刘娅梅
- 作品数：10 被引量：19H指数：2
- 供职机构：中国药科大学更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生化学工程更多>>
- 亚甲基四氢叶酸还原酶的纯化及催化性质研究被引量：2
- 2011年
- 对亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)的体外酶促反应性质进行研究。通过盐析、DEAE-Sepharose fast flow柱层析纯化猪肝中的MTHFR,采用荧光法分析测定该酶纯化结果和酶促动力学性质。结果表明,MTHFR的纯化倍数可达20倍以上;测得最适酶促反应条件为pH 6.8,37℃;NADPH浓度1.2 mmol/L;以5,10-亚甲基四氢叶酸为底物测得米氏常数km=70.3μmol/L。研究发现,别构抑制剂S-腺苷甲硫氨酸(AdoMet)可使MTHFR的体外活性降到原活性的60%以下。本文初步探讨了MTHFR的催化性质,对MTHFR催化活性的主要影响因素进行研究,为酶促法合成5-甲基四氢叶酸的进一步研究奠定了基础。
- 于丽许激扬卞筱泓刘琳刘娅梅
- 关键词：亚甲基四氢叶酸还原酶酶促反应荧光
- 产L-5-甲基四氢叶酸工程菌自动诱导培养基的优化
- 2012年
- 考察了自动诱导培养基代替异丙基-β-D-巯基半乳糖苷(IPTG)培养基诱导四氢叶酸还原酶在重组大肠杆菌BL21(DE3)中表达的可行性,对自动诱导培养基自诱导时的乳糖浓度和葡萄糖添加量进行优化,并与IPTG诱导培养基进行比较,确定了自动诱导培养基配方:葡萄糖1.8 mmol/L、乳糖3 mmol/L、胰蛋白胨10 g/L、酵母膏5g/L、NaCl 10 g/L。HPLC结果显示,自诱导与IPTG诱导条件下的L-5-甲基四氢叶酸产量接近。
- 刘娅梅卞筱泓许激扬赵刚刚
- 关键词：基因工程菌
- 亚甲基四氢叶酸还原酶的纯化及催化性质研究
- 对亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)的体外酶促反应性质进行研究.通过沉淀法,DEAE-Sepharose fast flow柱层析纯化猪肝中的MTH...
- 于丽许激扬刘琳卞筱泓刘娅梅
- 关键词：合成工艺亚甲基四氢叶酸还原酶分离纯化
- 文献传递
- 高产L-5-甲基四氢叶酸基因工程菌的构建与表达被引量：1
- 2011年
- L-5-甲基四氢叶酸是叶酸最具生物活性的形式,也是唯一可以穿透血脑屏障的叶酸类药物,有极大的应用价值。为提高菌体内L-5-甲基四氢叶酸的含量,将5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因metF插入载体质粒,并将重组质粒pET-22b-metF转化至E.coliBL21(DE3),乳糖诱导蛋白表达。成功构建的重组菌经诱导后,L-5-甲基四氢叶酸量比原始菌株中提高28%,达到66μg/g菌体。本研究成功的为生物合成L-5-甲基四氢叶酸寻找到一种新的途径。
- 刘琳许激扬卞筱泓于丽刘娅梅
- 关键词：5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶克隆
- 天麻素对离体大鼠胸主动脉环的舒张作用及其机制被引量：15
- 2012年
- 目的:研究天麻素对离体大鼠胸主动脉环的舒张作用并探讨其可能的机制。方法:记录去甲肾上腺素(NE)和KCl预收缩的离体大鼠主动脉环张力变化,观察天麻素的舒血管作用及不同工具药对其作用的影响。结果:天麻素对去甲肾上腺素(NE,1×10-6mol.L-1)和KCl(6×10-2mol.L-1)引起的去内皮和内皮完整胸主动脉环的收缩均有舒张作用,二者没有显著差别;L-硝基精氨酸甲酯(L-NAME,1×10-4mol.L-1)、亚甲蓝(MB,1×10-5mol.L-1)、吲哚美辛(INDO,1×10-5mol.L-1)并不能抑制天麻素对胸主动脉环的舒张作用;钾离子通道阻断剂4-氨基吡啶(4-AP,1×10-4mol.L-1)、四乙基胺(TEA,1×10-3 mol.L-1)、格列苯脲(glibenclamide,1×10-5mol.L-1)、BaCl2(1×10-4mol.L-1)均能抑制天麻素对血管环的舒张作用;在无钙环境下,预孵育天麻素对去甲肾上腺素收缩有明显抑制作用。结论:天麻素有浓度依赖性的血管舒张作用,此作用不依赖血管内皮,与钾离子通道及抑制血管平滑肌细胞内质网储存钙的释放和外钙内流有关系。
- 张映桥余涛许激扬卞筱泓许建良刘娅梅
- 关键词：天麻素胸主动脉血管舒张钾通道阻滞剂
- 一种提高L-5-甲基四氢叶酸累积量的生物合成方法
- 本发明提供了一种提高L-5-甲基四氢叶酸累积量的生物合成方法和一种L-5-甲基四氢叶酸合成酶系共表达重组质粒及其构建方法和应用。本发明提供的L-5-甲基四氢叶酸合成酶系共表达重组质粒包括二氢叶酸还原酶(DHFR)基因fo...
- 卞筱泓许激扬邵飞刘娅梅
- 吡柔比星的分离与纯化
- 2012年
- 目的确定用硅胶柱层析纯化吡柔比星粗品的工艺条件。方法采用薄层层析-硅胶柱层析法考察不同展开剂的层析效果,最优洗脱剂为二氯甲烷-甲醇;以吡柔比星的回收率和平均含量为评价指标,考察了流速、进样量与层析柱再生条件对层析粗分和精分的影响。结果硅胶柱层析粗分吡柔比星的最佳工艺条件:以梯度洗脱方式洗脱,洗脱剂流速5.0mL.min-1,上样量16.6mg.mL-1柱体积,0.5g.L-1氢氧化钠溶液离线再生硅胶。吡柔比星质量分数经粗分后由原来的35.7%提高到90%左右,回收率为96.2%。硅胶柱层析精分吡柔比星的最佳工艺条件为洗脱剂二氯甲烷-甲醇比例为90∶10,流速3.5mL.min-1,上样量16.6mg.mL-1柱体积,甲醇再生3倍柱体积。吡柔比星质量分数经精分后由粗分的90%提高到99.6%左右,回收率为97.5%。结论硅胶柱层析纯化吡柔比星所得产品符合质量要求。
- 许建良许激扬卞筱泓张映桥刘娅梅李兰娥
- 关键词：吡柔比星硅胶柱层析纯化
- 基因工程法生产L-5-甲基四氢叶酸的研究被引量：4
- 2012年
- 目的在E.coli BL21(DE3)中表达5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR),并检测MTHFR的表达情况及L-5-甲基四氢叶酸的增加量。方法采用PCR法获得MTHFR基因(metF)全长DNA,分别在其5'端和3'端加上BamHⅠ和SacⅠ酶切位点。经BamHⅠ和SacⅠ双酶切后,连接到经同样双酶切的表达载体pET-28a(+)中,经限制性酶切、菌落PCR和测序验证正确后,转化至E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE检测MTHFR表达量,HPLC检测L-5-甲基四氢叶酸量。结果经酶切与测序鉴定证实原核重组载体pET28a-MTHFR构建成功,表达产物相对分子质量约为33 000,与MTHFR大小相符,工程菌的L-5-甲基四氢叶酸的产量显著增加。结论通过将MTHFR的基因导入L-5-甲基四氢叶酸产生菌能够提高L-5-甲基四氢叶酸产量。
- 刘娅梅卞筱泓许激扬李兰娥张映桥许建良
- 关键词：原核表达双酶切
- 一种提高L-5-甲基四氢叶酸累积量的生物合成方法
- 本发明提供了一种提高L-5-甲基四氢叶酸累积量的生物合成方法和一种L-5-甲基四氢叶酸合成酶系共表达重组质粒及其构建方法和应用。本发明提供的L-5-甲基四氢叶酸合成酶系共表达重组质粒包括二氢叶酸还原酶(DHFR)基因fo...
- 卞筱泓许激扬邵飞刘娅梅
- 文献传递
- 菌体中L-5-甲基四氢叶酸的HPLC法检测被引量：2
- 2012年
- 目的:建立高效液相色谱法测定菌体中L-5-甲基四氢叶酸(L-5-MTHF)的方法。方法:加热法破碎细胞,强碱性阴离子交换树脂纯化,高效液相色谱柱为C18反向柱,流动相为K2HPO4(0.02 mol.L-1,pH7.2)-甲醇(84∶16)溶液,流速为1.0 mL.min-1,柱温为40℃,检测波长为290 nm。结果:L-5-MTHF在0.5～50μg.mL-1范围内线性良好,r=0.999 5,RSD为1.11%。结论:色谱法灵敏、准确、重现性好,可用于菌体中L-5-甲基四氢叶酸的定性与定量。
- 卞筱泓刘娅梅许激扬陈宗梦
- 关键词：高效液相色谱菌体
