bGH的表达水平均受Zn^(2+)和Cd^(2+)?
- 李宝林苏成芝崔青山殷震陈苏民沈孝宙
- 关键词：生长激素转基因小鼠
