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肿瘤抑制基因p53的结构与功能保守性的比较分析被引量：1: 2004年; 目的　比较分析不同物种来源的p5 3蛋白的系统发育规律及其结构与功能的保守性。方法　多序列比较、结构域比对和二级结构预测等生物信息学分析及系统发生树构建。结果　模式生物间p5 3蛋白有较高同源性 ,而且都具有p5 3蛋白的典型结构特征 ;各结构域中维持功能活性必需的氨基酸残基几乎不变 ,二级结构折叠元件的组成和分布也十分类似 ;最大似然法和邻接法两种方法推导出的分子系统进化树基本一致。结论　物种来源不同的p5 3蛋白同属于一个有相似功能作用的蛋白家族。从比较生物学新的角度 ,进一步说明了p5 3蛋白的结构和功能保守性。; 涂洪斌李冰陈耀勇邹东霆陈维洁蒋义国葛曰萍陈尊器; 关键词：肿瘤抑制基因 P53 细胞周期模式生物

转染超抗原SEA肝癌细胞的构建及鉴定被引量：2: 2005年; 目的用基因重组的方法将葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因转染至肝癌细胞.方法先从产SEA标准菌株中提取并扩增SEA全长基因,将SEA基因克隆及亚克隆至真核表达载体pLXSN构建pLXSN-SEA重组质粒,再将重组质粒转染至人肝癌细胞系BEL-7402细胞,用RT-PCR和ELISA法鉴定.结果从产SEA标准菌株ATCC13565中提取并扩增出SEA基因全长片段;SEA基因克隆和亚克隆至真核表达载体pLXSN,经测序证实所得序列与GenBank中的标准序列完全一致;将pLXSN-SEA质粒转染肝癌细胞BEL-7402,经筛选获得稳定表达的抗性单克隆.RT-PCR扩增出约800bp的基因片段,经ELISA分析细胞培养上清中SEA蛋白的含量在皮克的水平.结论成功构建了重组超抗原SEA基因的克隆载体及真核表达载体,将SEA基因转染至肝癌细胞株BEL-7402细胞后癌细胞能够表达并持续分泌SEA蛋白.; 邓晓芳曾波航胡伟民彭燕涂洪斌李斌; 关键词：超抗原葡萄球菌肠毒素A 肝癌

γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶基因调控的初步研究被引量：1: 2006年; 目的研究抗氧化基因———大鼠γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)基因的功能区及其调控表达。方法克隆1.76 kb大鼠γ-GCS基因的重链亚单位———GCLC基因的上游调控序列,并构建含荧光素酶基因的报道载体GCLC-Luc(GCLC/pGL-3)。利用嵌顿缺失方法构建GCLC基因的缺失体,并将其表达载体转染大鼠肺泡上皮细胞,在细胞中分析该基因的调控区域。通过该方法初步发现GCLC基因的上游调控序列的-745^-705 bp属负性调控区域。利用EMSA和supersh ift证实大鼠肺泡上皮细胞GCLC基因负调控区域的E-box元件能与转录因子USF1/USF2特异性的结合。将USF的真核表达载体和逆转录病毒表达载体分别导入肺泡上皮细胞,观察GCLC基因的转录活性和GCLC蛋白的表达情况。结果GCLC基因的-403^-111 bp和-705^-613 bp区段属正调控区域;-745^-705 bp属负调控区域。EMS和supersh ift证实上游刺激因子(USF)能与该负调控区域的E-box元件结合抑制GCLC基因的转录和表达。结论发现GCLC基因其中2个正调控区域(-403^-111 bp与-705^-613 bp)和1个负调控区域(-745^-705 bp),其中负调控区域-745^-705 bp上的E-box元件通过与USF结合介导GCLC基因的负性表达调控。; 程璘令李冰涂洪斌刘启才冉丕鑫; 关键词：慢性阻塞性肺病 Γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶氧化应激

日本鬼鲉毒腺cDNA表达文库的构建和初步分析被引量：13: 2002年; 以海洋生物日本鬼鲉毒腺为材料 ,应用SMARTTM cDNALibraryConstruction技术 ,构建以真核表达载体pcDNA3 0为基础的日本鬼鲉毒腺cDNA表达文库 .通过对文库克隆的序列测定和初步生物信息学分析 ,获得 94个日本鬼鲉毒腺新表达序列标签 (ESTs) ,其中已确定全长cDNA的克隆有 35个 ,包括溶细胞素基因、类短链神经毒素蛋白、C型凝集素、巨噬细胞迁移抑制因子、致病相关基因等 ,这些基因在日本鬼鲉中绝大多数为首次发现 .日本鬼鲉毒腺cDNA表达文库的成功构建 ,为深入研究日本鬼鲉毒腺的组分及其分子作用机理奠定了基础 .; 姜孝玉涂洪斌陈慧萍卫剑文杨文利吴文言徐安龙; 关键词：毒腺 CDNA表达文库

一种海葵神经毒素基因Sr2及其应用: 本发明涉及一种海葵神经毒素基因Sr2及其编码的蛋白，以及该蛋白在制备治疗心血管疾病药物中的应用。本发明用RT－PCR的方法，从玫瑰红绿海葵触手总RNA中分离得到的海葵神经毒素基因Sr2，其DNA序列如序列表中<40...; 徐安龙陈慧萍王磊董美玲杨文利姜孝玉涂洪斌; 文献传递

一种海葵神经毒素基因Sr4及其应用: 本发明涉及一种海葵神经毒素基因Sr4及其编码的蛋白，以及该蛋白在制备治疗心血管疾病药物中的应用。本发明用RT-PCR的方法，从玫瑰红绿海葵触手总RNA中分离得到的海葵神经毒素基因Sr4，其DNA序列如序列表中<40...; 徐安龙陈慧萍王磊董美玲杨文利姜孝玉涂洪斌; 文献传递

SARS相关冠状病毒Spike蛋白定点诱变: 2007年; 目的分析确定SARS-CoV Spike蛋白序列中对SARS-CoV的感染能力相关性较强的位点,并进行定点诱变。方法比对不同来源株SARS-CoV的Spike蛋白的序列,计算其相应位点的突变墒值和突变几率,结合进一步的生物信息学分析,筛选出经预测可能影响Spike蛋白与其受体结合进而导致SARS病毒对宿主细胞的膜融合侵染能力的7个位点,对各个位点用重叠延伸PCR法或直接PCR法进行人工定点诱变,获7个突变片段,之后将各片段亚克隆至克隆载体PSP72中。结果经PCR和测序确认各片段点突变成功,并正确插入克隆载体PSP72中。结论成功实施Spike蛋白的定点诱变,获得7个突变片段的重组子,这些突变体可为研究这些突变位点在Spike蛋白与受体结合中的意义,进而可为阐述Spike蛋白的结构与功能的关系、揭示Spike蛋白变异与SARS病毒侵入(染)细胞能力的相关性提供坚实的实验基础。; 刘利东涂洪斌李冰; 关键词：SARS-COV SPIKE蛋白定点诱变

一种海葵神经毒素基因Sr1及其应用: 本发明涉及一种海葵神经毒素基因Sr1及其编码的蛋白，以及该蛋白在制备治疗心血管疾病药物中的应用。本发明用RT－PCR的方法，从玫瑰红绿海葵触手总RNA中分离得到的海葵神经毒素基因Sr1，其DNA序列如序列表中<40...; 徐安龙陈慧萍王磊董美玲杨文利姜孝玉涂洪斌; 文献传递

赤魟肿瘤抑制基因和海葵荧光蛋白类似物基因的研究: 以中国南海海洋生物赤魟和巨型辐花海葵为研究对象,综合应用细胞生物学、基因重组、蛋白纯化等分子生物学和生物信息学等功能基因组学研究方法少技术手段来进行,对赤魟IPL和巨型辐花海葵TFP新基因进行结构和功能的分析和研究.以期...; 涂洪斌; 文献传递

一种海葵神经毒素基因Sr7及其应用: 本发明涉及一种海葵神经毒素基因Sr7及其编码的蛋白，以及该蛋白在制备治疗心血管疾病药物中的应用。本发明用RT－PCR的方法，从玫瑰红绿海葵触手总RNA中分离得到的海葵神经毒素基因Sr7，其DNA序列如序列表中<40...; 徐安龙陈慧萍王磊董美玲杨文利姜孝玉涂洪斌; 文献传递

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涂洪斌