沈传陆
- 作品数：17 被引量：42H指数：4
- 供职机构：东南大学医学院理学与病理生理学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 癌基因TRE17与肌钙蛋白C2相互作用的鉴定被引量：5
- 2005年
- 目的:寻找癌基因TRE17的结合蛋白。方法:分别构建了TRE17/PGBKT7和TRE17(447)／PGBKT7诱饵质粒,用酵母双杂交技术筛选了人骨骼肌CDNA表达文库,并用GST-PULLDOWN分析进一步观察了癌基因TRE17与其结合蛋白之间的作用。结果:酵母双杂交分析提示,癌基因TRE17可能结合6种靶蛋白,包括PUR ALPHA、肌球蛋白轻链2、乳酸脱氢酶A和肌钙蛋白C2等,其中,仅肌钙蛋白C2能够既结合全长的癌基因TRE17,又结合仅编码TRE17 氨基端447个氨基酸的TRE17(447)。GST-PULLDOWN分析表明FRE17(447)明显结合肌钙蛋白C2,而不是阴性对照 GST。结论:肌钙蛋白C2能特异性结合癌基因TRE17,为进一步研究TRE17的恶性转化机制提供了新的线索。
- 沈传陆
- 关键词：癌基因肌钙蛋白蛋白相互作用酵母双杂交
- 阿霉素对人乳腺癌细胞MCF-7表达KIF4A的抑制作用被引量：2
- 2010年
- 目的:探讨阿霉素对人乳腺癌细胞MCF-7表达KIF4A的影响。方法:用Western blotting方法检测阿霉素处理MCF-7细胞后不同时间该细胞表达的KIF4A蛋白;用不同浓度的阿霉素处理MCF-7细胞96h后,检测KIF4A蛋白,并进行衰老相关半乳糖苷酶染色。结果:与未用阿霉素处理的MCF-7细胞相比,阿霉素处理的MCF-7细胞表达KIF4A蛋白降低;衰老相关半乳糖苷酶染色率由5%提高到42%,染色阳性的细胞形态亦呈衰老样变。结论:阿霉素处理MCF-7细胞可使KIF4A蛋白表达水平降低,KIF4A蛋白表达降低与阿霉素引起MCF-7细胞衰老的关系有待进一步研究。
- 王露武慧娟徐宁王丛阳何泽沈传陆
- 关键词：阿霉素细胞衰老MCF-7细胞
- Prx1高表达对人PC3前列腺癌细胞氧化损伤的作用被引量：6
- 2005年
- 目的:探讨过氧化物还原酶1(Prx 1)表达增加对人肿瘤细胞抗过氧化氢毒性作用的影响。方法:构建Prx 1真核表达质粒,稳定转染培养的人PC3前列腺癌细胞,用Western blot检测Prx 1在稳定转染PC3细胞中的表达,用MTT法观察细胞的存活率。结果:Western blot分析表明,Prx 1真核表达质粒稳定转染的PC3细胞表达Prx 1显著增加;MTT分析表明,在过氧化氢浓度为0.25、0.5、1和2 mmol.L-1时,Prx 1稳定转染的PC3细胞存活率显著增加。结论:Prx 1高表达显著增强人PC3前列腺癌细胞抗过氧化氢毒性作用。
- 沈传陆朱俊
- 关键词：前列腺癌细胞过氧化氢稳定转染
- 多柔比星对乳腺癌MCF-7细胞表达BRCA1和PARP-1蛋白的影响被引量：2
- 2013年
- 目的:探讨多柔比星(doxorubicin)对乳腺癌MCF-7细胞表达DNA损伤修复相关蛋白乳腺癌易感蛋白1(breast cancer-associated protein 1,BRCA1)和多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1[poly (ADP-ribose) polymerase-1,PARP-1]的影响。方法:蛋白质印迹法检测不同浓度的多柔比星干预并恢复不同时间后,MCF-7细胞表达BRCA1和PARP-1的水平及其PARP-1活性的动态变化。FCM法检测多柔比星和PARP-1抑制剂3-氨基苯酰胺(3-aminobenzamide,3-ABA)单独或联合干预后MCF-7细胞及SKBR3.0细胞(BRCA1突变型乳腺癌细胞)的凋亡情况。结果:随着多柔比星浓度的提高,PARP-1的活性产物聚腺苷二磷酸核糖[poly(ADP-ribose),PAR]逐渐增加(P<0.01),然而其全长表达(相对分子质量为1.13×105的片段)略有降低,断裂(相对分子质量为8.9×104的片段)有所增加;而BRCA1表达却呈现先增加后减少的趋势(P<0.01)。PARP-1活性随着恢复时间的延长逐渐升高(P<0.01),但全长PARP-1表达变化不大,断裂略有减弱;BRCA1表达却逐渐减少(P<0.01)。3-ABA能抑制PARP-1活性(P<0.01),诱导PARP-1断裂,但不影响BRCA1表达。多柔比星及3-ABA都能诱导MCF-7细胞凋亡,与对照组相比较,其差异均有统计学意义(P<0.05);多柔比星和3-ABA两者联合作用时能进一步增加BRCA1野生型乳腺癌细胞MCF-7的凋亡,与多柔比星及3-ABA单独使用相比较,差异具有统计学意义(P<0.05);多柔比星和3-ABA两者联合作用时能诱导BRCA1突变型乳腺癌细胞SKBR3.0发生凋亡,与两者联合作用MCF-7细胞的影响相比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:多柔比星干预能影响DNA损伤修复蛋白PARP-1的活性及BRCA1的表达。多柔比星和PARP-1抑制剂3-ABA都能诱导MCF-7细胞凋亡,两者联合应用能增加这种凋亡诱导效应。
- 王辉李青田波陈铜兵沈传陆鲁常青
- 关键词：多柔比星BRCA1蛋白
- 癌蛋白TRE17泛素化位点的初步鉴定
- 2016年
- 目的研究癌蛋白TRE17单泛素化的位点,为深入探讨其单泛素化的机制及鉴定其泛素连接酶E3提供研究基础。方法使用截短体逐步逼近的方法构建了一系列TRE17变异体,包括HA-TRE17(375)和HA-TRE17(303);用重叠延伸PCR方法构建了TRE17的中间缺失变异体HA-TRE17(447,Δ340-361)。随后,变异体质粒被分别转染HEK 293细胞,用Western blot方法鉴定各变异体及其单泛素化条带在HEK 293细胞内的表达。结果 HA-TRE17(447)、HA-TRE17(375)有单泛素化蛋白条带,而HA-TRE17(303)无单泛素化蛋白条带;与HA-TRE17(303)变异体一样,HA-TRE17(447,Δ340-361)也无单泛素化蛋白条带。结论 TRE17单泛素化位点可能位于340-361之间或附近的氨基酸残基。
- 张永臣赵虎子赵蕾张丽娜王北万青沈传陆
- 关键词：癌蛋白泛素
- 人β-微管蛋白2C蛋白的原核表达与纯化被引量：2
- 2009年
- 目的构建体外原核表达和纯化人β-微管蛋白2C(TubB2C)蛋白。方法通过聚合酶链反应(PCR)扩增出人TubB2C基因完整开放读码框架(ORF),并插入pGEX-6P-1载体中构建pGEX-TubB2C重组质粒。经大肠杆菌BL21转化后,用异丙醇-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导谷胱甘肽S转移酶(GST)-TubB2C融合蛋白表达,用免疫印迹(W estern b lot)分析鉴定表达的GST-TubB2C蛋白,并在非变性条件下利用G lutath ione Sepharose 4B纯化GST-TubB2C蛋白。结果酶切分析和DNA测序表明TubB2C cDNA完整ORF以正确的阅读框架插入pGEX-6P-1载体;聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示表达的GST-TubB2C蛋白相对分子量约为78 000,W estern b lot结果显示该融合蛋白可被抗GST抗体特异性识别。纯化后的GST-TubB2C蛋白纯度约90%。结论TubB2C蛋白可在体外大量表达和纯化。
- 武慧娟田田王露徐宁王丛阳何泽沈传陆
- 关键词：原核表达蛋白纯化
- 血管紧张素Ⅱ对血管内皮细胞整合素β3表达的影响被引量：7
- 1999年
- 目的和方法：本实验采用细胞ＥＬＩＳＡ和ＲＴ－ＰＣＲ的方法分别从蛋白质和ｍＲＮＡ水平对血管紧张素Ⅱ（Ａｎｇ－Ⅱ）作用下的内皮细胞表面整合素β３的表达进行检测。结果：１０－８ｍｏｌ／Ｌ～１０－５ｍｏｌ／Ｌ的Ａｎｇ－Ⅱ在蛋白质水平能够促进内皮细胞整合素β３表达（Ｐ＜０．０５），且呈剂量依赖性。１０－６ｍｏｌ／Ｌ的Ａｎｇ－Ⅱ作用培养的人脐静脉内皮细胞１８ｈ后，细胞整合素β３ｍＲＮＡ量为正常对照组的１５倍。结论：提示Ａｎｇ－Ⅱ促进内皮细胞表面整合素β３的表达可能是单核细胞和内皮细胞之间粘附功能增加的机制之一。
- 王华沈传陆郭恒怡吴其夏
- 关键词：血管内皮细胞整合素
- 5’上游序列对TNFα诱导内皮细胞血小板源生长因子-B链基因转录的调控作用被引量：1
- 1999年
- 目的和方法：为探讨人血小板源生长因子（ＰＤＧＦ） － Ｂ 链基因５’上游序列在ＴＮＦα诱导内皮细胞该基因转录中的调控作用，本研究将构建的一系列含人ＰＤＧＦ－ Ｂ 链基因不同上游序列荧光素酶报告基因质粒，与内参照质粒ｐＳＶ－ β－ Ｇａｌ 共转染培养的人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣｓ） ，分别检测了不同浓度和不同持续时间ＴＮＦα作用下转染内皮细胞荧光素酶比活性，观察了５’上游序列的定向删切对ＴＮＦα诱导内皮细胞ＰＤＧＦ－ Ｂ 链基因转录的影响。结果和结论：不同浓度ＴＮＦα处理转染（ 重组报告基因质粒ｐＳＩＳ－ １７５８／ ＋ ４３Ｌｕｃ） 内皮细胞１８ｈ ，荧光素酶的表达均有增加，在ＴＮＦα为２００ Ｕ／ ｍＬ、４００ Ｕ／ｍＬ 和８００ Ｕ／ ｍＬ 时，荧光素酶活性呈浓度依赖性增加（ 分别为 Ｐ＜ ０－０５ ，Ｐ＜ ０－０５ 和 Ｐ＜ ０－０１） ；２００Ｕ／ｍ ＬＴＮＦα分别处理９ ｈ 、１８ ｈ 、３６ ｈ 和７２ ｈ 后，内皮细胞荧光素酶均有增加，自１８ ｈ 开始其荧光素酶的表达量呈时间依赖性增加（ 分别为Ｐ ＜ ０－０５ ，Ｐ＜ ０－０５ 和 Ｐ＜ ０－０１） ；在ＰＤＧＦ－ Ｂ 链基因上游序列－ １７５８／ ＋ ４３ ｂｐ ，－ ４０２／ ＋ ４３ ｂｐ 或－ １?
- 沈传陆王华王小明郭恒怡吴其夏
- 关键词：动脉粥样硬化TNFΑ基因转录
- TBC1D3表达上调降低人乳腺癌MCF-7细胞对长春新碱敏感性
- 目的研究乳腺癌细胞中TBC1D3表达上调时细胞对长春新碱(VCR)敏感性的变化,探讨TBC1D3表达是否影响VCR对乳腺癌的治疗效果。方法用RT-PCR方法扩增人TBC1D3的基因,酶切鉴定和测序确认,TBC1D3基因与...
- 何泽王丛阳王辉王露徐宁田田郭丹沈传陆
- 文献传递
- 人肌球蛋白调节性轻链的原核表达及纯化被引量：1
- 2013年
- 目的:构建pGEX-MLC2重组质粒,在大肠杆菌中表达并纯化谷胱甘肽硫转移酶(GST)-MLC2融合蛋白,以用于MLC2抗体的制备。方法:从人乳腺癌MCF-7细胞中提取总RNA,通过RT-PCR获得人MLC2cDNA全长开放读码框架(open reading frame,ORF),并将其重组于原核蛋白表达质粒pGEX-6P-1中,经限制性内切酶和DNA测序鉴定,将该重组质粒转化大肠杆菌E.coli BL21,用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达GST-MIC2融合蛋白后,进行Western blotting分析,鉴定GST-MLC2蛋白;通过GlutathioneSepharose 4B亲和层析柱纯化融合蛋白,并用SDS-PAGE电泳鉴定该融合蛋白的纯度。结果:人乳腺癌MCF-7细胞MLC2的RT-PCR产物为535 bp,符合预期;重组质粒pGEX-MLC2经BamHI和EcoRI双酶切出现特征性的525 bp片段;DNA测序证实MLC2全长ORF序列正确无误。IPTG诱导表达的GST-MLC2融合蛋白分子质量约为46.6 kDa,纯化后其蛋白纯度约95%,经Western blotting分析表明诱导表达的蛋白是GST-MLC2融合蛋白。结论:人MLC2蛋白原核表达质粒的构建、GST-MLC2融合蛋白的表达和纯化,为MLC2抗体的制备及MLC2功能的深入研究奠定了基础。
- 陈洋何泽张永臣万青赵虎子赵蕾沈传陆
- 关键词：原核表达GST融合蛋白蛋白纯化
