周淑艳
- 作品数：9 被引量：10H指数：2
- 供职机构：暨南大学第二临床医学院更多>>
- 发文基金：深圳市卫生局科技项目广东省自然科学基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重叠延伸PCR法扩增EB病毒BZLF1N-BLRF2融合基因及生物信息学分析
- 2012年
- 利用重叠延伸PCR技术扩增EB病毒BZLF1N-BLRF2融合基因,构建原核表达载体pGEX-4T-1-BZLF1N-BLRF2,并进行了蛋白的诱导表达。通过序列测定和ORF软件分析,该融合基因含有1个1 005 bp的ORF,编码335个氨基酸。应用生物信息学方法,对该融合基因编码的蛋白ZtaN-p23从氨基酸组成、理化性质、信号肽、疏水性/亲水性、二级结构、亚细胞定位、功能域和高级结构等方面进行了预测和分析。结果表明,该蛋白的预测分子量为46.2 kD,理论等电点约为8.97,是亲水性蛋白,推测它定位于细胞质中。序列分析表明,该蛋白可能具有信号转导、转录调控、免疫应答等功能。预测的二级结构及三级结构都表明该蛋白含有较多的不规则卷曲和α-螺旋,三级结构上呈对称形状。
- 张毅周淑艳陈锐孙业红李体远
- 关键词：PCREB病毒生物信息学
- 损伤胰腺组织提取液促进骨髓间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞的研究
- 目的:间充质于细胞(MSCs)在体外采用各种小分子化合物和细胞因子可成功诱导分化为胰岛素分泌细胞(IPCs),但存在转分化效率低和成熟度差的问题.损伤胰腺组织可分泌大量可溶性蛋白,本研究旨在探讨胰腺提取液是否具有促进MS...
- 谢洪斌王云帅齐晖周淑艳邓春艳李富荣
- 关键词：骨髓间充质干细胞分化胰岛素分泌细胞
- EB病毒融合蛋白ZtaN-p23在大肠杆菌中的表达、纯化及活性鉴定被引量：5
- 2012年
- 目的:克隆EB病毒立即早期蛋白ZtaN和衣壳蛋白p23,构建原核表达载体,并在大肠杆菌中表达融合蛋白,为后续利用蛋白进行疾病诊断奠定基础。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从B95-8细胞中分别扩增出目的基因BZLF1N和BLRF2,利用融合PCR法将两个基因进行连接,构建重组质粒pGEX-4T-1-BZLF1N-BLRF2,并转化大肠杆菌BL21(DE3)。加入IPTG诱导表达融合蛋白ZtaN-p23,通过SDS-PAGE和Western blot确定蛋白表达量及活性鉴定。结果:重组质粒pGEX-4T-1-BZLF1N-BLRF2经双酶切鉴定和序列分析正确,证实已成功构建原核表达载体;SDS-PAGE显示诱导的蛋白Mr约46 000,与预期值一致;对融合蛋白表达条件进行优化后,发现其主要以包涵体的形式存在于细胞中;亲和层析结果显示纯化后的ZtaN-p23纯度>95%;Westernblot显示ZtaN-p23具有良好的生物活性。结论:成功构建原核表达载体pGEX-4T-1-BZLF1N-BLRF2,并在大肠杆菌中进行了表达纯化,融合蛋白显示出良好的活性。
- 张毅周淑艳孙业红涂惠英涂惠英陈锐秦晓林
- 关键词：EB病毒纯化
- 敲低赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)促进人诱导性多能干细胞分化为产胰岛素细胞
- 2018年
- 目的探索一种人诱导性多能干细胞(hiPSC)体外高效分化为产胰岛素细胞(IPC)的诱导方案。方法 RNAi技术敲低hiPSC赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)基因后,利用四步法诱导其体外分化为IPC。流式细胞术分析IPC分化效率,实时定量PCR检测细胞LSD1、POU5同源盒转录因子1(OCT4)、Y染色体性别决定区因子17(SOX17)、叉头盒蛋白A2 (FOXA2)、胰腺和十二指肠同源盒蛋白1 (PDX1)、配对盒转录因子4(PAX4)、PAX6、肝细胞核因子6 (HNF6)、肝细胞核因子1同源盒蛋白A(TCF1)、NK6同源盒蛋白1(NKX6. 1)、葡萄糖转运子2(GLUT2)、葡萄糖激酶(GK)、胰岛素及MAF b ZIP转录因子A(MAFA)的mRNA水平,免疫荧光技术检测细胞PDX1、胰岛素的表达和定位;双硫腙(DTZ)染色和透射电镜分别观察细胞内胰岛素的分泌和分泌颗粒分布情况; ELISA检测诱导后细胞胰岛素和C肽分泌量。结果 LSD1敲低组的IPC分化效率较对照组有明显提高,胰岛β细胞发育相关基因SOX17、PDX1、PAX4、胰岛素的mRNA表达显著上调。LSD1敲低组的IPC共表达成熟β细胞特异性蛋白PDX1和胰岛素。另外,这些IPC能感应葡萄糖刺激并以胰岛素分泌小泡形式释放胰岛素,胰岛素或C肽释放量约为天然胰岛细胞的1/6(而对照组仅为1/8)。结论敲低LSD1基因可以促进hiPSC体外高效分化为IPC。
- 周淑艳周淑艳李富荣李阳张翠孙瑶
- 胰岛新生相关蛋白肽在促进脐带间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞中的作用被引量：3
- 2013年
- 目的探索人脐带间充质干细胞(hUCMSC)向胰岛素分泌细胞(IPCs)分化的高效、定向诱导方案。方法在传统诱导方案基础上,加入胰岛新生相关蛋白肽,诱导hUCMSCs分化为IPCs,并通过形态学观察、流式细胞术、荧光定量PCR、免疫荧光、ELISA鉴定IPCs。结果改良组IPCs的C肽阳性细胞率较传统组有明显提高(P<0.05),胰腺发育相关转录因子PDX-1、Ngn3、NeuroD1、MafA、insulin、Glut-2 mRNA表达明显提高(P<0.05)。同时,改良组蛋白C肽、PDX-1、Nkx6.1表达阳性,葡萄糖刺激试验证实胰岛素及C肽分泌能力也明显增强(P<0.05)。结论胰岛新生相关蛋白肽可促进hUCMSCs分化为IPCs,但仍未达到正常人胰岛β细胞功能。
- 陈桃陈桃王云帅周淑艳谷乐辉周淑艳叶剑简优强
- 关键词：脐带间充质干细胞胰岛素分泌细胞分化
- 损伤胰腺组织提取液促进骨髓间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞的研究
- 目的:间充质干细胞(MSCs)在体外采用各种小分子化合物和细胞因子可成功诱导分化为胰岛素分泌细胞(IPCs),但存在转分化效率低和成熟度差的问题。损伤胰腺组织可分泌大量可溶性蛋白,本研究旨在探讨胰腺提取液是否具有促进MS...
- 谢洪斌王云帅齐晖周淑艳邓春艳李富荣
- 关键词：骨髓间充质干细胞分化胰岛素分泌细胞
- 文献传递
- LSD1调控hiPSCs高效定向分化为IPCs的作用及机制研究
- 目的：人诱导性多能干细胞(hiPSCs)是产生胰岛素分泌细胞(IPCs)的理想种子细胞，目前hiPSCs诱导分化为IPCs效率低、成熟度差，无法满足临床应用的需求。赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)在调控干细胞分化中发...
- 周淑艳闫红杰李阳齐晖邓春艳李富荣
- 关键词：胰岛素分泌细胞
- 抑制LSD1对hiPSCs向定型内胚层分化的调控作用
- 2018年
- 目的:探讨抑制组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)对人诱导性多能干细胞(hiPSCs)向定型内胚层(DE)分化的调控作用。方法:利用LSD1抑制剂或shRNA抑制LSD1表达,观察hiPSCs形态变化并检测LSD1活性水平,CCK-8方法检测细胞增殖活性,qPCR检测hiPSCs多能性基因及各胚层标志基因的表达,IP-WB方法检测LSD1调控靶基因的复合体模式,Ch IP-qPCR方法检测DE标志基因启动子区域组蛋白H3第4位赖氨酸二甲基化和三甲基化(H3K4me2/me3)及第9位赖氨酸乙酰化(H3K9ac)水平。结果:(1)抑制LSD1可显著下调hiPSCs多能性基因OCT4、Y染色体性别决定区域盒2(SOX2)及Nanog同源盒(NANOG)的表达水平(P <0. 05);显著上调外胚层标志基因β3-微管蛋白(TUBB3),DE标志基因Y染色体性别决定区域盒17(SOX17)和叉头盒A2(FOXA2),以及中胚层标志基因骨形态发生蛋白2(BMP2)的表达水平(P <0. 05);(2)当LSD1活性为正常水平的53. 4%时利于DE分化;(3) LSD1在hiPSCs核内与组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)及阻遏物元件1沉默转录因子辅阻遏物(CoREST)以复合体的形式调控靶基因;(4)抑制LSD1后,SOX17和FOXA2基因启动子区域LSD1与HDAC1结合水平均显著下降,同时H3K4me2/me3和H3K9ac富集水平显著提高(P <0. 01)。结论:LSD1通过调控DE分化关键基因启动子区域H3K4me和H3K9ac水平来影响hiPSCs向DE的分化能力。
- 周淑艳周淑艳李富荣闫红杰李阳杨晓菲
- 关键词：RNA干扰分化
- 保护胰岛β细胞的体外研究进展被引量：2
- 2012年
- 糖尿病是一种由胰岛素分泌缺陷和(或)胰岛素作用缺陷引起的高血糖症性代谢疾病。自Edmonton临床试验取得成功后,胰岛移植成为一种新型治愈糖尿病的方法。但胰岛β细胞在体外分离过程中极易发生凋亡或死亡,且长期的体外培养或冷冻储存也容易令其胰岛素分泌功能逐渐丧失。因此,有效维持或改善β细胞的成活率及功能对胰岛移植的成功至关重要。对胰岛β细胞的体外保护方法进行阐述,并对其研究前景进行展望。
- 周淑艳张毅齐晖李富荣
- 关键词：胰岛Β细胞胰岛移植凋亡糖尿病
