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颗粒酶B直接裂解部分断裂的基因组DNA——颗粒酶B诱导细胞凋亡新途径被引量：8: 2003年; 目的 :颗粒酶B(GranzymeB ,GraB)对核内物质具亲和力 ,体外除去核膜的细胞核中可观察到大量GraB聚积 ,观察GraB是否直接作用于基因组DNA。方法 :通过抽提人外周血淋巴细胞总RNA ,进行RT PCR克隆GraBcDNA ,构建GraB原核表达载体 ,用限制性酶切和DNA测序进行鉴定 ;异丙基 1 硫代 β 呋喃半乳糖苷 (IPTG)诱导表达 ,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)分析表达产物。表达产物经亲和层析纯化后 ,观察其对基因组DNA的功能。结果 :表达产物以可溶性分子形式存在于菌体中 ,具有良好的抗原性和特异性 ,特异性底物检测有活性 ,且具有直接作用于部分断裂的基因组DNA ,使其发生进一步裂解的活性。结论 :GraB直接作用于部分断裂的基因组DNA ,这可能是GraB诱导细胞凋亡新的作用途径。; 李先茂曾位森张亚历; 关键词：颗粒酶B 基因克隆原核表达凋亡

肝储脂细胞表达CYP11B2mRNA与实验性肝纤维化的关系研究被引量：1: 1999年; 目的比较CYP11B2在正常与实验性肝纤维化大鼠肝组织中的表达,评价安体舒通的抗纤维化作用。方法取雄性wistar大鼠160只,随机平均分为4组。模型组:CCLA油0.25mL/100mg皮下注射,每周三次;安舒体通组:CCLA油0.25ml/100mg皮下注射,每周三次;安体舒通20mgkg/d灌胃,1次/曰;马洛替脂组:CCLA油0.25ml/100mg皮下注射。每周三次:马洛替脂50ml/kg/d灌胃,1次/日;对照组:橄榄油0.25/ml/100mg皮下注射,每周次。于2、4、6、8、1O周末在光镜下动态观察组织学改变,图象分析仪测量胶原面积。RT-PCR和原位杂交检测纤维化及正常肝组织CYP11B2mRN的表达。结果 RT-PCR显示CYP11B2mRN在纤维化肝组织中表达上调。原位杂交显示CYP11B2mRNA表达定位于储脂细胞胞浆,在纤维化形成时表达增细。在肝纤维化形成的早中期阶段(6周以前),用安体舒通治疗能使肝纤维化分级和胶原面积减少。结论 CYP11R2mRNA在纤维化肝脏的储脂细胞中表达增强。安体舒通对早中期肝纤维化具有一定的治疗作用。; 李旭杨希山吴平生孟莹李素梅李先茂赖文岩张虹Yoshiyu Takedalsamu MiyamonByoyuTakeda; 关键词：CYP11B2 脂细胞安体舒通实验性肝纤维化 CCL4

血管内皮生长因子受体结合肽介导颗粒酶B靶向性抗肿瘤血管生成被引量：15: 2002年; 目的　观察血管内皮生长因子受体 (VEGFR)结合肽 -颗粒酶 B(Gra B)融合蛋白抗血管生成的作用 .方法　抽提人外周血淋巴细胞总 RNA,进行 RT- PCR克隆 Gra B c DNA;抽提 L o Vo细胞总 RNA,进行 RT- PCR克隆 VEGFR结合肽c DNA,用限制性酶切和 DNA测序进行鉴定 ;通过聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS- PAGE)分析表达产物 .表达产物经亲和层析纯化后 ,以人血管内皮细胞 (ECV30 4 )和鸡胚尿囊膜血管测定其生物学活性 .结果　表达产物以可溶性分子形式存在于菌体中 ,具有良好的抗原性和特异性 ,且具有抑制血管内皮细胞增殖及破坏鸡胚尿囊膜血管形成的活性 .结论　 VEG-FR结合肽 - Gra B融合蛋白具有抑制血管生成的功能。; 李先茂曾位森张亚历刘晓晴; 关键词：颗粒酶B 基因克隆原核表达

颗粒酶B的表达纯化和鉴定被引量：2: 2002年; 目的　克隆颗粒酶 B(Gra B) ,构建 Gra B的原核表达载体 ,从而建立其原核表达体系 ,获得高效表达的重组 Gra B.方法　抽提人外周血淋巴细胞总 RNA,进行 RT- PCR克隆Gra B c DNA,构建 Gra B原核表达载体 ,用限制性酶切和 DNA测序进行鉴定 ;异丙基 - 1-硫代 -β-呋喃半乳糖苷 (IPTG)诱导表达 ,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS- PAGE)分析表达产物 .表达产物亲和层析纯化并用免疫印迹法鉴定 ,以 Gra B底物测定其活性 .结果　表达产物以可溶性分子形式存在于菌体中 ,具有良好的抗原性和特异性 ,并能作用于 Gra B特异性底物 .结论　建立了 Gra B原核表达系统 .; 李先茂曾位森张亚历张振书赖卓胜刘晓晴; 关键词：颗粒酶B 基因克隆原核表达

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李先茂