公共文化服务平台

共 9 条记录，以下是 1-8

全选清除导出

排序方式：

用于筛选蛋白可溶性表达的T载体及其构建方法和应用: 本发明涉及一种蛋白定向进化领域中对水溶性/折叠强的蛋白突变体进行筛选的一种高通量、灵敏度高、方便筛选的T载体及其构建方法和应用，本发明的T载体为在出发载体pMAL-c2x中引入6个组氨酸(His)标签、多克隆位点序列(M...; 范军张宽亮魏玲玲; 文献传递

表达大肠杆菌谷氨酸-1-半醛氨基转移酶对红色荧光报告蛋白尿卟啉原Ⅲ甲基化酶的影响: 2010年; 谷氨酸-1-半醛氨基转移酶(Glutamate-1-semiadhyde aminotransferase,GSAT)是尿卟啉原Ⅲ生物合成上游途径的一个酶,尿卟啉原Ⅲ是红色荧光报告蛋白尿卟啉原Ⅲ甲基化酶(Uroporphyrinogen Ⅲ methyltransferase,UPMT)的底物。为了探明大肠杆菌共表达GSAT对UPMT荧光强度的影响,通过PCR扩增玉米upmt基因,将其插入pETDuet-1质粒中第2个顺反子中,构建的载体命名为pETU,表达UPMT的N端含有组氨酸标签;通过PCR扩增大肠杆菌编码GSAT的hemL基因,定点突变去除hemL基因中NcoⅠ序列,亚克隆至pET-51b质粒,再将获得的hemL基因插入pETU质粒的第一个顺反子中,构建pETeGU载体。表达GSAT的N端含有Strep标签。和单独表达upmt基因相比,表达2个基因后,蛋白印迹分析表明没有明显改变UPMT表达量,光谱扫描分析显示没有改变荧光物质的组成,但是增强了重组细胞的红色荧光物质三甲基咕啉的含量,该物质在354nm有特异吸收。用2mmol/L的GSAT抑制剂3-氨基-2,3二羟基苯甲酸处理后,表达两种酶的菌落荧光消失,表明重组GSAT可能增加内源尿卟啉原Ⅲ水平,从而增强重组UPMT催化产生的红色荧光。; 叶爱华张宽亮陈宗梅荣亮汪苗范军; 关键词：大肠杆菌

一种荧光T载体及其构建方法和应用: 本发明涉及一种荧光T载体以及其的构建方法，还涉及该荧光T载体在基因克隆中的应用，其中荧光T载体为在出发载体pMD18-TSimple Vector中引入增强子序列和编码红色荧光蛋白UPMT的cobA基因序列。该荧光T载体...; 范军张宽亮李静; 文献传递

玉米尿卟啉原Ⅲ脱羧酶同功酶生物信息学分析、基因克隆和原核表达被引量：1: 2010年; 尿卟啉原Ⅲ脱羧酶是生物卟啉类化合物分支合成的关键酶。从GenBank中搜寻到4种玉米尿卟啉原Ⅲ脱羧酶:Les22、UROD1、UROD2和截短UROD,氨基酸序列比对显示N端的同源性较差;玉米les22基因比urod1基因在开放阅读框的上游少3个碱基,导致阅读框移码。植物除玉米外存在高度同源的UROD1和UROD2,具有结构完整性。本文以玉米幼叶总RNA为模板,通过RT-PCR克隆了玉米les22和urod2基因,并对突变位点进行校正,同时通过定点突变获得urod1基因,它们都编码去除叶绿体导肽的尿卟啉原Ⅲ脱羧酶。再分别将les22、urod2和urod1基因插入大肠杆菌的不同表达载体,转化表达菌株BL21(DE3),16℃诱导表达18h,SDS-PAGE分析显示,Les22的N端含有组氨酸标签或SUMO蛋白,重组蛋白表达为包涵体,UROD2的N端含有组氨酸标签或SUMO、TRX、GST或MBP蛋白,未检测到目的蛋白在上清液的特异表达,而UROD1和MBP融合为可溶性表达,表明玉米UROD的N端氨基酸残基可能参与蛋白在大肠杆菌的折叠。这为研究玉米UROD的种类和功能奠定基础。; 汪苗方美姑亓振国张宽亮程备久范军; 关键词：玉米基因克隆原核表达生物信息学分析

含有红色荧光报告基因玉米CobA的T载体和表达载体构建研究: 尿卟啉原Ⅲ甲基化酶（Uroporphyrinogen methyl transferase，UPMT）是维生素B12的分支合成关键酶，也是一种新型荧光蛋白。但是，和绿色荧光蛋白相比，它的应用研究报道较少。本文以玉米UPM...; 张宽亮; 关键词：大肠杆菌; 文献传递

一种植物转化载体及其构建方法和应用: 本发明公开了本发明提供一种植物转化载体及其构建方法和应用，该载体用红色荧光蛋白UPMT和抗性筛选alad基因作为转染植物的报告基因及选择标记。两者功能类似并优于如抗生素和绿色荧光蛋白融合标记在水稻叶绿体转化中既用于筛选，...; 范军李静魏玲玲张宽亮; 文献传递

一种植物转化载体及其构建方法和应用: 本发明公开了本发明提供一种植物转化载体及其构建方法和应用，该载体用红色荧光蛋白UPMT和抗性筛选<I>alad</I>基因作为转染植物的报告基因及选择标记。两者功能类似并优于如抗生素和绿色荧光蛋白融合标记在水稻叶绿体转化...; 范军李静魏玲玲张宽亮

用于筛选蛋白可溶性表达的T载体及其构建方法和应用: 本发明涉及一种蛋白定向进化领域中对水溶性/折叠强的蛋白突变体进行筛选的一种高通量、灵敏度高、方便筛选的T载体及其构建方法和应用，本发明的T载体为在出发载体pMAL-c2x中引入6个组氨酸(His)标签、多克隆位点序列(M...; 范军张宽亮魏玲玲; 文献传递

全选清除导出

共1页<1>

张宽亮