温俊柳
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
- 供职机构：安徽农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划安徽省高等学校优秀青年人才基金更多>>
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- 禽防御素在雏鸡抗鸡白痢沙门菌感染中的表达及其分子设计被引量：2
- 2014年
- 为了探寻有效防治雏鸡感染鸡白痢沙门菌的新型防御素生物制剂,建立雏鸡感染鸡白痢沙门菌（S.Pullorum）的模型,感染3～24 h后检测十二指肠组织禽防御素（AvBDs）抗感染的防御性表达水平,分析AvBDs的理论等电点,选择活性强且结构稳定的AvBD,对其进行分子设计,以期构建出理论生物活性更强且结构更稳定的改型防御素.结果表明,与对照组相比,雏鸡感染鸡白痢沙门菌3～24 h后十二指肠AvBD-6的表达水平明显上升,差异显著（P＜0.05）,结合理论等电点分析,选择AvBD-6做设计出发肽,用天冬氨酸替换AvBD-6原有的中性氨基酸,并在C端增加抗菌肽BF2衍生物的α螺旋,成功构建了改型防御素AvBD6-BF2,其理论生物活性与结构稳定性均强于AvBD6出发肽.本研究将为AvBDs生物制剂用于防治鸡白痢沙门菌病的可行性提供参考.
- 涂健王斌祁克宗温俊柳周秀红汪雪雁刘红梅
- 关键词：雏鸡分子设计
- 头孢氨苄的紫外分光光度法测定被引量：1
- 2011年
- 本研究应用紫外分光光度计法测定了头孢氨苄注射液中头孢氨苄的含量,以建立一种准确、简单的测定方法,用于头孢氨苄注射液的含量测定。头孢氨苄在紫外光区有最大吸收值,且最大吸收波长为261nm。以261nm为测定波长做标准曲线,得到回归方程为:y=0.0224x,R2=0.9996。此法快捷简便,适用于兽药及动物性食品中药物残留分析。
- 王学立程亮亮温俊柳汪雪雁薛秀恒祁克宗
- 关键词：紫外分光光度计
- 鸡AvBD6抗沙门氏菌的表达筛选与抗菌特性
- 鸡白痢沙门氏菌(Salmonella pullorum,S.pullorum)是危害养鸡业最严重的肠道病菌之一。研究β-防御素(Avianβ-defensins,AvBDs)的鸡肠道表达调控并筛选抗鸡白痢沙门氏菌感染的的...
- 温俊柳
- 关键词：抗菌特性Β-防御素
- 文献传递
- 毕赤酵母组成型表达载体的构建及报告蛋白表达评价被引量：2
- 2013年
- 目的构建毕赤酵母(Pichia pastoris)组成型分泌表达载体,并表达报告蛋白葡萄球菌核酸酶(staphylococcus nuclease,SNase,NucA),以评价其表达外源蛋白的能力。方法从巴斯德毕赤酵母GS115基因组中PCR扩增毕赤酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase promoter,pGAP)片段,克隆至载体pPIC9K中,构建组成型分泌表达载体pGHKα;从金黄色葡萄球菌基因组中PCR扩增编码报告蛋白金黄色葡萄球菌NucA成熟肽的序列nucA,克隆至载体pGHKα中,构建重组表达质粒pGHKα-nucA,经SacⅠ和BglⅡ依次酶切线性化后,电转化至毕赤酵母GS115中;PCR及TB-D平板法筛选阳性重组酵母菌;Tricine-SDS-PAGE检测表达产物;琼脂扩散法检测重组酵母菌表达上清液的核酸酶活性。结果组成型分泌表达载体pGHKα经PCR鉴定,证明构建正确;重组表达质粒pGHKα-nucA经PCR及测序鉴定,证明nucA基因片段正确插入载体pGHKα中;重组酵母菌GS115/pGHKα-nucA经PCR及TB-D平板法检测证明构建成功;表达的目的蛋白相对分子质量约为17 000,表达量约占上清总蛋白的42%,且具有显著的核酸酶活性。结论成功构建了毕赤酵母组成型分泌表达载体pGHKα,其能正确表达报告蛋白NucA,且表达的蛋白能分泌到细胞外,表达效率高,为异源蛋白在毕赤酵母中的安全高效表达奠定了基础。
- 张永正温俊柳王燕魏海婷涂健祁克宗
- 关键词：毕赤酵母组成型表达葡萄球菌核酸酶
