侯娟
- 作品数：11 被引量：32H指数：3
- 供职机构：第二军医大学基础部更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市公共卫生重点学科建设项目上海市科委纳米专项基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 化妆品安全性评价中小鼠局部淋巴结试验方法的改进被引量：8
- 2009年
- 目的改进小鼠局部淋巴结实验(LLNA),建立既可检测化学物致敏性也可同时检测刺激性的LLNA替代方法。方法选取一种阴性物质:4-氨苯甲酸;三种致敏阳性物:2,4-二硝基氯苯(DNCB)、己基肉桂醛(HCA)和2-氨基酚(2-APC);以及两种刺激阳性物:氢氧化钾(KOH)、十二烷基硫酸钠(SLS)。按常规LLNA方法对雌性Balb/c小鼠进行染毒,测量小鼠耳缘厚度并称量耳廓重量,于第6天获取耳引流淋巴结进行称重,制备单细胞悬液计数并用CCK-8试剂盒检测淋巴细胞增殖活性。结果受试剂量氢氧化钾、十二烷基硫酸钠和2,4-二硝基氯苯在0.5%以上剂量,可引起耳缘厚度和耳廓重量增加,与对照组相比差异有显著性(P<0.05),可判定为对皮肤有刺激性,2-氨基酚和己基肉桂醛均无刺激性。三种致敏物在致敏试验中均呈阳性,但三指标的敏感性略有不同。己基肉桂醛,2,4-二硝基氯苯,2-氨基酚均可引起淋巴结重量增加和淋巴细胞计数增加(P<0.05);中剂量以上组己基肉桂醛和2,4-二硝基氯苯和高剂量2-氨基酚的CCK-8检测均见淋巴细胞增殖明显。结论以耳缘厚度和耳廓重量作为刺激性观察指标,以淋巴结重量和淋巴细胞增殖作为致敏性观察指标的改良小鼠淋巴结实验可有效地同时评价化学物的皮肤致敏性和刺激性。
- 刘珍刘俊平王飞许桂凤侯娟万旭英张天宝
- 关键词：致敏性刺激性化妆品
- 一种评价单个细胞内细胞色素P450酶活力的新方法
- 细胞色素 P450酶超家族担负着许多外源化合物和内源性化合物的代谢。了解参与临床所用药物代谢的个体细胞色素 P450酶的作用对于理解药物-药物之间的相互作用和药物的毒性/药效是非常重要的。目前多数方法需要高效液相色谱分离
- 侯娟张天宝
- 关键词：单个细胞细胞色素P450酶安全性评价
- 文献传递
- 重组人皮肤模型评价化妆品皮肤腐蚀性/刺激性替代方法的建立被引量：3
- 2009年
- 目的通过构建重组人EpiDerm皮肤模型,建立检测化妆品的皮肤腐蚀性/刺激性的替代试验方法;方法取人的包皮组织,分离表皮和真皮后分别进行原代培养,用鼠尾胶原构建皮肤模型,经气液面培养后,腐蚀性试验作用3min和1h,刺激性试验作用15min后续培养42h,检测化学物致皮肤模型细胞活性的改变四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT试验)和白介素-1α(IL-1α)的释放量(ELISA法),评价化学物的腐蚀性/刺激性。结果腐蚀性试验中,MTT检测作用于3种腐蚀性化学物(正辛酸、10%KOH、丙烯酸)后,细胞相对活性均<50%(3min)和<15%(1h);而2种非腐蚀性化学物(四氯乙烯、丁香酚)使细胞相对活性变化不大。刺激性试验中,MTT检测4种刺激性化学物细胞相对活性,其中3种化学物(三氯乙烷、5%KOH、10%SLS)致细胞活性明显小于50%,2种非刺激性化学物(乙醇、丙二醇)和1%TritonX-100作用后细胞活性>50%,在ELISA实验中,仅TritonX-100致IL-1α释放量大于60pg/ml,说明其同样具有刺激性。结论所建重组人皮肤模型试验方法基本成功,可以作为检测化学物皮肤腐蚀性和刺激性的体外替代方法。
- 刘珍刘俊平许桂凤王飞侯娟万旭英张天宝
- 关键词：组织工程皮肤腐蚀性刺激性IL-1Α化妆品
- 荧光标记对纳米聚苯乙烯细胞毒性和细胞内变化过程的影响
- 2010年
- 目的探讨荧光标记纳米材料代替未标记纳米材料用于细胞动力学研究的可行性。方法在一定浓度范围(500、250、125、63、32和16μg/ml)和一定时间范围(48、24、16、8、4和1h)内,利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测荧光标记与未标记纳米聚苯乙烯对人支气管上皮细胞系BEAS-2B和人单核细胞系THP-1存活率的影响;激光共聚焦显微镜和透射电镜分别观察不同时间内荧光标记与未标记纳米聚苯乙烯在细胞内的分布。结果荧光标记与未标记纳米聚苯乙烯对BEAS-2B和THP-1两种细胞存活率的变化趋势相同,均随着剂量增加细胞存活率降低;而且在相同的剂量组内,荧光标记与未标记纳米聚苯乙烯的细胞存活率差异无显著性(P>0.05);两种纳米材料的细胞存活率剂量-效应曲线趋势和时间-效应曲线趋势也一致;两种纳米材料均可在接触BEAS-2B和THP-1细胞1h后进入细胞,在4h时已经进入细胞核内,在细胞内分布广泛。结论荧光标记对纳米聚苯乙烯细胞毒性和细胞内动力学过程无明显影响,可以代替同尺寸未标记纳米聚苯乙烯用于细胞动力学研究。
- 王飞刘珍许桂凤侯娟张天宝
- 关键词：荧光标记细胞毒性细胞分布细胞动力学
- 纳米级二氧化钛对体外大鼠腔前卵泡生长发育成熟的影响被引量：1
- 2009年
- 目的:采用大鼠腔前卵泡体外培养方法研究纳米级二氧化钛(TiO2)对大鼠卵泡发育及卵母细胞成熟的影响,揭示纳米TiO2有无雌性生殖毒性,为其安全性评价提供依据。方法:机械性分离大鼠腔前卵泡,单个卵泡在96孔板中连续培养。将卵泡随机分为5组:3个25nmTiO2(12.5、25和50μg/ml)组、阴性对照组、微米级TiO2对照组。培养第10天诱导排卵,观察卵泡发育和卵母细胞成熟情况。结果:随着纳米级TiO2剂量增加,卵泡存活率、有腔形成率及卵丘-卵母细胞复合体(COCs)排出率呈下降趋势(P<0.05);与阴性对照组相比,微米级TiO2组对卵泡发育与卵母细胞成熟无明显影响;25μg/ml以上剂量纳米级TiO2组卵泡形态学明显异常,卵泡存活率及有腔形成率明显下降;50μg/ml纳米级TiO2可使处于成熟阶段的卵母细胞数减少。结论:25μg/ml剂量以上25nmTiO2可以抑制体外大鼠腔前卵泡的生长发育与卵母细胞成熟,而微米级TiO2在相同剂量下对卵泡的生长发育和卵母细胞的成熟无明显影响。提示纳米级TiO2有不同于微米级TiO2的毒作用性质,可能有雌性生殖毒性,应引起关注。
- 侯娟万旭英王飞许桂凤刘珍张天宝
- 关键词：卵泡卵母细胞纳米级二氧化钛毒性试验
- 一种评价单个细胞内细胞色素P450酶活力的新方法被引量：1
- 2007年
- 侯娟张天宝
- 关键词：单个细胞细胞色素P450酶安全性评价
- 邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯及其代谢产物MEHP对体外大鼠卵泡发育的影响被引量：10
- 2010年
- 目的利用大鼠腔前卵泡体外培养方法研究邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)及其代谢产物邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯(MEHP)对卵泡体外发育的影响。方法机械性分离大鼠腔前卵泡,单个卵泡在96孔板中连续培养。MEHP设2.5、5、10、20、40和80μg/ml6个浓度,DEHP设33.7、67.5、125、250、500、1000nmol/L6个浓度,同时设二甲基亚砜(DMSO)溶剂对照和阴性对照。每组16～20个卵泡,3次重复。隔天换1/2液,在培养第10天诱导排卵,观察卵泡体外发育情况。结果DEHP对第11天卵泡存活率、有腔形成率、异常卵泡形成率和卵丘-卵母细胞复合体(COCs)排出率无明显的影响,与溶剂对照组差异无显著性(P>0.05)。第2天暴露>10μg/ml以上剂量的MEHP48h后,第11天卵泡存活率明显下降(54.76%±3.37%),与对照组(91.57%±1.32%)比较差异有显著性(P<0.05),剂量与卵泡存活率之间存在一定相关性(R2=0.92);COCs排出(24.99%±3.95%)明显减少,与对照组(52.78%±8.45%)比较差异有显著性(P<0.05);异常卵泡出现率(45.24%±3.37%)明显升高,与对照组比较差异有显著性(P<0.05);暴露>20μg/mlMEHP有腔形成率(46.18%±1.67%)减少,与对照组(85.91%±5.03%)比较差异有显著性(P<0.05),且有明显剂量-反应关系。结论MEHP可以抑制体外大鼠腔前卵泡的生长发育。
- 万旭英朱玉平马玺里朱江波郑怡文侯娟王飞刘珍张天宝
- 关键词：邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯卵泡发育环境毒理
- 小鼠腔前卵泡体外培养方法的建立被引量：4
- 2009年
- 目的建立可供毒理学研究的小鼠腔前卵泡体外培养方法。方法采用机械方法分离出生后12～14天(C57B1/6JxCBA/Ca)小鼠卵巢内直径为100～130μm的腔前卵泡,96孔板单个卵泡连续培养12天后诱导排卵16h,观察卵泡发育、激素分泌和卵子形成,并将体外卵母细胞的成熟情况(IVG)与体内卵母细胞的生长情况(IVM)进行比较,以判断体外培养方法是否成功。结果分离完整卵泡率为89.74%(376/419);培养12天卵泡存活率为96.81%(364/376),有腔形成率为48.94%(184/376);卵泡和卵母细胞直径显著增加。诱导排卵后卵丘细胞-卵母细胞复合体排出率为56.38%(212/376);培养卵泡经历从腔前卵泡到卵母细胞成熟和极体排出的形态学变化,也有部分卵泡不发生腔样结构改变。体外培养卵泡分泌E2和P激素与体内分泌特征一致。IVG组4.61%(10/217)卵母细胞不能恢复成熟[停止在生发泡期(GV期)],76.50%(166/217)停止减数分裂在生发泡破裂期(GVBD期),18.89%(41/217)卵母细胞停止在第2次减数分裂(MII期)(PB);而IVM组1.24%(3/241)的卵母细胞不能恢复成熟(停止在GV期),45.23%(109/241)停止减数分裂在GVBD,53.53%(41/241)卵母细胞停止在MII期(PB);卵母细胞染色体核型完整,无染色体数目和结构异常。结论本研究建立的小鼠腔前卵泡体外培养方法基本成功,可作为卵泡发育生理研究和毒理学研究的模型。
- 万旭英朱玉平马玺里朱江波侯娟刘真王飞张天宝
- 关键词：腔前卵泡体外培养小鼠
- 大鼠体外多器官细胞共培养模型的建立被引量：3
- 2010年
- 目的 建立大鼠体外多器官细胞共培养方法.方法 采用胶原酶消化法、支气管灌洗分离法、两步消化法等方法分离大鼠原代肝细胞、肾细胞、心肌细胞、肺泡巨噬细胞和真皮成纤维细胞,用锥虫蓝染色法检测细胞分离成活率,用单层贴壁法分别培养;采用飞片法,将5种细胞的飞片放入同一培养皿,用体积分数为10%的FBS DMEM培养基培养7 d,用噻唑蓝（MTT）比色法比较原代细胞在单独培养和共培养时的生长情况.结果 建立的大鼠原代肝细胞、肾细胞、心肌细胞、肺泡巨噬细胞、真皮成纤维细胞分离方法稳定,细胞分离成活率均达90%,其中胶原酶消化法培养肝细胞的存活率达90.3%,两步消化法培养肾细胞的细胞存活率达91.9%,心肌细胞的胶原酶消化法细胞存活率达93.0%.3～15 d的心肌细胞搏动频率比较,差异无统计学意义（P〉0.05）,差速贴壁法培养的肺泡巨噬细胞存活率可达90.8%,以胶原酶消化法培养的原代真皮细胞存活率达92.7%,细胞生长状态良好.5种原代细胞的多器官细胞共培养结果显示,共培养时细胞生长增殖情况良好,单独培养与共培养细胞生长曲线基本重合.结论 所建立的大鼠多器官细胞共培养方法是成功的.
- 许桂凤朱江波郑怡文朱玉平马玺里刘珍侯娟王飞张天宝
- 关键词：细胞培养毒理学体外研究
- 纳米级二氧化钛对雌性体外生殖毒性的研究
- 本研究采用大鼠腔前卵泡体外培养方法，研究纳米级TiO2对卵泡生长发育及卵母细胞成熟的影响。在此基础上研究纳米级TiO2对卵泡颗粒细胞增殖的作用及其是否可以引起卵母细胞染色体产生畸变。目的是进一步研究纳米级TiO2有无雌性...
- 侯娟
- 关键词：纳米级二氧化钛生殖毒性腔前卵泡颗粒细胞染色体畸变
- 文献传递
