罗永文
- 作品数：18 被引量：35H指数：4
- 供职机构：华南农业大学兽医学院广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程一般工业技术理学更多>>
- 编码鳜传染性脾肾坏死病毒结构蛋白新基因ORF90.5L的鉴定分析
- 2010年
- 鳜传染性脾肾坏死病毒(Infectious spleen and kidney necrosis virus,ISKNV)全基因组序列于2001年完成测定,全基因组为111362bp,含有124个推测的开放阅读框(ORF)。2007年,Eaton等对12株已完成序列测定的虹彩病毒代表株进行分析比较,除了已经推测的ORF外,认为ISKNV基因组中还存在一个的核心基因(Core gene)ORF90.5L。本研究以ISKNV的cDNA为模板,根据Eaton等报道中推测的上下游位点设计引物扩增出一段963bp的PCR产物。该序列编码一个320个氨基酸的蛋白质,推测分子量为35kD,含有预测的跨膜区,与虹彩病毒属(Iridovirus)其他成员编码的肉豆蔻基膜蛋白有较高的同源性。将该片段克隆到原核表达载体pET32a(+)中,纯化表达的重组蛋白pET90.5L免疫昆明鼠获得高效价多克隆抗体。利用抗pET90.5L抗体与纯化病毒进行免疫印迹,结果表明,抗pET90.5L的多抗可以特异性识别病毒粒子中大小约为35kD的蛋白条带,ORF90.5L编码的蛋白应为病毒的结构蛋白。本研究旨在为ISKNV基因工程疫苗的研发和病源侵染机制研究提供基础参考。
- 王庆罗永文刘春曾伟伟张超石存斌吴淑勤
- 关键词：核心基因病毒结构蛋白
- 猪源狂犬病病毒基因序列分析
- 通过对新分离的猪源狂犬病病毒(GD-SH01)全基因进行序列分析，为了解析该毒株的来源及国内其它流行毒株的关系.将来自病猪的脑组织制备成乳液，颅内接种3天龄的乳鼠和6周龄的成鼠.结果显示，该毒株在乳鼠脑内传代5次后，病毒...
- 张莹罗永文刘祥茵杨先峰黄永亮施赫赫傅秋玲阳佑天郭霄峰
- 关键词：狂犬病病毒流行病学全基因组
- 文献传递
- 上转换发光纳米粒子表面修饰及应用研究进展被引量：2
- 2017年
- 由于上转换发光纳米技术能够快速、准确、高效的检测食品中的危害因素,因此成为了食品安全检测技术研究的热点。上转换发光纳米粒子的合成与表面修饰是上转换发光纳米技术在食品安全检测中运用的关键。因此介绍上转换发光纳米粒子的合成方法和表面修饰,以及在食品安全检测中上转换发光纳米材料表面修饰的应用情况。
- 梁紫璐毕水莲罗永文王宗源
- 关键词：表面修饰食品安全检测
- 单克隆抗体技术在抗生素类兽药残留检测中的应用研究进展被引量：1
- 2017年
- 单克隆抗体技术是一种免疫学技术,具有特异性、多样性和定向性等特点,是现代生命科学研究和诊断的重要工具。文章介绍了单克隆抗体制备技术及其近年来在快速检测动物源性食品中抗生素类兽药残留的应用研究进展,以期为抗生素类兽药免疫学检测方法的应用与开发提供参考。
- 俞憬高永清毕水莲罗永文王宗源
- 关键词：单克隆抗体兽药抗生素
- 狂犬病病毒G蛋白的过表达及对病毒的抑制
- 2018年
- 【目的】探究G蛋白在狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)复制中的作用,以揭示携带双G基因的重组RABV的Hep-dG与亲代毒株rHep-Flury在神经母细胞瘤(NA)细胞中滴度差异的原因,为RABV致病机制的研究奠定基础。【方法】通过病毒吸附、入侵、荧光定量PCR、Western-blot以及中和抗体阻断等试验,检测G蛋白过表达对IFN-β以及相关因子转录的影响。【结果】Hep-dG感染能显著上调NA细胞中IFN-βmRNA的表达,激活了下游因子STAT1的表达与磷酸化,在较低的感染复数(MOI=0.01)下,Hep-dG感染后24 h即可显著促进IFN-β基因的表达,36 h达到最高水平(P<0.001)。该病毒进入细胞后,产生了更多的病毒Leader RNA和RIG-I mRNA,且与IFN-βmRNA的表达高度一致。抗体阻断IFN-β后,Hep-dG在NA细胞中的病毒滴度显著上升(P<0.01),约为阻断前的7.9倍,且与亲代毒株rHep-Flury无显著差异。与阴性对照比较,5μg的pH-G质粒转染能刺激IFN-β的转录(P<0.05),表明真核表达RABV G蛋白能在一定程度上刺激IFN-β的转录。【结论】本研究初步揭示了G蛋白激活先天性免疫应答的原因和作用。RABV G蛋白的过表达,通过促进病毒Leader RNA的转录,激活了RIG-I介导的IFN-β通路,进而抑制了Hep-dG在NA细胞的繁殖。G蛋白的过表达也对干扰素通路起到一定的作用。
- 阳佑天张琼张博越刘文俊罗永文赵静梅明珠张莹罗均郭霄峰
- 关键词：狂犬病病毒G蛋白Β干扰素病毒滴度
- 表达犬细小病毒VP2基因的重组狂犬病病毒生物学特性研究
- 目的：研究表达犬细小病毒VP2基因的重组狂犬病病毒生物学特性。方法：将本课题组构建成功的重组狂犬病病毒rHEP-Flury(vP2-3.0)、rHEP-F1ury(dG-VP2)进行基因鉴定和G蛋白、VP2蛋白表达的鉴定...
- 施赫赫牛学锋刘祥茵黄永亮阳佑天罗永文林颖仪刘慧思郭霄峰
- 关键词：狂犬病病毒基因重组生物学特性攻毒保护试验
- 猪伪狂犬病病毒流行毒株gE/gI缺失突变株的构建及生物学特性研究被引量：4
- 2018年
- 【目的】为研制针对猪伪狂犬病病毒流行毒株的疫苗提供候选毒株。【方法】构建针对猪伪狂犬病病毒流行毒株的gE/gI缺失重组转移质粒pMD-LA-RA及携带EGFP标记基因的重组转移质粒pMD-LA-EGFP-RA,将pMDLA-EGFP-RA与伪狂犬病病毒流行毒株PRV AH进行同源重组,利用EGFP为筛选标记,获得携带EGFP基因的gE/gI基因缺失突变株PRV AH gE~–/gI~–/EGFP^+,以此毒株与pMD-LA-RA进行第2次同源重组,筛选去除EGFP基因的gE/gI基因缺失突变株PRV AH gE~–/gI~–,并通过生长曲线、易感细胞连续传代和动物免疫评价其增殖能力、遗传稳定性及免疫原性。【结果】通过2次同源重组,结合荧光观察、空斑纯化和PCR检测,成功获得了PRV AH gE~–/gI~–,经PCR鉴定、荧光观察及测序鉴定,证实该毒株g E和g I基因被成功缺失,且不携带EGFP标记基因。生物学特性研究结果表明,该毒株增殖能力与亲本毒株相当,遗传稳定性及免疫原性良好。【结论】采用同源重组技术成功构建了免疫原性良好的猪伪狂犬病病毒流行毒株gE/gI基因缺失突变株,为研制针对流行毒株的基因缺失疫苗奠定了一定的基础。
- 潘慧李艳华向柯宇唐栋程珍珠罗永文琚春梅
- 关键词：猪伪狂犬病病毒流行毒株基因缺失同源重组
- Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因重组鸭瘟病毒载体的构建被引量：5
- 2011年
- 为了构建含有Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因的重组鸭瘟病毒,将已建立的鸭瘟病毒TK基因缺失转移载体(pBlueSK-TK-EGFP)进行改造,在其绿色荧光表达盒内插入Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因,将重组后的转移载体(pBlueSK-TK-EGFP-VP1)转染已感染鸭瘟病毒的鸭胚成纤维细胞.原始病毒液在鸭胚成纤维细胞上盲传3代后仍能观察到绿色荧光;以Ⅰ型鸭肝炎病毒阳性血清对pBlueSK-TK-EGFP-VP1转染的细胞样品作Westen-blot检测,出现特异条带,且相对分子质量约为54 000.结果表明该研究已成功构建携带Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因的鸭瘟病毒TK基因缺失转移载体,其能够在真核细胞中正确表达.
- 张婧董嘉文罗永文郭霄峰
- 关键词：鸭瘟病毒VP1基因
- 猪源狂犬病病毒N和G基因的序列分析
- 2012年
- 通过对新分离的猪源狂犬病病毒GD-SH01株N基因和G基因进行序列分析,解析它们与其他狂犬病病毒N和G基因的差异.提取猪源狂犬病病毒GD-SH01株的总RNA,采用RT-PCR的方法扩增N基因和G基因,并与T载体连接,克隆至大肠埃希菌DH5α.测序后与国内外部分毒株的N基因和G基因进行核苷酸序列和氨基酸序列比对.与其他毒株相比,N基因核苷酸相似性为84.3%～98.0%;氨基酸相似性为92.5%～99.3%.G基因核苷酸相似性为80.4%～98.2%;氨基酸相似性为87.8%～99.6%.
- 张莹刘祥茵罗永文杨先峰黄永亮施赫赫傅秋玲阳佑天吴晓薇郭霄峰
- 关键词：狂犬病病毒
- 狂犬病病毒强、弱毒株糖蛋白调节Ⅰ型干扰素作用的差异分析
- 2024年
- 【目的】狂犬病(Rabies)是由狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)引起的一种高致死性人兽共患传染病。Ⅰ型干扰素(IFN-I)通路在抵抗RABV感染中发挥重要作用。RABV可通过磷蛋白及核蛋白的功能逃逸IFN-I的抗病毒作用,本研究旨在探讨对RABV的致病性有重要影响的糖蛋白(Glycoprotein,G)在调节IFN-I通路方面扮演怎样的角色。【方法】将RABV弱毒株Hep-Flury的G基因替换成致病株CVS-11的G基因,拯救得到重组病毒HepG,分析Hep-Flury、CVS-11和HepG这3种毒株在体内和体外感染对IFN-I通路激活和调控的差别,比较它们在神经细胞中对抗IFN-I抗病毒作用的差异性。【结果】替换了CVS-11的G基因后,重组病毒HepG致病力增强,能够100%致死小鼠,在鼠脑中的增殖水平显著高于亲本株Hep-Flury。在感染鼠脑早期及体外神经细胞时,弱毒株Hep-Flury能够较快地激活IFN-I通路相关基因的表达,重组病毒HepG的激活能力介于HepFlury和CVS-11之间。利用Poly(I:C)激活神经细胞的IFN-I通路后,Hep-Flury的增殖被显著抑制,CVS-11和HepG的复制几乎不受影响,表现出一定的抵抗能力。【结论】RABV的G蛋白在调节和抵抗IFN-I通路方面发挥重要功能,为进一步探究RABV致病毒株的G蛋白如何协助病毒在中枢神经系统中逃逸IFN-I提供了线索和依据。
- 肖宇吴凡张宝石徐孟磊龙家慧罗均郭霄峰罗永文
- 关键词：狂犬病狂犬病病毒糖蛋白免疫逃逸
