许桂凤
- 作品数：6 被引量：15H指数：3
- 供职机构：第二军医大学基础部更多>>
- 发文基金：上海市公共卫生重点学科建设项目上海市科委纳米专项基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 化妆品安全性评价中小鼠局部淋巴结试验方法的改进被引量：8
- 2009年
- 目的改进小鼠局部淋巴结实验(LLNA),建立既可检测化学物致敏性也可同时检测刺激性的LLNA替代方法。方法选取一种阴性物质:4-氨苯甲酸;三种致敏阳性物:2,4-二硝基氯苯(DNCB)、己基肉桂醛(HCA)和2-氨基酚(2-APC);以及两种刺激阳性物:氢氧化钾(KOH)、十二烷基硫酸钠(SLS)。按常规LLNA方法对雌性Balb/c小鼠进行染毒,测量小鼠耳缘厚度并称量耳廓重量,于第6天获取耳引流淋巴结进行称重,制备单细胞悬液计数并用CCK-8试剂盒检测淋巴细胞增殖活性。结果受试剂量氢氧化钾、十二烷基硫酸钠和2,4-二硝基氯苯在0.5%以上剂量,可引起耳缘厚度和耳廓重量增加,与对照组相比差异有显著性(P<0.05),可判定为对皮肤有刺激性,2-氨基酚和己基肉桂醛均无刺激性。三种致敏物在致敏试验中均呈阳性,但三指标的敏感性略有不同。己基肉桂醛,2,4-二硝基氯苯,2-氨基酚均可引起淋巴结重量增加和淋巴细胞计数增加(P<0.05);中剂量以上组己基肉桂醛和2,4-二硝基氯苯和高剂量2-氨基酚的CCK-8检测均见淋巴细胞增殖明显。结论以耳缘厚度和耳廓重量作为刺激性观察指标,以淋巴结重量和淋巴细胞增殖作为致敏性观察指标的改良小鼠淋巴结实验可有效地同时评价化学物的皮肤致敏性和刺激性。
- 刘珍刘俊平王飞许桂凤侯娟万旭英张天宝
- 关键词：致敏性刺激性化妆品
- 荧光标记对纳米聚苯乙烯细胞毒性和细胞内变化过程的影响
- 2010年
- 目的探讨荧光标记纳米材料代替未标记纳米材料用于细胞动力学研究的可行性。方法在一定浓度范围(500、250、125、63、32和16μg/ml)和一定时间范围(48、24、16、8、4和1h)内,利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测荧光标记与未标记纳米聚苯乙烯对人支气管上皮细胞系BEAS-2B和人单核细胞系THP-1存活率的影响;激光共聚焦显微镜和透射电镜分别观察不同时间内荧光标记与未标记纳米聚苯乙烯在细胞内的分布。结果荧光标记与未标记纳米聚苯乙烯对BEAS-2B和THP-1两种细胞存活率的变化趋势相同,均随着剂量增加细胞存活率降低;而且在相同的剂量组内,荧光标记与未标记纳米聚苯乙烯的细胞存活率差异无显著性(P>0.05);两种纳米材料的细胞存活率剂量-效应曲线趋势和时间-效应曲线趋势也一致;两种纳米材料均可在接触BEAS-2B和THP-1细胞1h后进入细胞,在4h时已经进入细胞核内,在细胞内分布广泛。结论荧光标记对纳米聚苯乙烯细胞毒性和细胞内动力学过程无明显影响,可以代替同尺寸未标记纳米聚苯乙烯用于细胞动力学研究。
- 王飞刘珍许桂凤侯娟张天宝
- 关键词：荧光标记细胞毒性细胞分布细胞动力学
- 纳米级二氧化钛对体外大鼠腔前卵泡生长发育成熟的影响被引量：1
- 2009年
- 目的:采用大鼠腔前卵泡体外培养方法研究纳米级二氧化钛(TiO2)对大鼠卵泡发育及卵母细胞成熟的影响,揭示纳米TiO2有无雌性生殖毒性,为其安全性评价提供依据。方法:机械性分离大鼠腔前卵泡,单个卵泡在96孔板中连续培养。将卵泡随机分为5组:3个25nmTiO2(12.5、25和50μg/ml)组、阴性对照组、微米级TiO2对照组。培养第10天诱导排卵,观察卵泡发育和卵母细胞成熟情况。结果:随着纳米级TiO2剂量增加,卵泡存活率、有腔形成率及卵丘-卵母细胞复合体(COCs)排出率呈下降趋势(P<0.05);与阴性对照组相比,微米级TiO2组对卵泡发育与卵母细胞成熟无明显影响;25μg/ml以上剂量纳米级TiO2组卵泡形态学明显异常,卵泡存活率及有腔形成率明显下降;50μg/ml纳米级TiO2可使处于成熟阶段的卵母细胞数减少。结论:25μg/ml剂量以上25nmTiO2可以抑制体外大鼠腔前卵泡的生长发育与卵母细胞成熟,而微米级TiO2在相同剂量下对卵泡的生长发育和卵母细胞的成熟无明显影响。提示纳米级TiO2有不同于微米级TiO2的毒作用性质,可能有雌性生殖毒性,应引起关注。
- 侯娟万旭英王飞许桂凤刘珍张天宝
- 关键词：卵泡卵母细胞纳米级二氧化钛毒性试验
- 重组人皮肤模型评价化妆品皮肤腐蚀性/刺激性替代方法的建立被引量：3
- 2009年
- 目的通过构建重组人EpiDerm皮肤模型,建立检测化妆品的皮肤腐蚀性/刺激性的替代试验方法;方法取人的包皮组织,分离表皮和真皮后分别进行原代培养,用鼠尾胶原构建皮肤模型,经气液面培养后,腐蚀性试验作用3min和1h,刺激性试验作用15min后续培养42h,检测化学物致皮肤模型细胞活性的改变四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT试验)和白介素-1α(IL-1α)的释放量(ELISA法),评价化学物的腐蚀性/刺激性。结果腐蚀性试验中,MTT检测作用于3种腐蚀性化学物(正辛酸、10%KOH、丙烯酸)后,细胞相对活性均<50%(3min)和<15%(1h);而2种非腐蚀性化学物(四氯乙烯、丁香酚)使细胞相对活性变化不大。刺激性试验中,MTT检测4种刺激性化学物细胞相对活性,其中3种化学物(三氯乙烷、5%KOH、10%SLS)致细胞活性明显小于50%,2种非刺激性化学物(乙醇、丙二醇)和1%TritonX-100作用后细胞活性>50%,在ELISA实验中,仅TritonX-100致IL-1α释放量大于60pg/ml,说明其同样具有刺激性。结论所建重组人皮肤模型试验方法基本成功,可以作为检测化学物皮肤腐蚀性和刺激性的体外替代方法。
- 刘珍刘俊平许桂凤王飞侯娟万旭英张天宝
- 关键词：组织工程皮肤腐蚀性刺激性IL-1Α化妆品
- 大鼠体外多器官细胞共培养模型的建立被引量：3
- 2010年
- 目的 建立大鼠体外多器官细胞共培养方法.方法 采用胶原酶消化法、支气管灌洗分离法、两步消化法等方法分离大鼠原代肝细胞、肾细胞、心肌细胞、肺泡巨噬细胞和真皮成纤维细胞,用锥虫蓝染色法检测细胞分离成活率,用单层贴壁法分别培养;采用飞片法,将5种细胞的飞片放入同一培养皿,用体积分数为10%的FBS DMEM培养基培养7 d,用噻唑蓝（MTT）比色法比较原代细胞在单独培养和共培养时的生长情况.结果 建立的大鼠原代肝细胞、肾细胞、心肌细胞、肺泡巨噬细胞、真皮成纤维细胞分离方法稳定,细胞分离成活率均达90%,其中胶原酶消化法培养肝细胞的存活率达90.3%,两步消化法培养肾细胞的细胞存活率达91.9%,心肌细胞的胶原酶消化法细胞存活率达93.0%.3～15 d的心肌细胞搏动频率比较,差异无统计学意义（P〉0.05）,差速贴壁法培养的肺泡巨噬细胞存活率可达90.8%,以胶原酶消化法培养的原代真皮细胞存活率达92.7%,细胞生长状态良好.5种原代细胞的多器官细胞共培养结果显示,共培养时细胞生长增殖情况良好,单独培养与共培养细胞生长曲线基本重合.结论 所建立的大鼠多器官细胞共培养方法是成功的.
- 许桂凤朱江波郑怡文朱玉平马玺里刘珍侯娟王飞张天宝
- 关键词：细胞培养毒理学体外研究
- 大鼠体外多器官细胞共培养模型的建立及在纳米物质毒性研究中的应用
- 本文探讨建立大鼠体外多器官细胞共培养方法作为毒性靶器官筛选或研究模型的可能性;将所建模型初步应用于在纳米物质的毒性研究。
方法：1．采用胶原酶消化法、支气管灌洗分离法、两步消化法等方法分离大鼠原代肝细胞、肾细胞...
- 许桂凤
- 关键词：靶器官细胞培养
- 文献传递
