金永杰
- 作品数：11 被引量：57H指数：5
- 供职机构：南开大学更多>>
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- 相关领域：生物学化学工程理学轻工技术与工程更多>>
- 假单胞菌L-半胱氨酸合成酶的纯化和性质研究被引量：7
- 2004年
- 假单胞菌TS 1 1 38的细胞浆液通过硫铵沉淀、SephadexG 75凝胶过滤、DEAE Cellulose5 2离子交换、SephadexG 1 0 0凝胶过滤等分离纯化手段分别将从L ATC合成L 半胱氨酸的两个酶———L ATC水解酶和L SCC水解酶纯化了 83 9和 90 3倍。SDS PAGE鉴定均为单一条带 ,两种酶的相对分子质量分别为 37 5和 42 8kD ;酶反应的最适温度均为 35℃ ,最适pH分别为 7 0和 8 0 ;酶的米氏常数分别为 0 67mmol L和 0 1 5mmol L ,最大反应速度分别为0 39× 1 0 3mmol L·min和 0 42× 1 0 3mmol L·min。
- 金永杰杨文博刘忠白钢余养盛
- 关键词：酶纯化酶性质
- 假单胞菌TS-1138 L-半胱氨酸脱巯基酶的纯化和性质研究被引量：5
- 2004年
- 假单胞菌TS-1138L-半胱氨酸脱巯基酶经DEAECellulose-52阶段洗脱、SephadexG-100柱层析被纯化了80.3倍,SDS-PAGE鉴定为单一条带,该酶的相对分子质量为53.0kDa;酶反应的最适pH为7.5,最适反应温度为35℃,该酶的米氏常数为2.37μmol/L,最大反应速度为0.11μmol/mL·min·Pb2+对该酶有很强的激活作用,Zn2+对该酶有较强的抑制作用,羟胺为该酶特异性的抑制剂.
- 金永杰杨文博刘忠白钢孙丹
- 关键词：L-半胱氨酸脱巯基酶假单胞菌酶纯化酶性质
- 假单胞菌转化DL-ATC合成L-Cys相关酶的分离纯化
- L-半胱氨酸是一种重要的含硫氨基酸,广泛应用于医药、食品、化妆品以及饲料工业.该实验室从土壤中筛选获得了一株假单胞菌TS-1138,可转化DL-ATC合成L-半胱氨酸.该研究从产酶及酶促反应条件优化、关键酶的分离纯化、酶...
- 金永杰
- 关键词：假单胞菌DL-ATC酶法转化酶纯化
- 文献传递
- 假单胞菌生物合成L-半胱氨酸途径中脱巯基酶的研究被引量：1
- 2006年
- 通过PCR方法扩增得到假单胞菌TS1138L-半胱氨酸脱巯基酶基因(cd),将其克隆至pBluescript SKII载体,测定了含有L-半胱氨酸脱巯基酶基因的1·2kb DNA片段序列,并与其它菌株的脱巯基酶基因进行了同源性比较;同时,将其克隆至表达载体pET-21a(+),IPTG诱导表达,表达产物经Ni-NTA柱亲合层析后,得到纯化的重组蛋白。利用脱巯基酶的活性染色方法对重组表达的L-半胱氨酸脱巯基酶进行了鉴定,并探讨了L-半胱氨酸脱巯基酶的酶学性质,以及在生物转化合成L-半胱氨酸途径中的关键作用。
- 余养盛李洋金永杰白钢杨文博
- 关键词：L-半胱氨酸脱巯基酶假单胞菌基因克隆酶学性质
- 假单胞菌TS1138 L-半胱氨酸脱巯基酶的研究
- 本文通过PCR方法扩增得到假单胞菌TS1138L-半胱氨酸脱巯基酶基因(cd),将其克隆至克隆载体pBluescriptSKII,测定了含有脱巯基酶基因(cd)的1.2kbDNA片段的序列;同时,将其克隆至表达载体pET...
- 余养盛李洋金永杰白钢杨文博
- 关键词：L-半胱氨酸脱巯基酶假单胞菌基因克隆基因表达
- 文献传递网络资源链接
- 微生物酶法合成L-半胱氨酸和L-胱氨酸被引量：21
- 2003年
- 从土壤中分离到一株假单胞菌Pseudomonas sp.TS1138菌株,其胞内含有DL-2-氨基-△2-噻唑啉-4-羧酸(DL-2-Amino-△2-Thiazoline-4-Carboxylic Acid,缩写为DL-ATC)水解酶,以培养16h的细胞为酶源,可转化DL-ATC合成L-半胱氨酸.该菌株生长及产酶的最佳碳、氮源为葡萄糖和尿素,DL-ATC对酶的产生具有诱导作用.酶促反应后的产物经薄层层析、旋光度法和高效液相色谱鉴定为L-半胱氨酸.
- 刘忠杨文博白钢田旺金永杰
- 关键词：L-半胱氨酸L-胱氨酸酶法转化假单胞菌
- CpG寡核苷酸链作为新型佐剂的研究进展被引量：3
- 2007年
- 1924年Ramon提出免疫佐剂的概念,80多年来,虽然进行了深入的研究,人用疫苗佐剂主要还是铝胶佐剂.直到最近几年才上市了几种新型的疫苗佐剂,如MF59(高压条件下将鲨烯与Tween 80 和Span 85混合后进行微流化形成的均一小滴状乳液,应用于美国Chiron公司开发的流感亚单位疫苗),重组霍乱毒素B亚单位(rCTB,应用于瑞典SBL Vaccin AB公司研发的霍乱疫苗Dukoral),AS04(一种含有单磷脂A和皂角苷的油包水乳剂,应用于英国GlaxoSmithKline公司的乙型肝炎疫苗Fendrix)等,但应用范围较小.……
- 廖文勇盛长忠金永杰吴全忠刘方李小强
- 关键词：CPGODN新型佐剂免疫佐剂
- L-半胱氨酸高转化率菌株的构建及代谢调控理论研究
- 白钢陈宁杨文博怀丽华余养盛马雷刘春琴黄磊乔明强文峰刘忠刘淑云金永杰徐庆阳李洋周昌平田旺寇广会李梅
- 该研究采用化学合成的DL–ATC为底物，经假单胞菌TS1138菌株的胞内酶，催化水解L–ATC生成L–半胱氨酸，该技术可以在该类氨基酸以及其他发酵产品的生产上具有重要的借鉴意义；对L–半胱氨酸的代谢途径中关键酶的编码基因...
- 关键词：
- 关键词：L-半胱氨酸代谢途径酶法转化
- 酶法生产L-半胱氨酸培养基的响应面分析优化被引量：23
- 2004年
- 利用 SAS软件的 Plackett-Burman设计法对微生物酶法生产 L-半胱氨酸的培养基组成进行筛选 ,筛选出 4个影响较大的重要因素 ,即葡萄糖、玉米浆、尿素、DL-2 -氨基 -Δ2 -噻唑啉 -4-羧酸 ( DL-2 -mino-Δ2 -Thiazo-line-4-Carboxylic Acid,缩写为 DL-ATC) ,并且用 SAS软件二次响应面分析法进行回归分析 ,得到了各因素的最佳水平值 ,经五批培养验证 ,预测值与验证试验平均值接近 .5 L发酵罐培养试验表明 ,在优化条件细胞酶活力提高 2 5 .4% .
- 刘忠杨文博孙丹白钢金永杰
- 关键词：L-半胱氨酸酶法转化
- NaCS-PDMDAAC微胶囊固定化假单胞菌TS-1138从ATC合成L-半胱氨酸被引量：6
- 2005年
- 采用非均相反应制备NaCS(硫酸纤维素钠),考察了反应液中正丙醇-硫酸的最佳比例为25∶35,NaCS和PDMDAAC的最适滴制浓度分别为4%和3%;利用NaCS-PDMDAAC微胶囊对假单胞菌TS-1138进行固定化并进行连续培养,结果表明,菌体能在胶囊内很好的生长和繁殖,连续培养132h后菌浓可达到4.5×1011个/mL胶囊,是在相同条件下游离培养的6倍;固定化菌体以ATC为底物生成L-半胱氨酸的催化活性是游离培养菌体的2.5倍,并且固定化菌体的重复使用能力明显优于游离菌体.重新考察固定化菌体的最适催化反应时间为3h,在一定程度上弥补了微胶囊传质性相对较差的不足.
- 金永杰杨文博刘忠白钢李洋余养盛孙丹
- 关键词：固定化假单胞菌L-半胱氨酸
