刘嫒 作品数:25 被引量:77 H指数:6 供职机构: 贵州大学 更多>> 发文基金: 贵州省科学技术基金 贵州省科技计划项目 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 更多>>
山羊IL-2基因SYBR GREEN Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量:3 2016年 为建立山羊IL-2基因SYBR GREEN I实时荧光定量RT-PCR检测方法,根据GenBank中山羊见-2基因(登录号:KT934548),设计1对特异性引物,用于扩增目的基因,并将目的基因克隆于pMD-19-T载体,转化至大肠杆菌DH50L,经质粒PCR及序列测定鉴定后获得阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR GREEN I RTFQ-PCR标准曲线和溶解曲线,进行特异性、重复性和敏感性试验。并应用所建立的方法,检测ConA刺激健康山羊PBMC后0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h、24h和48h不同时间点IL-2基因转录的动态变化。结果表明,当质粒标准品稀释度在7.2×10^9-7.2×10^5copies/μL扩增曲线的Ct值与浓度间具有良好的线性关系,相关系数为一0.996;熔解曲线为特异性单峰,组内变异系数为0.306%~1.458%,组间变异系数为0.514%~1.191%,最低检测限为7.2×10^2copies/μL。山羊IL-2基因的mRNA转录量在0~2h呈现上升趋势,在2h达到峰值,2-6h呈现下降趋势。6~12h未能检测到IL-2基因的mRNA转录;12~48h检测到IL-2基因的mRNA转录量呈逐渐上升趋势。研究结果将为山羊IL-2基因的定量分析提供技术平台。 李婷 丁尊俄 鲜思美 黄佑洪 刘嫒 冯将 李鹏飞关键词:山羊 实时荧光定量RT-PCR SYBR 羊IL-2基因和羊口疮病毒B2L基因真核表达重组质粒联合免疫小鼠的效果评价 被引量:8 2017年 为评价羊白介素2(IL-2)基因和羊口疮病毒(OrfV)B2L基因真核表达重组质粒联合接种小鼠的免疫效果,本研究将pVAX1-B2L、pVAX1-B2L+pVAX1-IL-2及空载体pVAX1和PBS对照组通过肌肉注射的方式免疫KM小鼠,并采用ELISA方法和MTT方法检测免疫小鼠的体液和细胞免疫反应。结果表明,pVAX1-B2L+pVAX1-IL-2联合免疫组小鼠血清抗体效价和IL-2水平均显著高于pVAX1-B2L免疫组,与pVAX1和PBS对照组相比差异极显著(p<0.01)。而且pVAX1-B2L+pVAX1-IL-2免疫组的脾淋巴细胞增殖水平高于pVAX1-B2L免疫组、空载体pVAX1组和PBS对照组(p<0.01)。因此,pVAX1-B2L+pVAX1-IL-2联合免疫KM小鼠可以诱导特异性体液免疫和细胞免疫,并且IL-2具有免疫佐剂的作用,为进一步将其用于Orf的防制奠定了基础。 鲜思美 李鹏飞 冯将 刘嫒 李婷 包细明 张益 张素辉关键词:B2L基因 基因疫苗 联合免疫 IL-2基因佐剂对羊口疮病毒核酸疫苗免疫效果的影响研究 羊口疮病毒(Orf virus,OrfV)属于痘病毒科、副痘病毒属成员,为有囊膜线性双股DNA病毒,是引起绵羊、山羊发生以口唇、舌、鼻、乳房等部位皮肤、黏膜形成丘疹、脓疱、溃疡以及结成疣状厚痂为主要特征的接触性、嗜上皮性... 刘嫒关键词:羊口疮病毒 细胞免疫 核酸疫苗 免疫效果 文献传递 羊口疮病毒F1L和B2L基因真核表达质粒构建及其在MDBK细胞中的表达 被引量:16 2015年 目的为构建羊口疮病毒F1L和B2L基因真核表达质粒,同时验证其在MDBK细胞中的表达。方法本试验以pVAX1为真核表达载体,在前期构建的克隆质粒pMD18-T-B2L和pMD18-T-F1L基础上,构建真核表达质粒pVAX1-F1L和pVAX1-B2L,对其分别进行双酶切和测序鉴定,将鉴定正确的真核表达质粒pVAX1-F1L和pVAX1-B2L转染至MDBK细胞,采用RT-PCR和间接免疫荧光试验(IFA)检测目的基因表达。结果双酶切鉴定和序列测定表明真核表达质粒pVAX1-F1L和pVAX1-B2L构建成功,RT-PCR和IFA同时验证目的基因在MDBK细胞浆中能瞬时表达。结论本试验构建成功的真核表达质粒为下一步羊口疮病毒核酸疫苗研究奠定基础。 刘嫒 冯将 鲜思美 刘宗胜 李鹏飞 罗代兵关键词:羊口疮病毒 B2L基因 真核表达 一种养殖用半自动喂鸭设备 本发明公开了一种养殖用半自动喂鸭设备,涉及畜牧养殖辅助工具技术领域。包括底座;鸭身固定机构,所述鸭身固定机构包括固定架、防护门和固定槽,鸭嘴张开机构,所述鸭嘴张开机构包括扩张架、辅助环和填料管,灭菌机构,所述灭菌机构包括... 杨胜林 刘嫒 姚炳浓 廖富友 朱金金羊口疮疫苗及其制备方法和应用 本发明属于免疫疫苗技术领域,具体涉及一种羊口疮疫苗及其制备方法和应用。本发明的羊口疮疫苗的有效成分为由真核表达质粒pVAX1‑FIL,pVAX1‑B2L和pVAX1‑IL‑2组成的免疫原性组合物。所述羊口疮疫苗含有可以表... 鲜思美 李鹏飞 冯将 刘嫒 李婷 张益 包细明 张素辉 许国洋文献传递 提高羊口疮疫苗免疫原性的佐剂及其制备方法和应用 本发明属于免疫疫苗技术领域,具体涉及一种提高羊口疮疫苗免疫原性的佐剂及其制备方法和应用,所述佐剂包括真核表达质粒pVAX1‑IL‑2;所述佐剂可以表达细胞因子IL‑2,能提高羊口疮疫苗免疫原性;通过构建其真核表达质粒作为... 鲜思美 李鹏飞 冯将 刘嫒 李婷 张益 包细明 张素辉 许国洋文献传递 日粮添加马鞭草粉和虎杖粉对三穗雏鸭生长性能和血液生化指标的影响 被引量:1 2023年 文章旨在研究日粮添加马鞭草和虎杖草粉对三穗雏鸭生长性能和血液生理生化指标的影响,本试验将150只1日龄三穗鸭随机分为4个试验组(T1、T2、T3、T4)和对照组(CON),每组3个重复,每个重复10只鸭,对照组仅饲喂基础日粮,T1、T2组分别在基础日粮中添加2%和4%的马鞭草粉,T3、T4组分别在基础日粮中添加2%和4%的虎杖草粉,预饲期7d,正试期35d。结果表明,日粮中添加马鞭草粉和虎杖草粉对三穗雏鸭增重无显著影响(P>0.05),但可显著提高饲料转化率(P<0.01);添加马鞭草和虎杖粉组均不影响血清ALB和血清Ca水平,T1组血清Glu和血清TP水平显著提高(P<0.05),添加马鞭草和虎杖可增加血清UA和UREA水平,虎杖粉组IgA和IgG水平显著增加(P<0.01),添加T2和T4组血清IgM水平显著增加(P<0.05)。综上所述,日粮添加马鞭草和虎杖粉对三穗雏鸭1-5周龄增重无显著影响,但可提高饲料转化率,提升血清Glu、TP、IgA、IgG、IgM水平。 杨娇一 祝永才 姚炳浓 刘嫒 祝保国 朱金金 文际颖 杨胜林关键词:血液生化指标 羊口疮病毒三种分子生物学检测方法的比较研究 引言羊口疮(Orf)又称羊传染性脓疱,是由羊口疮病毒(Orf Virus,OrfV)引起危害山羊和绵羊的一种急性、高度接触性人兽共患传染病[1,2]。目前,诊断OrfV的方法中,核酸扩增技术仍为首选[3]。B2L基因是O... 杨钰 鲜思美 刘嫒 吴健 刘宗胜羊口疮病毒F1L和B2L基因真核表达质粒构建及其在MDBK细胞中的表达 为构建羊口疮病毒F1L和B2L基因真核表达质粒,同时验证其在MDBK细胞中的表达,本试验以pVAX1为真核表达载体,在前期构建的克隆质粒pMD18-T-B2L和pMD18-T-F1L基础上,构建真核表达质粒pVAX1-F... 刘嫒 冯将 鲜思美 刘宗胜 李鹏飞 罗代兵关键词:羊口疮病毒 B2L基因 真核表达 文献传递