陈实 作品数:153 被引量:425 H指数:11 供职机构: 华中科技大学同济医学院附属同济医院 更多>> 发文基金: 国家高技术研究发展计划 国家自然科学基金 国家教育部博士点基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 更多>>
灵长类动物ABO血型不合肾移植后超急性排斥反应模型的建立 被引量:1 2014年 目的 建立灵长类动物ABO血型不合肾移植后超急性排斥反应模型.方法 选择B型血食蟹猴为受者,A型血食蟹猴为供者,行ABO血型不合同种肾移植.根据是否接受致敏预处理,将受者猴分为2组:(1)未致敏对照组(n=1),直接施行血型不合的同种肾移植术;(2)KLH-A预致敏组(n=3),预先皮下注射钥孔戚血蓝蛋白(KLH)偶联血型抗原A(KLH-A抗原),致敏2周后施行血型不合的同种肾移植术.检测受者猴血清抗A血型抗体水平的变化,观察两组受者猴在移植术中开放血流1h内及术后移植肾存活情况,并对移植肾进行病理学检测及诊断.结果 在术中未观察到未致敏对照组移植肾超急性排斥反应的发生,术后存活超过30 d(血肌酐为263 μmol/L);KLH-A预致敏组3例受者猴在致敏后14 d,血清中抗A抗体水平显著升高,肾移植术中血流开放1h内移植物即转为紫黑色,HE染色及免疫荧光检测证实均发生超急性排斥反应.结论 通过KLH偶联血型抗原预先致敏,以显著升高受者猴相应血型抗体水平的策略,能成功建立灵长类动物ABO血型不合肾移植超急性排斥反应模型. 王军祥 钟山 王筱啸 陈松 陈实 陈刚关键词:ABO血型不合 肾移植 超急性排斥反应 灵长类动物 前列腺素E1在体外肝脏灌流中对无心跳供肝保护作用的实验 被引量:2 2008年 目的:探讨无心跳供肝缺血再灌注损伤时发生微循环障碍的机制,以及前列腺素E1在体外肝脏灌流中对无心跳供肝的保护作用。方法:实验根据是否在体外肝脏灌流(extracorporeal liver perfusion,ECLP)系统的灌流液中加入前列腺素E1(PGE1)随机分为2组:A组(对照组)和B组(实验组)。观察灌流后6 h 3个时间点供肝的胆汁分泌量、门静脉和肝动脉的压力、耗氧率的变化,以及灌流液中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)、内皮素-1(ET-1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平和灌流后的常规病理和超微病理变化。结果:B组肝脏再灌流后在1h时间点的胆汁分泌量、门静脉和肝动脉的压力和耗氧率和A组差异没有显著性,但随着灌流时间的延长,B组肝脏的胆汁分泌量、门静脉和肝动脉的压力和耗氧率和A组差异均有差异性(P<0.05或P<0.01);灌流液中ET-1和TNF-α水平在各个时间点两组差异均有显著性(P<0.05或P<0.01);常规病理和超微病理检查显示B组病变较A组轻。结论:在无心跳供肝的缺血再灌注损伤中ET-1和TNF-α起了非常重要的作用,在ECLP系统灌流液中使用PGE1灌流无心跳供肝可以抑制ET-1和TNF-α的合成和分泌,改善肝脏的微循环障碍和降低肝功能的损伤。 龚瑾 劳学军 曹明溶 王西墨 龙刚 陈实关键词:前列腺素E1 Caspase-3和Caspase-8肝脏缺血再灌注损伤基因沉默保护大鼠 被引量:3 2008年 目的观察caspase-3和caspase-8基因沉默对大鼠肝脏缺血再灌注损伤((IRI)的保护作用。方法分别构建针对大鼠caspase-3和caspase-8基因的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体。肝脏IRI前48h经门静脉注射磷酸盐缓冲液(PBS)、空载体或caspase-3和caspase.8shRNA。实验随机分为4组,假手术组、PBS组、空载体组和shRNA组。阻断大鼠70%人肝血流40min,再灌注6、12、24h、3、5、7d检测血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平,肝组织Caspase-3和caspase-8 mRNA的表达,caspase-3和caspase-8蛋白活性,细胞凋亡情况,丙二醛(MDA)以及超氧化物岐化酶(SOD)的含量。结果与PBS组和空载体组比较,shRNA组再灌注6、12、24h、3、5d血清ALT和AST水平显著降低(P〈0.05),caspase-3和caspase-8mRNA水平、caspase-3和caspase-8蛋白活性(caspase-3活性:0.18±0.03比0.36±0.03和0.38±0.02,P〈0.05;caspase-8活性:0.16±0.03比0.32±0.02和0.34±0.03,P〈0.05)、肝细胞凋亡指数[(22.46±3.25)%比(35.24±2.33)%和(37.36±2.51)%,P〈0.05]和肝组织中MDA含量[(76.2±15.3)比(123.5±12.4)、(136.7±13.6)nmoVmg,P〈0.05)显著降低,SOD活性显著升高[(24.1±3.2)比(12.2±3.1)、(11.4±2.9)U/mg,P〈0.05]。结论caspase.3和caspase.8基因沉默可以抑制细胞凋亡的发生,从而起到保护肝脏IRI的作用。 陈栋 张艳 朱珉 郭晖 刘斌 陈刚 张伟杰 陈知水 陈实 陈孝平关键词:肝脏 缺血 再灌注损伤 CASPASE-3 CASPASE-8 基因沉默 抗CD8单抗与抗CD40L单抗联合应用对小鼠心脏移植后慢性排斥反应的影响 2006年 目的探讨干预慢性迟发性超敏反应(DTH)与CD8+T淋巴细胞的细胞毒等效应机制对同种小鼠心脏移植后慢性排斥反应的影响。方法建立小鼠颈部异位心脏移植模型,实验组以BALB/c小鼠为供者,C57BL/6小鼠为受者,术后0、2、6及14d腹腔注射抗CD8单克隆抗体(抗CD8单抗)200μg/d,术后0、2及4d腹腔注射抗CD40L单克隆抗体(抗CD40L单抗)250μg/d;同系移植对照组供、受者均为BALB/c小鼠,术后同期腹腔注射等量生理盐水;同种移植对照组以BALB/c小鼠为供者,C57BL/6小鼠为受者,术后不使用上述单抗。观察各组移植心的存活时间及移植心组织病理学变化。结果同种移植对照组移植心的平均存活时间为7.3d;实验组与同系移植对照组移植心的存活时间均超过60d。同种移植对照组移植心呈典型急性排斥反应病理学改变;同系移植对照组移植心组织未见明显病理变化;实验组移植心呈现血管周围炎、间质纤维化和血管内膜增生等慢性排斥反应组织病理改变。结论清除CD8+T淋巴细胞和阻断CD40/CD40L通路的处理方案虽可预防急性排斥反应,显著延长移植心的存活时间,但并不能阻止慢性排斥反应的发生。 刘斌 黄亚冰 朱珉 甄中广 曾志贵 郭晖 陈实关键词:心脏移植 移植物排斥 异种器官移植转基因猪检测系统的建立 2001年 以 PCR、免疫荧光、细胞毒试验在 DNA、表达、功能水平对转 h DAF基因猪进行了检测。结果表明 :转基因猪的整合率为 19.35 % ( 18/ 93) ;在 14头转基因阳性猪中 ,有 7头动脉肌肉层表达了外源 h DAF基因 。 陈付学 魏庆信 曹军平 郑新民 郭晖 陈实 张英汉关键词:转基因猪 异种器官移植 烙铁头血小板活化素延长豚鼠到大鼠的异种移植心脏存活时间 2006年 目的 研究烙铁头血小板活化素(TMVA)对大鼠血小板聚集的抑制作用以及对豚鼠到大鼠的异种移植心存活时间的影响。方法 (1)TMVA对血小板聚集率的影响:将Wistar大鼠随机分为3组,每组5只,各组经阴茎背静脉注射不同剂量(20、50或100μg/kg)的TMVA,于注射前以及注射后0.5h和24h时抽血,测定血小板聚集率。(2)TMVA对豚鼠到大鼠的异种移植心存活时间的影响:以豚鼠为供者,Wistar大鼠为受者,制作颈部异位心脏移植模型,实验组于移植心恢复血液循环前0.5h经静脉给予TMVA50μg/kg,另设不使用TMVA的对照组。观察移植心的存活时间,停跳后的移植心组织行病理学检查,并用放射免疫法检测心肌组织内6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)及血栓素B2(TXB2)的含量。结果(1)静脉给予50或100μg/kg的TMVA后0.5h即能完全抑制血小板聚集。(2)实验组移植心的存活时间为10~135min,中位数为42min;对照组为4~16min,中位数为5min,两组比较,差异有统计学意义(P〈0.01)。两组移植心心肌组织均有明显的间质水肿、出血等超急性排斥反应的表现,但实验组心肌组织中未见血小板微血栓,而对照组可见血小板微血栓。两个组6-keto-PGF1α。与TXB2的差异无统计学意义,但实验组6-keto-PGF1α。与TXB2的比值明显高于对照组(P〈0.05)。结论 TMVA在体内能抑制血小板聚集及异种移植物排斥过程中血小板微血栓形成,能显著延缓豚鼠到大鼠异种心脏移植超急性排斥反应的发生。 陈刚 陈实 魏勤 王婉瑜 熊郁良关键词:心脏移植 移植物存活 蛇毒液类 仿生学在移植免疫研究中的应用 2007年 世界正在进入仿生学时代。在生命科学领域中进行仿真学研究,将极大地促进人类对生命现象的认知,并揭示其普遍规律。运用仿生学原理在天然模型面前扬其利,避其害,将为科学工作者提供一个崭新的科研思维平台。从仿生角度洞悉并破解移植免疫奥秘将是一个具有广阔前景的创新源泉。 朱珉 王璐 谢林 陈刚 陈实关键词:仿生学 耐受 DCD供器官病理学评估的国际文献复习和初步经验 【目的】复习国际DCD供器官病理学评估资料,结合我中心DCD器官移植实际开展DCD供器官病理学评估。初步摸索DCD供器官病理学评估的意义、快速病理学评估方法和比较冷冻切片和快速石蜡切片的优劣。【方法】检索和研究1975年... 郭晖 陈孝平 陈实 陈忠华 魏来 陈知水 曾凡军 明长生 张伟杰 蒋继贫 官念樵 陈栋建立猪心脏移植至猕猴腹腔内的异位心脏移植模型 被引量:1 2006年 目的 评价改进后的猪心脏移植至猕猴腹腔内的异位心脏移植模型的效果。方法 建立21例猪心脏移植至猕猴腹腔内的异位心脏移植模型,其中采用传统手术方法11例,改进方法10例。改进方法为缩短供心缺血时间,调整了手术顺序,先游离受者供吻合的腹主动脉及下腔静脉段后,再行供心切取,并且改进了切取供心的方法。比较2种手术方法的热缺血时间、移植心功能恢复情况及术后并发症。结果 采用传统手术方法时,移植心准备时间为20~30min,热缺血时间为3~5min,总缺血时间为80~90min,再灌注后均未恢复正常的全心搏动,仅见右心收缩,移植后发生并发症较多(包括出血、吻合口血栓形成、肠道并发症及静脉回流不畅等)。改进手术方法后,移植心准备时间为5~10min,热缺血时间〈1min,总缺血时间为35~40min,再灌注后有6例恢复全心搏动,发生并发症较少。结论 改进后的猪心脏移植到猕猴腹腔内的异位心脏移植模型,其手术方法明显优于传统方法。 陈刚 陈实 王西墨 沈世乾 王虹 陈利君 吴瑛 朱建国关键词:心脏移植 猕猴 IL-5上调体外培养的人嗜酸性粒细胞TGF-β_1的表达 被引量:1 2005年 目的研究白细胞介素5(IL5)对人嗜酸性粒细胞(Eos)中转化生长因子β1(TGFβ1)表达的调控作用。方法采用改良的密度梯度离心法分离并体外培养人外周血Eos,实验组加入相同浓度的白细胞介素4(IL4)、IL5和干扰素γ(IFNγ)以及不同浓度的IL5共同培养,ELISA和RT PCR法检测细胞培养上清液TGFβ1蛋白和mRNA的表达。结果与对照组相比,浓度均为10-9mol/L的IL4、IL5在蛋白水平和转录水平对TGFβ1的表达均有上调作用,而IFNγ则表现为抑制;10-11、10-9、10-7mol/LIL5均能显著增强体外培养的Eos中TGFβ1蛋白的表达。结论Th2型细胞因子IL5可以上调人嗜酸性粒细胞中TGFβ1的表达。 黄亚冰 刘斌 朱珉 甄忠广 曾志贵 王璐 陈实关键词:白细胞介素-5 嗜酸性粒细胞 转化生长因子-Β1