刘树玲
- 作品数：56 被引量：73H指数：5
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 抗凝血酶受体单克隆抗体的制备与鉴定被引量：3
- 1997年
- 采用杂交瘤技术，获得了４株稳定分泌抗凝血酶受体单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株。４株ＭｃＡｂ均为ＩｇＧ１κ链。ＥＬＩＳＡ交叉试验结果表明，该ＭｃＡｂ不与人凝血酶、凝血酶原和ＨＣＶ多肽反应。４株杂交瘤细胞培养上清液效价为３．２×１０－２～１．２８×１０－３，腹水效价为１．６×１０－６～５．１２×１０－７。
- 陈万荣徐静刘树玲刘树玲王海涛
- 关键词：凝血酶受体单克隆抗体ELISA
- 汉滩病毒膜蛋白重组腺病毒的构建表达及免疫效果研究被引量：2
- 2004年
- 探讨利用腺病毒载体作为汉滩病毒基因工程疫苗载体的可行性。通过PCR扩增,得到完整的汉滩病毒76-118株M片段编码区,将该片段克隆入质粒pAdTrackCMV的CMV启动子下游,得到阳性克隆pAdTrackCMV-M。PmeI线性化的阳性克隆与腺病毒骨架载体pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183,经同源重组后得到重组病毒pAdEasy-M。pAdEasy-M经PacI线性化后,脂质体介导转染293细胞,经Western-blot检测表明,G1、G2基因在293细胞中得到表达。重组病毒免疫BALB/c小鼠,产生了具有一定中和活性的抗体。该研究为进一步研制以腺病毒为活载体的工程疫苗奠定了基础。
- 罗保君张强董京芳丁美刘树玲杭长寿李银太周育森
- 关键词：汉滩病毒M片段重组腺病毒
- 炭疽毒素保护性抗原和LFn介导的增强型绿色荧光蛋白进入HeLa细胞的研究
- 2008年
- 目的研究炭疽毒素保护性抗原（protective antigen，PA）和致死因子（lethal factor，LF）N端254个氨基酸（LFn）在辅助增强型绿包荧光蛋白（EGFP）进入细胞中的作用。方法分别扩增炭疽毒素的基因片段和EGFP的基因全长，将两片段先后克隆至pET-21a（＋），构建成重组表达质粒pET-LFn-EGFP，在大肠杆菌中诱导表达，并对融合蛋白LFn-EGFP进行纯化。利用荧光共聚焦显微镜和流式细胞术研究LFn-EGFP融合蛋白进入细胞的情况。结果获得较高纯度的融合蛋白LFn-EG-FP，纯度可达90％以上，体外实验显示该融合蛋白保留了LFn与PA结合的活性，并且能够进入到HeLa细胞中。结论LFn-EGFP蛋白本身电会以未知的机制进入细胞，在PA辅助时，LFn-EGFP进入细胞的效率会有所增加。
- 易绍琼于少洋于婷任声权刘树玲杨秀旭董大勇陈薇
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白HELA细胞炭疽杆菌
- 抗炭疽芽孢杆菌保护性抗原单克隆抗体轻、重链可变区基因及其应用
- 本发明涉及抗炭疽芽孢杆菌保护性抗原(PA)单克隆抗体轻、重链可变区基因和基因编码的多肽，以及所述基因和多肽在制备炭疽的新型诊断试剂和治疗药物中的应用。本发明人制备了抗PA特异性单克隆抗体4B2、5E1和2A8杂交瘤细胞株...
- 陈薇李冰徐俊杰李建民刘树玲侯利华付玲
- 文献传递
- 抗金黄色葡萄球菌SasA抗原的单克隆抗体及其应用
- 本发明公开了抗金黄色葡萄球菌SasA抗原不同结构域的单克隆抗体，以及所述抗体在制备抵御金黄色葡萄球菌感染药物中的应用。该特异性的抗体联合使用时在小鼠模型中具有良好的保护性。
- 陈薇杨益隆易绍琼李建民郭强徐俊杰于长明刘树玲
- 文献传递
- 构象稳定的破伤风毒素Hc片段突变体(HcM)的制备及其免疫原性分析被引量：1
- 2011年
- 破伤风是由破伤风杆菌侵入人体伤口、生长繁殖、产生毒素而引起的一种急性特异性感染,其死亡率高,严重危害人民生命健康。研究证实破伤风毒素重链C端(Hc)具有与毒素受体结合的活性,完全保留了全分子的免疫原性,有望开发成为新的基因工程破伤风亚单位疫苗以替换传统的甲醛灭活类毒素疫苗。由于野生型Hc蛋白(HcW)易形成分子间及分子内二硫键,且各构象分子之间易发生不稳定的转换,为疫苗的生产工艺带来困难,因此,通过将破伤风HcW蛋白的869位半胱氨酸突变为丙氨酸,构建构象稳定的破伤风亚单位疫苗突变体HcM,对HcM进行表达、发酵和纯化,研究其在不同条件下的稳定性,比较其与受体GT1b亲和力的变化及免疫原性。实验结果表明HcM在大肠杆菌中获得了高效可溶性表达,通过QXL柱、phenyl-Hs柱和source30Q柱三步纯化,可获得纯度95%以上的HcM蛋白。纯化后的HcM蛋白在不同保存条件下构象稳定且保持了与破伤风毒素受体GT1b结合的活性。免疫小鼠后,HcM能够诱导小鼠产生高滴度抗体并能够保护小鼠抵御1×103 LD50剂量的破伤风毒素攻击。以上结果表明构象稳定的HcM有望成为新的破伤风重组亚单位疫苗候选者,其生产工艺简单、稳定且保持了与野生型相似的免疫原性,不论是针对日常破伤风治疗还是对于国家应对突发事件(战争、地震等灾害)的药品储备均具有重大意义。
- 于蕊侯利华刘树玲于长明张晓艳刘颖陈薇
- 关键词：破伤风HCM亚单位疫苗
- 破伤风毒素受体结合区Hc在大肠杆菌中的高效表达及应用
- 本发明涉及一种通过核苷酸序列优化使破伤风毒素受体结合区Hc在大肠杆菌中获得高效可溶性表达的方法。根据国内破伤风梭菌C.Tetani强毒株CMCC64008株的测序结果，对破伤风毒素受体结合区Hc序列进行分析优化，优化后的...
- 陈薇于蕊侯利华于长明刘树玲任军房婷
- 鼠疫抗原LcrV在乳酸乳球菌中的表达与鉴定被引量：3
- 2010年
- 目的以乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)为载体,将鼠疫抗原LcrV基因导入乳酸乳球菌内,构建重组肠道微生态菌株,作为黏膜免疫疫苗的先期探索和尝试。方法采用酸诱导P170启动子,乳酸乳球菌本身的SP310mut2信号肽,将鼠疫杆菌LcrV抗原结构基因克隆到质粒pAM J397上,电转化感受态Lactococcus lactis PSM565。结果经重组子PCR鉴定,SDS-PAGE检测,W estern-b lot鉴定,在Lactococcus lactisPSM565/pAM J397-V培养基上清中获得了38 kD的鼠疫抗原LcrV蛋白。结论在乳酸乳球菌中成功表达了鼠疫V抗原,为下一步鼠疫黏膜疫苗的研制打下基础。
- 曹晓梅张虎成李曼刘树玲侯利华付玲陈薇
- 关键词：乳酸乳球菌黏膜免疫
- 一种新的丙型肝炎病毒单链丝氨酸蛋白酶基因的构建、表达与鉴定
- 2002年
- 根据丙型肝炎病毒 (HCV)丝氨酸蛋白酶晶体结构特点 ,设计并构建了一种新的单链型丝氨酸蛋白酶分子 .该分子由辅因子NS4A的核心序列、柔性连接子GSGS和NS3丝氨酸蛋白酶结构域组成 .利用设计的 3条引物 ,通过 2轮PCR获得单链丝氨酸蛋白酶基因 ,插入原核表达载体pQE30中 ,转化大肠杆菌M15 ,获得重组克隆 .经低剂量诱导和低温培养 ,目的基因获得高水平可溶表达 .以金属螯合层析法纯化的重组蛋白纯度达 95 %以上 .间接ELISA法检测 98份血清证实 ,该蛋白具有良好的抗原性和特异性 ;以重组蛋白底物NS5ab和单链丝氨酸蛋白酶建立了简便、实用的丝氨酸蛋白酶体外活性检测系统 ;以该系统观察了PMSF和EDTA对蛋白酶活性的影响 .结果表明 ,PMSF能够抑制蛋白酶的酶切活性 ,而EDTA不能抑制酶的活性 .单链型HCV丝氨酸蛋白酶的成功表达以及体外活性检测系统的建立 ,为丝氨酸蛋白酶抑制剂的研制奠定了物质基础 .
- 杜桂鑫侯利华陈万荣刘树玲张永国孙大铭王海涛
- 关键词：丙型肝炎病毒基因表达
- 丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶抗原性分析及特异性抗体制备被引量：1
- 2002年
- 目的 分析丙型肝炎病毒 (HCV)丝氨酸蛋白酶的抗原性并制备特异性抗体。方法 构建表达质粒并且在大肠杆菌中可溶性表达单链型丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶 ;以纯化后的重组蛋白包被酶联板对 86份献血员和 12份健康人血清中的特异性抗体进行检测 ;将纯化蛋白偶联到Sepha rose 4B上制备亲和纯化柱 ,对丙肝病毒感染者血清中的特异性抗体进行亲和纯化 ;以纯化蛋白免疫小鼠 ,制备特异性单克隆抗体 ,对纯化后的人多抗和鼠单抗进行鉴定。结果 以纯化的重组单链丝氨酸蛋白酶为抗原检测 98份血清 ,结果阳性率为 73.9%,商品试剂盒漏检的 1份血清中也检测出特异性抗体。用重组蛋白从 2 0 0mlHCV感染者血清中亲和纯化到 4.5 7mg多克隆抗体 ,效价达 10 7,特异性很好。制备的 4株IgG类鼠单抗 ,无交叉反应 ,能够被人血清抗体竞争性抑制。结论 表达的HCV丝氨酸蛋白酶具有良好的抗原性 ,在HCV感染人群中该区域抗体的阳性率较高 ,制备了特异性很好的多克隆抗体和单克隆抗体。
- 杜桂鑫刘树玲侯利华陈万荣王海涛
- 关键词：抗体制备丙型肝炎病毒抗原性丝氨酸蛋白酶HCV丙型肝炎
