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hCGβ亚单位基因疫苗的初步研究被引量：3: 1996年; ｈＣＧβ亚单位基因疫苗的初步研究张富春王妮刘冬梅９０年代出现的基因疫苗引起了世界各国广泛的注意。世界卫生组织在日内瓦专门召开了一次基因疫苗国际会议。并宣称：基因疫苗是２１世纪疫苗的方向。１９９５年美国纽约科学院召开了基因疫苗专题会议，并认为基因疫苗是...; 张富春王妮刘冬梅; 关键词：避孕疫苗免疫避孕

绵羊SRY基因的分子克隆及序列分析被引量：11: 1994年; 本研究利用常规方法提取绵羊基因组ＤＮＡ，根据人的ＳＲＹ基因核心序列设计合成了一对引物Ｐ１、Ｐ２。用ＰＣＲ技术对公、母绵羊基因组ＤＮＡ进行体外扩增，将所扩增出的公绵羊特异性ＳＲＹ基因片段重组到质粒ＤＮＡｐＵＣ１９的ＳｍａＩ部位并转化到Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ１０Ｂ中。挑选阳性克隆进行微溶分析，并用限制性内切酶ＥｃｏＲＩ、ＨｉｎｄⅢ酶解。鉴定结果表明，插入片段长度与ＰＣＲ扩增带相符，约２０３ｂｐ。用Ｓａｎｇｅｒ的双脱氧末端终止法测定绵羊ＳＲＹ基因核心序列的部分序列，结果表明，用ＰＣＲ分离并重组到质粒载体中的绵羊ＳＲＹ基因核心序列部分序列长度为２０３ｂｐ，这与设计完全相符。其中该序列的１５５个ｂｐ与人的ＳＲＹ基因相应序列的同源性为８２．５８％（１２８／１５５）。可见哺乳动物ＳＲＹ基因的核心序列具有高度保守性，种间差异很小。; 葛宝生许罕华周鼎年朱裕鼎高军刘冬梅沈孝宙; 关键词：绵羊 SRY 分子克隆 DNA序列测定

类固醇激素对牛输卵管上皮细胞分泌的调节及其分泌物对小鼠胚胎发育的影响被引量：2: 1997年; 模拟发情期（０～６ｄ）母牛外周血浆雌激素和孕酮变化水平，在添加相应水平１７β－雌二醇和孕酮的ＴＣＭ－１９９液中，培养间情期牛输卵管上皮细胞（ＢＯＥＣ）。５％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析ＢＯＥＣ分泌物，发现上皮细胞受类固醇激素作用分泌的２类蛋白质分子量与自然发情期（０～６ｄ）分泌的特异蛋白相似。证明类固醇激素可以调节和启动间情期ＢＯＥＣ的分泌活动。当雌二醇浓度高达１ｍｇ／Ｌ时，即使不加孕酮，ＢＯＥＣ仍能分泌这２类蛋白质。在培养小鼠原核胚的ＣＺＢ培养液内添加牛输卵管上皮细胞分泌蛋白（ＢＯＥＰ），与添加间情期牛输卵管冲洗蛋白（ＢＯＰ）和小牛输卵管冲洗蛋白（ＣＯＰ）相比，能显著提高通过２－细胞阶段胚胎的百分率和桑囊形成率，表明ＢＯＥＰ能较好地促进胚胎的分裂和发育。但ＢＯＥＰ组的桑囊形成率显著低于对照组，表明ＢＯＥＰ中可能缺少某些低于Ｍｒ１．０×１０４的蛋白因子的协调作用，以及含有Ｍｒ３．０×１０４～５．６×１０４的分泌蛋白的抑制作用而阻碍胚胎分裂与发育。; 杨文胜李建凡马云生程怀江许罕华朱裕鼎刘冬梅沈孝宙; 关键词：类固醇激素输卵管上皮细胞胚胎发育

牛雄性特异性DNA片段的分子克隆被引量：4: 1994年; 根据小牛胸腺ＤＮＡ复性动力学原理，采用改进的“删除富集法”，对Ｙ特异性ＤＮＡ片段进行富集。以ｐＵＣ１８为宿主菌，构建成富集有Ｙ特异性的部分Ｙ染色体文库。分别以牛雄性和雌性基因组ＤＮＡ为探针，对克隆子进行“差异筛选”，筛选到若干个雄性特异性信号。对其中１个克隆子进行分析鉴定，测得其插入片段大小约为１．４ｋｂ。将其标记成探针。命名为Ｐ－ｄ。分别与２０个公牛基因组ＤＮＡ样品和８个母牛基因组ＤＮＡ样品杂交，阳性信号符合率为８５％，阴性信号符合率为８７．５％。初步证明Ｐ－ｄ具有雄性特异性。研究表明，用本实验方法所克隆到的雄性特异性ＤＮＡ探针鉴别牛胚胎的性别是可能的。; 许罕华葛宝生周鼎年朱裕鼎高昌恒沈孝宙刘冬梅剧冬红; 关键词：雄性特异性 DNA

大麻哈鱼生长激素基因Ⅱ的分子克隆和序列分析(英文)被引量：1: 1996年; 以λ噬菌体ＥＭＢＬ－３为基因载体，构建大麻哈鱼（Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓ　ｋｅｔａ）基因组文库，并从中分离出含全长的生长激素（ｃｓＧＨ）基因的克隆。本研究首次报道了对ｃｓＧＨ全长核苷酸序列分析的结果。发现ｃｓＧＨ基因由６个外显子和５个内含子组成，长度为３３６１碱基对（ｂｐ）。由该序列可推导出含２１０个氨基酸的多肽，其中存在２２个疏水氨基酸残基的信号肽。本研究所分析的ｃｓＧＨ的外显子和内含子，其排列方式与其他鲑类（Ｓａｌｍｏｎｉｄｓ）和罗非鱼（Ｔｉｌａｐｉａ）是相似的，而与鲤科鱼类（Ｃａｒｐｓ）不同，后者外显子和内含子的排列方式与哺乳类和鸟类相似。将所测定的ｃｓＧＨ基因的编码区与已发表的ｃｓＧＨⅡ和ｃｓＧＨ Ⅱ两种ｃＤＮＡ序列进行比较，证明本研究所克隆的ｃｓＧＨ基因应属于ｃｓＧＨ Ⅱ，因它们的编码序列１００％同源。; 王瑛王燕M.威尔特刘冬梅李辉贾雅丽沈孝宙梁志清; 关键词：大麻哈鱼生长激素基因分子克隆鱼纲

鲫鱼HindⅢ高重复DNA序列的分子克隆(英文)被引量：1: 2004年; 基因组DNA高重复序列的研究有助于解释许多重要的生命现象 ,如基因调节、基因转座、基因进化等 ,还可以用于进行种群的遗传分析。鱼类的DNA高重复序列研究资料较少 ,曾在鲤科鱼类发现HindⅢ高重复序列家族。本研究用HindⅢ内切酶消化 ,从鲫鱼 (Carassiusauratusauratus)基因组DNA也克隆出一种独特的高重复序列。序列测定揭示该重复序列长度为 175bp ,在单倍体基因组的拷贝数为 1× 10 5。鲫鱼HindⅢ高重复序列与鲫鱼属 (Carassius)其它同类已知的高重复序列存在某种程度的变异。; Marc WELT梁利群孙效文刘冬梅王瑛沈孝宙; 关键词：重复DNA序列基因进化鲤科鱼类分子克隆基因调节酶消化

鲤鱼金属硫蛋白基因启动区功能的研究被引量：15: 1997年; 以氯霉素乙酰化酶作为报讯基因，利用草鱼肾培养细胞瞬时表达系统，对已克隆的鲤鱼金属硫蛋白（ＭＴ）基因５’调节区１６ｋｂ的序列进行了功能分析。从顺式效应和反式效应研究证明：所克隆的鲤鱼ＭＴ基因５’调节区具有典型ＭＴ启动子的特性。实验发现哺乳动物病毒ＳＶ４０增强子可以加强鱼类ＭＴ启动子的活性，提示在系统进化上鱼类基因不但存在增强子元件，并具有与哺乳动物增强子相似的作用方式，而且作用于增强子的反式效应因子也存在一定的同源性。; 李辉刘冬梅剧冬红贾雅莉沈孝宙沈俊宝孙效文阎学春梁利群王鹏; 关键词：鲤鱼金属硫蛋白基因启动子

乙型肝炎病毒表面抗原基因在异源细胞中的表达研究: 1993年; 本研究构建了一系列乙型肝炎病毒表面抗原基因的表达载体，其中ＨＢｓＡｇ基因的启动区补小鼠金属硫蛋白启动子取代，而对ＨＢｓＡｇ基因下游非编码区的几种基因元件则进行了不同的删除，并且添加异源基因调控元件。利用Ｈｅｌａ细胞瞬时表达系统对各种构建物的表达水平进行分析。实验发现：除了必须取代ＨＢｓＡｇ基因原有的启动子外，乙型肝炎病毒增强子Ｉ及其多聚腺苷酸化信号对ＨＢｓＡｇ在非肝脏细胞中表达也至关重要。; 刘冬梅沈孝宙田开荣; 关键词：乙型肝炎病毒表面抗原基因

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