陈家劲
- 作品数：5 被引量：21H指数：3
- 供职机构：暨南大学医学院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广东省医学科学技术研究基金中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 诱导人脐带MSCs分化为胰岛样细胞团的促成熟方案及机制被引量：4
- 2013年
- 目的:通过各种生物化学制剂的不同组合在体外诱导人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)向胰岛样细胞团(ILCs)分化,筛选出能表达激素原转化酶(PC)1和PC2的促成熟方案。方法:用胶原酶Ⅱ消化、过滤离心和不完全消化传代的方法从人的完整脐带中分离和纯化hUC-MSCs,流式细胞术、RT-PCR和免疫细胞荧光技术检测其干细胞标志物。选用A、B、C 3种方案诱导hUC-MSCs向ILCs分化:方案A为含10μg/L碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、10μg/L表皮生长因子(EGF)、10 mg/L银杏提取液(GBE)及2%胎牛血清(FCS)的高糖培养基IM-DM;在方案A基础上加入10μg/L尼克酰胺为方案B;在方案B基础上加入10μg/L肝细胞生长因子(HGF)为方案C。在hUC-MSCs诱导前后,通过倒置显微镜观察其形态变化,采用RT-PCR、qPCR和Western blotting检测胰岛相关mRNA和蛋白,特别是PC1和PC2的表达情况。结果:(1)细胞形态、表面相关抗原、干细胞特异基因的表达等情况表明hUC-MSCs可以从人脐带中被成功地分离和纯化;hUC-MSCs普遍表达nestin,轻微表达Isl1。(2)RT-PCR检测发现方案A诱导的ILCs有Glut-2和MafA mRNA表达,方案B诱导的ILCs有Glut-2、MafA、Nkx6.1和PC2mRNA表达,方案C诱导的ILCs有Glut-2、MafA、Nkx6.1、PC2、Ngn3、Pdx1、PC1和胰岛素mRNA表达,提示A、B和C3种方案诱导的细胞有逐渐成熟的趋势。qPCR检测也证实了PC1 mRNA仅在方案C中有表达,PC2 mRNA在方案B和方案C中均有表达,但方案C中PC2 mRNA的表达量显著高于方案B(P<0.01);Western blotting结果也表明PC1蛋白只在方案C中有表达;PC2酶原(ProPC2)与PC2在方案B和方案C中都有表达,且它们在方案C中的表达量均显著高于方案B(P<0.01)。结论:(1)hUC-MSCs具有向胰岛祖细胞或胰岛细胞分化的潜能;(2)方案C中尼克酰胺和HGF可促进hUC-MSCs向ILCs分化,使ILCs表达PC1并上调PC2;相对于方案A和B,方案C是一种促成熟方案。
- 苏仲春陈家劲王圳陈志明王跃春
- 关键词：脐带间充质干细胞胰岛样细胞团
- 重楼活性单体(PP-22)对人胃癌MGC803细胞增殖和凋亡的影响被引量：3
- 2015年
- 目的探讨重楼活性单体PP-22对人胃癌MGC803细胞增殖和凋亡的影响及联合氟尿嘧啶或洛铂的抗癌效应。方法采用噻唑蓝(MTT)法和克隆形成抑制实验观察不同浓度的重楼单体PP-22对人胃癌MGC803细胞增殖抑制作用;采用PP-22分别联合氟尿嘧啶或洛铂,观察对人胃癌MGC803细胞增殖抑制作用;碘化丙啶(PI)单染及Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞周期变化及细胞凋亡水平;Western blotting检测PP-22对细胞凋亡相关蛋白的表达。结果与正常肝L02细胞相比,重楼单体PP-22能显著抑制MGC803细胞的生长,作用呈剂量-效应关系;随着PP-22浓度的增加,细胞克隆形成逐渐减少,与细胞对照组相比有显著差异;PP-22与不同浓度的化疗药物(氟尿嘧啶,洛铂)联合作用于MGC803细胞48 h,可提高MGC803细胞对这些化疗药物的敏感性;不同浓度PP-22作用后,细胞阻滞于S期;存在Caspase-3和Caspase-9蛋白的活化和降解,抗凋亡蛋白Bcl-2减少,细胞促凋亡蛋白Bak的表达增加。结论 PP-22通过诱导人胃癌MGC803细胞凋亡抑制细胞增殖,并提高MGC803细胞对氟尿嘧啶,洛铂的敏感性。
- 宫瑞松肖晓慧刘志龙陈家劲刘纪明蒋建伟
- 关键词：重楼胃癌MGC803细胞凋亡敏感性
- 重楼活性单体PP-26对胃癌细胞的细胞毒性作用及其机制
- 研究目的:研究重楼活性单体PP-26对人胃癌细胞的增殖抑制作用,并探讨其作用机制,以期为重楼活性单体PP-26的开发利用提供实验依据。研究方法和研究内容:1.MTT法和细胞克隆形成抑制实验检测不同剂量PP-26对人胃癌M...
- 陈家劲
- 关键词：重楼胃癌细胞AKT线粒体凋亡途径
- 文献传递
- 重楼活性单体PP-26抑制结肠癌SW620细胞增殖并诱导细胞凋亡被引量：11
- 2015年
- 目的:探讨重楼活性单体PP-26对人结肠癌SW620细胞增殖抑制作用及其机制.方法:采用噻唑蓝(MTT)法和克隆形成抑制实验观察不同浓度的重楼单体PP-26对人结肠癌SW620细胞增殖抑制作用;PI单染及Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞周期变化及细胞凋亡水平;Western blotting检测PP-26对细胞周期、细胞凋亡相关蛋白以及Akt和ERK蛋白的表达.结果:与正常肝LO2细胞相比,重楼单体PP-26能显著抑制SW620细胞的生长,作用呈剂量-效应关系;随着PP-26浓度的增加,细胞克隆形成逐渐减少,与细胞对照组相比有显著差异;不同浓度PP-26作用后,细胞阻滞于G1期;PP-26作用细胞24 h后,CDK4、CDK6表达下降,P15、cyclin D1表达增加;不同浓度PP-26作用后,细胞晚期凋亡率增加,随浓度增加有上升趋势;PP-26作用细胞24 h后,线粒体相关凋亡信号通路蛋白Caspase-9、Caspase-3表达下降,PARP切割条带增加,细胞促凋亡蛋白Bax的表达增加,抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-x L减少,p-Akt和p-ERK蛋白表达均下降.结论:重楼活性单体PP-26通过上调p15促进结肠癌SW620细胞阻滞于G1期,通过抑制P13K/Akt信号通路及ERK信号通路,活化线粒体凋亡通路,诱导细胞凋亡.
- 陈家劲王娟娟张鹏王莉王国才蒋建伟王跃春
- 关键词：重楼结肠癌SW620细胞凋亡
- 重楼活性单体pp-10通过抑制PI3K/Akt通路诱导人胃癌细胞BGC-823凋亡和自噬被引量：5
- 2015年
- 目的:探讨重楼/七叶一枝花(Paris polyphylla)的醇提物单体pp-10诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡和自噬及其分子机制。方法:采用MTT法和克隆形成抑制实验观察不同浓度的重楼单体pp-10对人胃癌BGC-823细胞的增殖抑制作用;Hoechst33342染色法检测pp-10作用于人胃癌BGC-823细胞后细胞核形态的改变;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;Western blotting检测重楼单体pp-10对细胞凋亡和自噬相关蛋白Caspase-3、Caspase-9、(ADP-核糖)聚合酶(PARP)、Bax、Bcl-2、LC3、P62以及PI3K/Akt信号通路相关蛋白(Akt、p-Akt、m TOR、p-m TOR、P70s6k、p-P70s6k)表达的影响。结果:重楼单体pp-10能显著抑制BGC-823细胞的生长,作用呈时间-效应关系及剂量-效应关系;克隆形成抑制实验表明随着pp-10浓度的增加,细胞克隆形成逐渐减少,与对照组相比有显著差异;在荧光显微镜下观察可见其细胞核固缩、边聚、裂解等细胞凋亡形态学变化;流式细胞术检测显示,随着作用药物浓度的增高,其凋亡率逐渐升高;Western blotting结果表明,随着药物浓度的增加,线粒体相关凋亡信号通路蛋白Caspase9、Caspase3及PARP均出现酶切活化条带,细胞促凋亡蛋白Bax的表达水平增加,抗凋亡蛋白Bcl-2减少,自噬相关蛋白Ⅱ型LC3增加,P62蛋白减少,p-Akt蛋白的表达水平下降,Akt下游蛋白p-m Tor、p-p70S6K表达减少。结论:重楼单体pp-10通过抑制BGC-823细胞增殖,诱导细胞凋亡和自噬,与下调P13K/Akt信号通路有关。
- 王娟娟张鹏黄志宏陈家劲李强王国才李药兰蒋建伟
- 关键词：重楼胃癌BGC-823细胞
