冯将 作品数:28 被引量:86 H指数:6 供职机构: 贵州大学动物科学学院 更多>> 发文基金: 贵州省科学技术基金 国家自然科学基金 贵州省科技计划项目 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 更多>>
山羊IFN-γ和TNF-α基因SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量:6 2017年 根据GenBank中山羊γ-干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的基因序列,设计特异引物扩增目的基因。将IFN-γ、TNF-α基因克隆至p MD-19-T载体,得到各自阳性克隆质粒,以2种阳性质粒为标准品建立标准曲线并进行熔解曲线分析以及灵敏性、特异性和重复性试验。应用所建立的方法检测刀豆蛋白A(Con A)刺激健康山羊外周血单核细胞(PBMC)后不同时间点IFN-γ、TNF-α基因转录量。结果表明,当质粒标准品稀释度为1×10~9copies/L^1×10~5copies/L时,扩增曲线的Ct值与浓度间具有良好的线性关系,相关系数分别为0.999和1.000;熔解曲线分析表明,产物为特异性单峰且重复性较好。IFN-γ在第2小时和第48小时这两个时间点出现mRNA转录高峰,在第2小时检测到IFN-γ转录量为1.26×10~5copies/L,第48小时检测到转录量为8.56×10~4copies/L;TNF-α在0~24 h呈现下调的表达趋势,第48小时出现mRNA转录高峰,转录量为2.73×10~5copies/L;研究结果将为IFN-γ、TNF-α的定量分析提供技术平台。 李婷 张益 张益 鲜思美 冯将 冯将关键词:山羊 实时荧光定量RT-PCR SYBR 一起南江黄羊地方性鼻内肿瘤的病理学观察 被引量:3 2017年 为了对羊地方性鼻内肿瘤的诊断和防治提供理论依据,对贵州省一起南江黄羊地方性鼻内肿瘤病例进行了临床症状与病理学观察。结果表明:患病南江黄羊临床上以面部肿胀、张嘴呼吸、鼻腔流出浆液性分泌物、呼吸困难与有鼻塞音等呼吸道症状和进行性消瘦为特征;肿瘤起源于筛骨黏膜,呈单侧生长、菜花状、粉红色,质脆,无包膜,表面覆盖大量黏液,完全占据单侧鼻腔;组织学上,鼻内肿瘤主要表现为腺管状生长,腺管管腔内充盈大量红染均质渗出物,有腺管共壁现象,瘤细胞偶见病理性核分裂象等;未发现肿瘤向其他组织与器官转移。 鲜思美 李鹏飞 李鹏飞 冯将 冯将 包细明 张益 张益关键词:南江黄羊 流行病学 临床症状 病理学 羊口疮疫苗及其制备方法和应用 本发明属于免疫疫苗技术领域,具体涉及一种羊口疮疫苗及其制备方法和应用。本发明的羊口疮疫苗的有效成分为由真核表达质粒pVAX1‑FIL,pVAX1‑B2L和pVAX1‑IL‑2组成的免疫原性组合物。所述羊口疮疫苗含有可以表... 鲜思美 李鹏飞 冯将 刘嫒 李婷 张益 包细明 张素辉 许国洋文献传递 提高羊口疮疫苗免疫原性的佐剂及其制备方法和应用 本发明属于免疫疫苗技术领域,具体涉及一种提高羊口疮疫苗免疫原性的佐剂及其制备方法和应用,所述佐剂包括真核表达质粒pVAX1‑IL‑2;所述佐剂可以表达细胞因子IL‑2,能提高羊口疮疫苗免疫原性;通过构建其真核表达质粒作为... 鲜思美 李鹏飞 冯将 刘嫒 李婷 张益 包细明 张素辉 许国洋文献传递 猪源大肠杆菌分离鉴定及金英汤对其体外抑菌试验 被引量:3 2016年 为了评价金英汤对临床分离的1株猪源大肠杆菌的体外抑菌作用,对分离菌进行形态学、生理生化、16S r DNA鉴定及致病性观察,并采用试管法和平板法测定金英汤的体外抑菌试验。结果:分离获得1株致病性大肠杆菌,金英汤对其最小抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)分别为31.25 mg/m L和62.5 mg/m L。结果提示,该猪场有致病性大肠杆菌的存在,应该对该场进行彻底消毒,金英汤对大肠杆菌分离株具有抑制作用,可为临床预防和治疗仔猪腹泻大肠杆菌病提供理论依据。 冯将 王玉坤 魏玉好 易琼 王鲁关键词:大肠杆菌 抑菌作用 金英黄归汤对LPS介导乳腺上皮细胞TLR4信号通路中相关因子的影响 被引量:7 2016年 为了评价金英黄归汤抗LPS致炎的作用机制,作者采用ELISA法检测金英黄归汤对细胞分泌细胞因子TNF-α、IL-8的影响,采用qPCR法研究药物对TLR4通路中IL-1受体相关激酶-1(IRAK-1)、肿瘤坏死因子受体6(TRAF-6)、转化生长因子激活激酶(TAK-1)、NF-κB诱导激酶(NIK)、抑制性NF-κB(IκB)mRNA的转录影响。结果显示,金英黄归汤低剂量组(39.1μg·mL-1)、中剂量组(391μg·mL-1)、高剂量组(3 910μg·mL-1)能显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)减少LPS介导的TNF-α和IL-8分泌;能显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)减少LPS介导的IRAK-1、TRAF-6、TAK-1、IκB、NIK mRNA的转录。结果提示,金英黄归汤通过抑制小鼠MECs的TLR4/NF-κB信号通路中IRAK-1/TRAF-6/TAK-1/NIK途径的活化来控制炎性因子的释放而发挥抗炎作用,而不是通过IRAK-1/TRAF-6/TAK-1/IκB途径实现的,这可能是金英黄归汤的抗炎机制。 李欣 李中改 张小艺 周送桂 王玉坤 冯将 易琼 王鲁关键词:LPS 乳腺上皮细胞 MRNA转录 贵州一起南江黄羊地方性鼻内肿瘤的病理学观察 引言羊地方性鼻内肿瘤(Enzootic nasal tumor,ENT)又称传染性鼻内肿瘤、传染性鼻内腺癌或者传染性乳头状瘤,是由绵羊肿瘤病毒(Enzootic nasal tumor virus of sheep,EN... 包细明 李鹏飞 冯将 张益 李婷 鲜思美羊口疮病毒F1L和B2L基因真核表达质粒构建及其在MDBK细胞中的表达 被引量:16 2015年 目的为构建羊口疮病毒F1L和B2L基因真核表达质粒,同时验证其在MDBK细胞中的表达。方法本试验以pVAX1为真核表达载体,在前期构建的克隆质粒pMD18-T-B2L和pMD18-T-F1L基础上,构建真核表达质粒pVAX1-F1L和pVAX1-B2L,对其分别进行双酶切和测序鉴定,将鉴定正确的真核表达质粒pVAX1-F1L和pVAX1-B2L转染至MDBK细胞,采用RT-PCR和间接免疫荧光试验(IFA)检测目的基因表达。结果双酶切鉴定和序列测定表明真核表达质粒pVAX1-F1L和pVAX1-B2L构建成功,RT-PCR和IFA同时验证目的基因在MDBK细胞浆中能瞬时表达。结论本试验构建成功的真核表达质粒为下一步羊口疮病毒核酸疫苗研究奠定基础。 刘嫒 冯将 鲜思美 刘宗胜 李鹏飞 罗代兵关键词:羊口疮病毒 B2L基因 真核表达 siRNA干扰TGF-β1基因对LPS诱导小鼠乳腺上皮细胞IL-6和TNF-α分泌的影响 被引量:2 2017年 为研究转化生长因子β1(TGF-β1)对脂多糖(LPS)刺激小鼠乳腺上皮细胞(MECs)分泌炎症因子的影响,本实验利用si RNA转染技术干扰MECs TGF-β1基因,采用荧光定量RT-PCR方法筛选最佳转染条件,并检测其干扰后LPS介导其下游信号smad3 m RNA的表达量,采用ELISA法检测其下游信号smad3蛋白含量和LPS介导细胞分泌前炎症细胞因子TNF-α和IL-6的含量。结果显示,选用50 n M浓度的TGF-β1-mus-1212片段转染组能够极显著抑制TGF-β1的m RNA表达(p<0.01);TGF-β1被干扰后,LPS刺激其下游smad3 m RNA的表达量与对照组相比呈显著性降低(p<0.05),smad3蛋白含量与对照组相比均极显著性降低(p<0.01);细胞分泌TNF-α的量与对照组相比显著降低(p<0.05),分泌IL-6的量各组无变化(p>0.05)。本实验结果表明干扰TGF-β1能降低LPS诱导乳腺上皮细胞TNF-α的分泌量,因此TGF-β1可作为靶基因深入研究乳腺上皮细胞的免疫功能,本研究为乳腺炎症、肿瘤等乳腺相关疾病的治疗提供新的思路及实验数据,为新药的开发和应用提供理论依据。 冯将 张小艺 李昀桦 王玉坤 魏玉好 易琼 王鲁关键词:TGF-Β1 乳腺上皮细胞 IL-6 TNF-Α 中药复方及拆方的抗炎、镇痛、抑菌活性评价 被引量:2 2017年 为了研究中药复方及其拆方的抗炎、镇痛、抑菌活性,本研究采用二甲苯致小鼠耳肿胀模型及冰醋酸致小鼠毛细血管渗透方法观察其对炎症的影响;采用醋酸致小鼠扭体试验及热板法观察其对疼痛的影响;采用二倍稀释法检测其对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。抗炎结果表明中药复方及拆方对二甲苯致炎小鼠的耳肿胀度和小鼠腹腔毛细血管通透性降低差异不显著(P>0.05);镇痛结果显示中药复方组、拆方都能极显著的减少小鼠扭体次数(P<0.01),但对热刺激引发的小鼠痛反应时间无明显的延长(P>0.05)作用;抑菌实验表明中药复方在0.63 mg/mL浓度以上时对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌表现出很好的抑菌效果,对沙门氏菌呈中度敏感,其MIC为9.375 mg/mL,但拆方抑菌效果不明显。研究表明中药复方及其拆方组合具有一定的镇痛及抗菌活性。 冯将 魏玉好 余波 余波 周思璇 周思璇关键词:中药复方 拆方 抗炎 镇痛 抑菌