宋瑞华
- 作品数：16 被引量：22H指数：3
- 供职机构：第三军医大学大坪医院野战外科研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划长江学者奖励计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 脂多糖致小鼠急性肺损伤组织病理变化与角质细胞生长因子受体表达的关系被引量：1
- 2004年
- 目的 :观察急性肺损伤 (ALI)时小鼠肺组织损伤程度与角质细胞生长因子受体 (KGFR)表达水平的关系 ,为基因治疗急性肺损伤提供依据。方法 :建立脂多糖 (LPS)造成的小鼠肺损伤模型和Ⅱ型肺泡上皮细胞 (A5 49细胞 )损伤模型 ,通过病理分析、反转录聚合酶链反应 (RT PCR)和荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)观察肺组织损伤程度与KGFR表达水平的关系。结果 :LPS造成轻度、中度和重度肺损伤时肺组织KGFR表达水平逐步下降 ,各种损伤程度之间KGFR表达存在显著差异 (P <0 .0 5 )。A5 49细胞的KGFR表达变化不明显 (P >0 .0 5 )。结论 :随着肺损伤程度的加重 ,肺组织KGFR表达水平逐次减低 。
- 刘斌剑王建民陈林宋瑞华赵玲宋维威
- 关键词：脂多糖小鼠急性肺损伤角质细胞受体表达
- KGFR腺病毒表达载体在LPS所致肺泡上皮细胞损伤修复中的应用
- 目的观察K GFR腺病毒表达载体在LPS致A549细胞损伤模型中转基因表达KGFR的情况及其促使A549细胞对抗LPS损伤的效果,为基因治疗急性肺损伤探索有效途径。方法KGFR腺病毒表达载体感染LPS致伤前后的A549细...
- 刘斌剑王建民陈林宋瑞华赵玲宋维威苟元彬
- 文献传递
- p53对缺血再灌注损伤后肾小管上皮细胞演变的影响被引量：2
- 2007年
- 目的:观察缺血再灌注损伤(ischemia/reperfusioninjury,IRI)后,低龄和高龄p53(+/+)和p53(-/-)鼠肾小管上皮细胞的演变,探讨p53基因对IRI后肾小管上皮细胞演变的影响。方法:分别建立低龄(2月龄)和高龄(12月龄)p53(+/+)和p53(-/-)鼠左肾IRI模型。于IRI后0d、1d、3d、7d、1月、3月、6月,用HE染色观察肾小管组织学变化,免疫组织化学法检测肾小管上皮细胞增殖细胞核抗原(prolifera-tingcellnuclearantigen,PCNA)的表达,组织化学染色观察肾小管上皮细胞衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)的活性,用脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(terminaldeoxynu-cleotidyltransferase-mediateddUTP-biotininsitunick-endlabe-ling,TUNEL)法检测肾小管上皮细胞凋亡。结果:IRI后0d,肾小管以坏死为主,高龄鼠比低龄鼠明显(P<0.05),p53(-/-)鼠比p53(+/+)鼠明显(P<0.05);细胞凋亡在7d时达到高峰,且高龄鼠比低龄鼠明显(P<0.05),p53(+/+)鼠比p53(-/-)鼠明显(P<0.05)。p53(+/+)低龄鼠IRI后1月出现衰老细胞,3月和6月显著增多(P<0.05),对侧肾未见衰老细胞;而p53(-/-)低龄鼠IRI后6月才出现明显的衰老细胞;两种基因型高龄鼠在IRI后0d双肾均见衰老细胞,但p53(+/+)鼠显著多于p53(-/-)鼠(P<0.05),1d后,IRI肾的衰老细胞明显减少(P<0.05),对侧肾无变化。p53(+/+)高龄和低龄鼠细胞增殖无统计学意义(P>0.05),而p53(-/-)低龄和高龄鼠在IRI后3、7d细胞增殖进行性增加,且低龄鼠显著多于高龄鼠、p53(-/-)鼠多于p53(+/+)鼠(P<0.05)。对高龄鼠IRI后1d点细胞衰老和凋亡进行相关分析显示,在p53(+/+)鼠二者显著负相关(r=-0.82,P<0.05),在p53(-/-)鼠,二者无显著相关性(r=0.26,P>0.05)。结论:①IRI可促进正常肾小管上皮细胞衰老的进程;②已经进入衰老状态的肾小管上皮细胞在遭受IRI刺激后,更易走向死亡(坏死和/或凋亡);③p53在IRI所致肾小管上皮细胞演变过程中发挥着重要的调控作用。
- 李开龙杜晓兰宋瑞华赵玲何娅妮张建国陈林
- 关键词：缺血再灌注肾小管上皮细胞P53
- Fgfr3基因374点突变致软骨发育不全小鼠模型的建立与分析被引量：1
- 2004年
- 目的建立模拟人成纤维细胞生长因子3型受体(fibroblastgrowthfactorreceptor3,Fgfr3)374号甘氨酸至精氨酸点突变小鼠模型并进行初步表型分析。方法应用双重PCR法及分子克隆技术构建小鼠Fgfr3-Gly374Arg点突变打靶载体,对胚胎干细胞(embryonicstemcells,ES细胞)进行打靶后,采用G418、Ganciclovir正负双向选择和Southern杂交对打靶ES细胞进行筛选,选发生正确同源重组的ES细胞进行胚泡显微注射,携带Neo基因的Fgfr3-Gly374Arg点突变鼠与EIIa-Cre转基因鼠杂交后,得到只含Fgfr3-Gly374Arg点突变鼠。用PCR法进行了基因型鉴定,并应用骨骼染色、组织学等技术对其表型进行了初步分析。结果Fgfr3-Gly374Arg点突变小鼠体小尾短、头大,前额圆凸,骨骺生长板区明显缩短、结构紊乱,肥大软骨细胞区也有明显减少。同时伴有多数雌性小鼠不孕、子宫、卵巢变小、乳腺发育不良等变化。结论成功地建立了模拟人Fgfr3-Gly374Arg点突变所致软骨发育不全的小鼠模型。
- 王建民杜晓兰李翠玲尹良军陈波孙晶苏楠赵玲宋瑞华宋维威陈林邓初夏
- 关键词：点突变FGFR3软骨发育不全ES细胞打靶载体
- 条件性缺氧诱导因子-1α RNAi 转基因小鼠模型的建立
- 缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)是细胞在缺氧等条件下稳定表达的具有转录活性的蛋白, 通过与多种靶基因调控区的缺氧反应元件(hypoxia response elem...
- 戚华兵宋瑞华杜晓兰赵玲苏楠刘道诚李福兵陈林
- 文献传递
- 角质细胞生长因子受体腺病毒表达载体在脂多糖所致肺泡上皮细胞损伤修复中的应用被引量：3
- 2005年
- 目的观察KGFR腺病毒表达载体在脂多糖(LPS)致A549细胞损伤模型中转基因表达KGFR的情况及其促使A549细胞对抗LPS损伤的效果,为基因治疗急性肺损伤探索有效途径。方法KGFR腺病毒表达载体感染LPS致伤前后的A549细胞,通过形态学观察转基因作用对LPS致伤前后A549细胞的影响,并运用western blot检测KGFR腺病毒表达载体在LPS致伤前后的A549细胞中转基因表达KGFR蛋白情况。结果KGFR腺病毒表达载体感染LPS致伤前后的A549细胞,转基因组对抗LPS致伤作用明显,western blot检测表明KGFR腺病毒表达载体转基因表达KGFR蛋白效果显著(P<0.05)。结论KGFR腺病毒表达载体能够转基因表达KGFR蛋白,并具备转基因治疗急性肺损伤的能力。
- 刘斌剑王建民陈林宋瑞华赵玲宋维威苟元彬
- 关键词：腺病毒载体急性肺损伤脂多糖
- FGFR2条件性敲除载体的构建及中靶ES细胞的筛选与鉴定被引量：2
- 2005年
- 目的 构建成纤维细胞生长因子2型受体(Fibroblastgrowthfactorreceptor 2,FGFR2)条件性敲除载体,并对中 靶ES细胞进行筛选与鉴定,为最终建立FGFR2条件性敲除小鼠模型,研究FGFR2在小鼠骨骼、肺脏等组织、器官发育过程 中的作用打下基础。方法 在分析小鼠FGFR2基因组DNA序列结构的基础上,设计并构建了条件性敲除小鼠FGFR2外 显子7、8的基因打靶载体,采用电穿孔法在ES细胞中进行了打靶重组,G418与Ganciclovir被用于对电转的ES细胞进行正 负筛选,最后对ES细胞克隆进行了Southern与PCR鉴定。结果 将所构建的条件性打靶载体通过电穿孔转染入表达重组 酶(Cre)的AmI细菌,经PCR、酶切和测序鉴定,Cre酶能正确将条件性打靶载体的外显子7、8和选择性标记Neo基因经重 组剔除,电转了基因敲除载体的ES细胞经正负筛选后共挑取克隆83个;经5′端探针Southern杂交鉴定,发现4株阳性克 隆;该4株克隆再经3′端探针Southern杂交鉴定,发现2株阳性克隆;最后经Southern和PCR检测发现1株ES细胞克隆仍 保留外显子7、8两侧的loxP序列。结论 FGFR2条件性基因敲除ES细胞已成功构建。
- 王建民宋瑞华杜晓兰尹良军陈波孙晶苟元彬赵玲陈林
- 关键词：同源重组ES细胞
- 低氧诱导因子-1α条件性敲除载体的构建被引量：1
- 2004年
- 目的 通过建立低氧诱导因子 1α(hypoxiainduciblefactor 1α ,HIF 1α)条件性敲除载体 ,并在体外验证引入的LoxP介导的同源重组等情况 ,为最终建立HIF 1α条件性敲除小鼠模型奠定基础。方法 以含有neo、tk基因的pLoxPneo载体为基本骨架 ,用涵盖 3、4、5、6号外显子的HIF 1α基因组片段 ( 7.6kb)为构建载体的同源DNA片段 ,通过引入LoxP等步骤 ,最终建立旨在条件性敲除HIF 1α第 5号外显子的条件性敲除载体。结果 经酶切 ,测序和在体外细菌中用cre介导的重组等方法证明成功地构建了HIF 1α的条件性敲除载体。结论 成功地构建了HIF 1α的条件性敲除载体 ,为今后进一步获得HIF
- 赵玲宋瑞华孙晶苏楠苟元彬宋维威王建民陈林
- 关键词：低氧诱导因子-1Α同源重组CRE基因
- p21对缺血-再灌注损伤后肾小管上皮细胞演变的影响被引量：3
- 2005年
- 目的探讨p21对缺血再灌注损伤(IRI)后肾小管上皮细胞演变的影响。方法选择低龄(2个月龄)和高龄(12个月龄)p21(+/+)和p21(-/-)鼠,建立左肾IRI模型。于IRI后0、1、3、7d及1、3、6个月光镜下观察肾小管组织学变化,采用免疫组化法检测肾小管上皮细胞增殖细胞核抗原(PCNA)表达,组织化学染色观察肾小管上皮细胞衰老相关β半乳糖苷酶(SAβgal)活力,末端脱氧核糖转移酶介导的生物素化脱氧尿嘧啶缺刻标记技术(TUNEL)检测肾小管上皮细胞凋亡。结果IRI后0d,肾小管以坏死为主,高龄鼠比低龄鼠严重、p21(-/-)鼠比p21(+/+)鼠严重(P均<0.05)。肾小管上皮细胞凋亡在IRI1d后出现,7d达高峰,且高龄鼠比低龄鼠明显、p21(-/-)鼠比p21(+/+)鼠明显(P均<0.05)。低龄鼠IRI后1个月出现SAβgal染色阳性的肾小管上皮细胞,而对侧肾此时未见衰老细胞,3和6个月时衰老的肾小管上皮细胞显著增多,且p21(+/+)鼠比p21(-/-)鼠明显(P<0.05);p21(+/+)高龄鼠IRI后0d双肾即可见大量的SAβgal染色阳性肾小管上皮细胞,且较p21(-/-)鼠显著增多(P<0.05),但1d后,p21(+/+)和p21(-/-)鼠IRI肾衰老细胞均明显减少(P均<0.05),1个月后又呈进行性增加,且p21(+/+)鼠始终比p21(-/-)鼠严重。高龄和低龄p21(+/+)鼠PCNA阳性染色细胞出现的几率差异无显著性(P>0.05),但低龄鼠细胞增殖能力要强于高龄鼠;而p21(-/-)鼠的细胞增殖能力明显强于p21(+/+)鼠,低龄鼠更为显著(P均<0.05)。对高龄鼠IRI后1d细胞衰老和凋亡进行相关分析显示,二者呈显著负相关〔p21(+/+)鼠:r=0.82,P<0.001;p21(-/-)鼠:r=0.76,P<0.001〕。结论1IRI可促进正常肾小管上皮细胞衰老的进程;2已经进入衰老状态的肾小管上皮细胞在遭受IRI刺激后,更易走向死亡〔坏死和(或)凋亡〕;3p21在IRI所致肾小管上皮细胞演变过程中发挥重要的调控作用。
- 李开龙王建民丁涵露赵玲宋瑞华陈林
- 关键词：P21缺血-再灌注损伤肾小管上皮细胞
- 甘草酸18α体对小鼠肾脏缺血再灌注损伤后肾间质NF-κB表达的影响及其机制初探
- 目的:探讨甘草酸18α体对小鼠肾脏缺血再灌注损伤（ischemia／reperfusion injury,IRI） 后肾间质中NF-κB表达的影响以及p53的调控作用。方法:实验动物,成年（2月龄）野生鼠（p53+／+）...
- 李开龙赵玲孙晶宋瑞华何娅妮陈林
- 文献传递
