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牛雄性特异性DNA片段的分子克隆被引量：4: 1994年; 根据小牛胸腺ＤＮＡ复性动力学原理，采用改进的“删除富集法”，对Ｙ特异性ＤＮＡ片段进行富集。以ｐＵＣ１８为宿主菌，构建成富集有Ｙ特异性的部分Ｙ染色体文库。分别以牛雄性和雌性基因组ＤＮＡ为探针，对克隆子进行“差异筛选”，筛选到若干个雄性特异性信号。对其中１个克隆子进行分析鉴定，测得其插入片段大小约为１．４ｋｂ。将其标记成探针。命名为Ｐ－ｄ。分别与２０个公牛基因组ＤＮＡ样品和８个母牛基因组ＤＮＡ样品杂交，阳性信号符合率为８５％，阴性信号符合率为８７．５％。初步证明Ｐ－ｄ具有雄性特异性。研究表明，用本实验方法所克隆到的雄性特异性ＤＮＡ探针鉴别牛胚胎的性别是可能的。; 许罕华葛宝生周鼎年朱裕鼎高昌恒沈孝宙刘冬梅剧冬红; 关键词：雄性特异性 DNA

高效整合转基因兔研究被引量：2: 1996年; 用含有核基质附着区（ＭａｔｒｉｘＡｔｔａｃｈｍｅｎｔＲｅｇｉｏｎｓ，ＭＡＲ）的鸡珠蛋白基因与含有鼠金属硫蛋白（ＭＴ）基因启动子的人－类胰岛素促生长因子１（ｈ－ＩＧＦ－１）基因构建表达了载体。研究了ＭＡＲ对转基因兔整合率的影响。结果表明，带有ＭＡＲ的表达载体转基因兔整合率达到２６．３％，为一般不含ＭＡＲ构件转基因克整合率的两倍，对提高转基因动物生产效率，将起到重要作用。; 李建凡朱裕鼎杨文胜郭勇许罕华葛宝生倪和民; 关键词：转基因兔核基质附着区; 全文增补中

利用PCR技术鉴定奶牛早期胚胎性别的研究被引量：13: 1992年; 朱裕鼎王大可许罕华高昌恒韩燕清黄少华周鼎年; 关键词：聚合酶胚胎性别

绵羊SRY基因的分子克隆及序列分析被引量：11: 1994年; 本研究利用常规方法提取绵羊基因组ＤＮＡ，根据人的ＳＲＹ基因核心序列设计合成了一对引物Ｐ１、Ｐ２。用ＰＣＲ技术对公、母绵羊基因组ＤＮＡ进行体外扩增，将所扩增出的公绵羊特异性ＳＲＹ基因片段重组到质粒ＤＮＡｐＵＣ１９的ＳｍａＩ部位并转化到Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ１０Ｂ中。挑选阳性克隆进行微溶分析，并用限制性内切酶ＥｃｏＲＩ、ＨｉｎｄⅢ酶解。鉴定结果表明，插入片段长度与ＰＣＲ扩增带相符，约２０３ｂｐ。用Ｓａｎｇｅｒ的双脱氧末端终止法测定绵羊ＳＲＹ基因核心序列的部分序列，结果表明，用ＰＣＲ分离并重组到质粒载体中的绵羊ＳＲＹ基因核心序列部分序列长度为２０３ｂｐ，这与设计完全相符。其中该序列的１５５个ｂｐ与人的ＳＲＹ基因相应序列的同源性为８２．５８％（１２８／１５５）。可见哺乳动物ＳＲＹ基因的核心序列具有高度保守性，种间差异很小。; 葛宝生许罕华周鼎年朱裕鼎高军刘冬梅沈孝宙; 关键词：绵羊 SRY 分子克隆 DNA序列测定

猪SRY基因的分子克隆及其序列分析被引量：2: 1995年; 哺乳动物的胚胎发育成为雄性或雌性取决于是否携带有Y染色体.因为Y染色体上存在有能将未分化的性腺(生殖脊)诱导向睾丸分化(雄性)的基因,缺少Y染色体时向卵巢发育(雌性),该基因被命名为睾丸决定因子(Testis-determining factor,人用TDF表示、小鼠用Tdy表示).英国学者Koopman于1990年发现了一位于Y染色体短臂与假常染色体相邻的区域内编码80个氨基酸的单拷贝基因,它所编码的氨基酸序列高度保守.; 葛宝生许罕华周鼎年朱裕鼎刘冬梅沈孝宙; 关键词：SRY PCR扩增分子克隆基因

类固醇激素对牛输卵管上皮细胞分泌的调节及其分泌物对小鼠胚胎发育的影响被引量：2: 1997年; 模拟发情期（０～６ｄ）母牛外周血浆雌激素和孕酮变化水平，在添加相应水平１７β－雌二醇和孕酮的ＴＣＭ－１９９液中，培养间情期牛输卵管上皮细胞（ＢＯＥＣ）。５％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析ＢＯＥＣ分泌物，发现上皮细胞受类固醇激素作用分泌的２类蛋白质分子量与自然发情期（０～６ｄ）分泌的特异蛋白相似。证明类固醇激素可以调节和启动间情期ＢＯＥＣ的分泌活动。当雌二醇浓度高达１ｍｇ／Ｌ时，即使不加孕酮，ＢＯＥＣ仍能分泌这２类蛋白质。在培养小鼠原核胚的ＣＺＢ培养液内添加牛输卵管上皮细胞分泌蛋白（ＢＯＥＰ），与添加间情期牛输卵管冲洗蛋白（ＢＯＰ）和小牛输卵管冲洗蛋白（ＣＯＰ）相比，能显著提高通过２－细胞阶段胚胎的百分率和桑囊形成率，表明ＢＯＥＰ能较好地促进胚胎的分裂和发育。但ＢＯＥＰ组的桑囊形成率显著低于对照组，表明ＢＯＥＰ中可能缺少某些低于Ｍｒ１．０×１０４的蛋白因子的协调作用，以及含有Ｍｒ３．０×１０４～５．６×１０４的分泌蛋白的抑制作用而阻碍胚胎分裂与发育。; 杨文胜李建凡马云生程怀江许罕华朱裕鼎刘冬梅沈孝宙; 关键词：类固醇激素输卵管上皮细胞胚胎发育

鸡溶菌酶基因3＇端MAR在同源细胞系对基因表达调控的研究被引量：5: 1996年; 用带有鸡溶菌酶基因增强子（Ｅ）和启动子（Ｐ）的编码细菌氯霉素乙酰基转移酶（ＣＡＴ）的融合基因（ＥＰＣ），在其上游区、下游区或在上游和下游区同时插入鸡溶菌酶基因３＇端核基质附着区（ＭＡＲ）的不同表达载体ＭＥＰＣ、ＥＰＣＭ和ＭＥＰＣＭ，稳定转染鸡ＨＤ１１Ｐｒｏｍａｃｒｏｐｈａｇｅ同源细胞系，筛选不同表达载体稳定整合后的细胞株，检测ＣＡＴ表达水平，确定其表达基因拷贝数，从而分析鸡溶菌酶基因３＇端ＭＡＲ对基因表达的影响。稳定整合表达和瞬时表达实验结果表明，鸡溶菌酶基因３＇端ＭＡＲ在同源细胞系对基因表达没有激活作用，与该基因５＇端ＭＡＲ在同源或异源细胞系中能激活基因表达形成鲜明对照，说明５＇瑞ＭＡＲ和３＇端ＭＡＲ在调节鸡溶菌酶基因表达上存在一种协调关系。; 许罕华; 关键词：MAR 基因表达溶菌酶

牛雄性特异性DNA片段的分子克隆: 许罕华

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许罕华

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