李斌
- 作品数：4 被引量：18H指数：3
- 供职机构：天津科技大学生物工程学院天津市工业微生物重点实验室更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 3-甾酮-Δ~1-脱氢酶的融合表达及纯化被引量：1
- 2006年
- 3-甾酮-Δ1-脱氢酶是甾体母核降解的关键酶,能催化3-甾酮化合物在C1,2位处脱氢,提高原有底物的生物活性。利用表达载体pET-30a,实现了简单节杆菌3-甾酮-Δ1-脱氢酶在大肠杆菌BL21(DE3)中的高效表达。利用SDS-PAGE分别对超声破碎后的上清和沉淀进行分析,并用分光光度法检测酶的活力。结果表明,表达出的蛋白主要以无活性的包涵体形式存在,利用Ni离子螯合层析的方法纯化融合蛋白,复性后的酶活比简单节杆菌提高了近10倍。
- 李玉路福平李斌杜连祥
- 关键词：包涵体
- 色褐链霉菌磷脂酶D基因pld的克隆与表达被引量：10
- 2007年
- 利用表达载体pET-22b(+),实现了色褐链霉菌磷脂酶D基因在大肠杆菌BL21(DE3)中的高效表达。利用镍亲和柱对表达产物进行纯化,将纯化后的重组磷脂酶D作用于底物卵磷脂和丝氨酸定向合成磷脂酰丝氨酸,并用HPLC法检测酶活力。结果表明,目的蛋白可在短时间内进行大量表达。转酯反应6 h后卵磷脂的转化率达到31%,重组磷脂酶D活力达到39 U.(mg蛋白)-1。
- 李斌路福平史文玉杜连祥
- 关键词：磷脂酶D基因表达转酯反应
- 离子交换法解除丁酸梭状芽孢杆菌发酵液中丁酸抑制的研究被引量：5
- 2007年
- 采用离子交换法吸附发酵液中的丁酸，从18种树脂中筛选出了1种对丁酸吸交性能较好的树脂A。树脂A对10g／L的丁酸溶液中丁酸的静态吸附量为243．3g／kg，对5g／L丁酸梭状芽孢杆菌发酵液中丁酸的静态吸附量则为142．2g／kg。动态吸附实验表明，树脂A吸附性能良好，洗脱峰高而窄，再生性能优良。5L发酵罐实验表明，发酵残液经陶瓷膜过滤，再经过离子交换树脂脱酸后，补充新鲜培养基打入发酵罐中进行循环使用，大大降低了原发酵液中丁酸对丁酸梭状芽孢杆菌生长的抑制，大幅度提高了菌体浓度，使之由补料分批高浓度培养时的6．1×10^8个／mL提高到1．2×10^9个／mL。
- 史文玉路福平李涛田琳李斌杜连祥
- 关键词：丁酸树脂
- 磷脂酰丝氨酸合成酶基因pss的克隆与表达被引量：3
- 2007年
- 磷脂酰丝氨酸合成酶能催化转酯反应,是定向合成特定磷脂类物质特别是磷脂酰丝氨酸的工具酶,但出发菌株产量低,很大程度上限制了酶法合成磷脂酰丝氨酸的工业化应用。利用表达载体pET-22b,实现了大肠杆菌磷脂酰丝氨酸合成酶基因在大肠杆菌BL21(DE3)中的同源高效表达。利用镍亲和柱对表达产物进行纯化,并用HPLC法对纯化后的重组酶的活力进行检测。结果表明,目的蛋白可在短时间内进行大量表达,蛋白含量是出发菌株的100倍,同时经6h的转酯反应转化率达到33%,重组磷脂酰丝氨酸合成酶活力达到69U/mg蛋白。
- 李斌路福平刘逸寒钱磊戴永鑫
- 关键词：大肠杆菌酶基因表达转酯反应
