刘彦仿
- 作品数：335 被引量：870H指数：14
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 肝癌单抗-MTX结合物的制备及其体内外细胞毒作用
- 1992年
- 近年来,肝癌导向研究十分活跃。多种免疫结合物不断被研制出来。大多数经动物试验显示出较好的特异性杀伤作用,部分已进入临床治疗试验。本文将抗人肝癌单克隆抗体HAb18与MTX相交联,并检测其在肿瘤组织中的分布及其对肝癌细胞的体内外杀伤作用,以期提供一种新的肝癌免疫导向药物。
- 郭卫平黎松刘彦仿王福安陈志南王锁才张学庸
- 关键词：MTX细胞毒
- 肝癌内高表达新基因的部分cDNA克隆
- 1997年
- 目的寻找人肝癌相关的基因。方法应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交技术，对表达序列标记（ＥｘｐｒｅｓｓｅｄＳｅ－ｑｕｅｎｃｅｔａｇｓ，ＥＳＴ）基因克隆进行筛选，以得到的基因片段为探针，筛选人胎肝ｃＤＮＡ文库。结果得到一个在肝癌内高表达的ＥＳＴ基因片段。进一步筛选人胎肝ｃＤＮＡ文库，得到一命名为ＦＬ６的ｃＤ－ＮＡ克隆，核苷酸序列测定表明，ＦＬ６长度为１４６４个碱基，检索最新版本ＧｅｎｅＤａｔａｂａｓｅｓ（ＥＭＢＬ９６．６），未发现同源基因。实验结果还显示该基因在胎儿各组织内有不同的表达特性。结论该基因可能与细胞的增殖、癌变过程相关。
- 李宝安万大方刘彦仿顾健人
- 关键词：肝肿瘤基因表达CDNA克隆克隆
- 牛蛙核糖核酸酶在大肠杆菌中的高效表达及其初步纯化
- 2004年
- 目的:利用大肠杆菌系统表达重组RC蛳RNase融合蛋白,并对其表达产物进行初步纯化。方法:以PCR方法扩增出RC蛳RNase基因,插入到融合蛋白原核表达载体PET32a中,构建重组表达载体PET蛳RC蛳RNase,转化大肠杆菌E.coliBL21(DE3)plyS,利用异丙基硫代蛳β蛳D蛳半乳糖苷(IPTG)诱导表达。工程菌经超声碎菌,离心后,采用Ni亲合层析法在变性条件下进行初步纯化。结果:经IPTG诱导后,SDS蛳PAGE和免疫印迹分析显示,工程菌在相对分子质量为3.1×104处出现一条新生蛋白带,目的蛋白占菌体总蛋白的34%,主要以包涵体形式存在。所得包涵体经纯化,纯度可达90%以上。结论:重组融合蛋白RC蛳RNase在大肠杆菌中获得成功表达,纯化效果令人满意,为进一步研究其生物学特性和功能奠定了良好的基础。
- 付勇刘彦仿杨守京赵君李锴男
- 关键词：核糖核酸酶融合蛋白纯化
- 人硒蛋白PcDNA探针的制备及其在肝脏组织中的表达被引量：7
- 2003年
- 目的 :探讨SeP基因与肝脏疾病特别是肝癌发生发展的关系 .方法 :采用美国Georgia大学惠赠的质粒PBluescript HumanSelenoproteinP,用PCR法制备人SePcDNA探针 ,检测了 13例正常肝脏、2 0例肝硬化、30例肝癌组织中SePmR NA的表达水平 .结果 :PCR产物经电泳鉴定与预期相符 .3种肝脏组织的组织间质均有SePmRNA表达 ,主要位于脉管区的血管内皮 ;正常肝细胞、肝硬化肝细胞及肝癌细胞中SePmRNA阳性率分别为 84 .6 % ,5 0 .0 % ,2 0 .0 % .肝癌细胞阳性表达率明显低于其他两组 (χ2 =15 .84 ,P <0 .0 0 5 ;χ2 =4 .96 ,P <0 .0 5 ) .正常肝细胞和肝硬化肝细胞的胞质及胞核内均出现蓝色的阳性颗粒 ,在胞核主要分布在核仁与核周 ;正常肝细胞的核阳性强于肝硬化肝细胞 .HCC细胞阳性表达颗粒位于胞质 ,胞核几无表达 .结论 :人SePcDNA探针制备成功 ,可用于人体组织SePmRNA的原位检测 .肝癌细胞中存在SePmRNA的表达缺失 。
- 南克俊隋晨光韩王月刘彦仿胡沛臻秦海霞景钊刘陕西
- 关键词：CDNA探针PCR原位杂交
- 霍奇金病RS/H细胞凋亡及其与PCNA表达的关系被引量：5
- 1999年
- 目的：研究霍奇金病（ＨＤ）ＲＳ／Ｈ细胞的自发凋亡与组织学分型及ＰＣＮＡ表达的关系。方法：对４６例ＨＤ行ＴＵＮＥＬ原位凋亡检测，并做ＰＣＮＡ免疫组化；以８例淋巴结滤泡型反应性增生病为对照。结果：淋巴细胞为主型和结节硬化型ＨＤ的ＲＳ／Ｈ细胞凋亡发生率明显高于混合细胞型和淋巴细胞消减型者（Ｐ＜０００５），ＰＣＮＡ阳性率前者仅略高于后者；全部ＨＤ病例ＲＳ／Ｈ细胞凋亡发生率与ＰＣＮＡ阳性率呈正相关（Ｐ＜００５）。结论：分化好的ＨＤ其ＲＳ／Ｈ细胞较分化差者易于凋亡，这可解释前者ＲＳ／Ｈ细胞通常数目较少且病人预后较好；各型ＲＳ／Ｈ细胞的ＰＣＮＡ高表达而核分裂象不多可能是ＲＳ／Ｈ细胞发生巨细胞化的原因。
- 郝淼旺黄致治梁英锐吴贤英彭心昭刘彦仿
- 关键词：何杰金氏病细胞凋亡PCNA
- 绿色荧光蛋白基因转染角质形成细胞的瞬时表达检测
- 1999年
- 廖文俊叶苓刘彦仿刘玉峰
- 关键词：皮肤角质形成细胞
- 人源化抗肝癌单链抗体与牛蛙核糖核酸酶融合基因的构建及表达被引量：3
- 2003年
- 利用RT-PCR的方法从牛蛙肝脏中克隆牛蛙核糖核酸酶(RC-RNase)基因并进行序列测定;将人源化抗肝癌单链抗体scFv基因与RC-RNase基因相连接,制备scFv-RC-RNase融合基因表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导进行表达。以SDS-PAGE和免疫印迹法对表达产物进行分析鉴定。序列分析表明,扩增出的RC-RNase基因片断大小约为405bp。经SDS-PAGE和免疫印迹分析显示,scFv-RC-RNase融合基因表达质粒在大肠杆菌中的诱导表达产物出现相对分子质量约为38000的一条新生蛋白带,与预期结果相符。融合蛋白表达量占菌体总蛋白量的18.5%,主要以包涵体形式存在。表明成功地构建了抗肝癌scFv-RC-RNase融合基因,并在大肠杆菌中获得有效表达,为进一步进行肝癌的导向治疗研究奠定了基础。
- 付勇刘彦仿苏勤赵君张静梅
- 关键词：肝细胞癌单链免疫毒素大肠杆菌基因表达
- 细胞中流行性出血热(EHF)病毒抗原部分弥散及其原位检测被引量：2
- 1991年
- 用流行性出血热病人尸检及活检材料。以不同固定液、不同免疫细胞化学方法等对细胞中的EHFV抗原进行了检测。用目前我国自产的六种单克隆抗体(McAbs)单用或混用,只能定位出固定及时,近期保存标本中的抗原。在长期保存的尸检标本上及延期固定的活检标本上,光镜及电镜下均可见抗原有明确的弥散现象。用多克隆抗体(PcAb)配合高级敏感的免疫细胞化学方法可显示保存近三十年的陈旧尸检蜡块切片中残存的部分抗原。不同的固定剂、固定时间、免疫细胞化学方法、清除内源酶的时间及病期都对定位EHFV抗原有一定影响。
- 刘彦仿杨守京晏培松王春杰
- 关键词：流行性出血热病毒抗原弥散
- 肝细胞角蛋白的表达被引量：2
- 2001年
- 主要由细胞角蛋白构成的中间丝系统对维持肝脏细胞的结构与功能完整具有重要作用。在胚胎肝发生过程中细胞角蛋白表型可以发生转化 ,然而在乙型肝炎及肝硬变、肝损伤等肝脏疾病 ,尤其是肝脏肿瘤中 ,肝细胞细胞角蛋白表达也出现很大的异质性 ,表明肝脏细胞中所含的细胞角蛋白并不是固定不变的 ,在一定条件下 ,可以相互转化。因此细胞角蛋白作为细胞标志物 ,其表达的异常改变在肝脏疾病诊断中具有重要的应用价值。
- 付勇刘彦仿苏勤
- 关键词：角蛋白细胞生物学标记肝细胞肝疾病肝肿瘤
- 肝癌靶向性T细胞活化融合基因scFv-CD_(3ζ)的构建与表达
- 2004年
- 目的 :构建抗肝癌单链抗体融合CD3 ζ真核表达载体。 方法 :应用PCR法将二硫键稳定的人源化的单链抗体scFv的基因克隆入真核细胞表达载体pcDNA3 ,在 5′端及 3′端分别引入相应酶切位点 ;用RT PCR法从正常外周血人T细胞扩增出CD3 ζ的胞内区、跨膜区基因 ,然后将其克隆于scFv的下游 ,并在5′端及 3′端引入相应的酶切位点。以脂质体转染法将pcDNA3 scFv CD3 ζ转入T细胞 ,采用免疫细胞化学的方法 ,利用抗CD3 ζ的单克隆抗体检测转染前后T细胞中CD3 ζ的表达。 结果 :二硫键稳定的人源化抗肝癌的单链抗体scFv的cDNA片段为 73 5bp ,与已知的序列相符 ;CD3 ζ的胞内区、跨膜区的cDNA片段为 2 94bp ,与GeneBank公布的序列一致。重组的表达载体经酶切琼脂糖电泳及测序加以证实。转染前后T细胞中CD3 ζ染色强度显著增强。 结论 :完成了二硫键稳定的人源化抗肝癌的单链抗体scFv及CD3 ζ的胞内区、跨膜区融合基因真核表达载体pcDNA3 scFv CD3 ζ的构建 。
- 李锴男刘彦仿孙妍琳付勇赵君高娟杨守京
- 关键词：T淋巴细胞
