张旭晨
- 作品数：9 被引量：178H指数：6
- 供职机构：中国科学院发育生物学研究所遗传与发育生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划“八五”国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学化学工程更多>>
- 由胎儿成纤维细胞而来的克隆山羊(Capra hircus)被引量：55
- 1999年
- 哺乳动物的克隆是国内外科学家研究的热点问题 .用体外培养的胎儿成纤维细胞作供体细胞不仅可以研究发育生物学中发育与分化的理论问题 ,而且与早期胚胎细胞作供体细胞相比 ,大大增加了供体细胞的数量 .初步实验结果如下 :( 1 )分别用早期胚胎细胞分裂球和体外培养传 6代的山羊胎儿成纤维细胞作供体细胞 ,进行核移植 ,重构卵体内培养 5d后 ,其分裂率前者为 5 5 % ,后者为 77% ;发育率前者为 35 % ,后者为 31 % ,经统计分析 ,无显著差异 .( 2 )得到了由传代培养的山羊胎儿成纤维细胞而来的克隆山羊 ,这是我国首次获得的胎儿体细胞克隆哺乳动物 .为今后进行成年动物的体细胞克隆 ,从而深入研究动物发育过程中的核质关系创造了条件 。
- 王玉阁邹贤刚成国祥成勇陈建泉刘洁张靖溥张旭晨劳为德张锁林徐少甫杜淼
- 关键词：山羊胎儿成纤维细胞转基因动物
- 基因表达系统与转基因动物乳腺反应器被引量：2
- 1999年
- 出于研究、医疗或工业目的，常常需要大量置备各种生物活性蛋白质，为此已经建立了多种基因工程表达系统，如微生物发酵系统、真核细胞培养系统、转基因植物表达系统和转基因动物表达系统等。近几年，利用转基因动物作为生物反应器由乳汁中生产蛋白药物的研究取得了很大进展，有多种动物可被用于转基因。基本过程是将基因构件显微注射到单细胞期受精卵，基因构件以一定几率整合到受体基因组中。通常转基因和其表达模式可忠实地遗传。许多蛋白将以高浓度低成本由转基因家畜的奶中生产。这些转基因动物与传统的动物细胞培养和细菌发酵技术相比尤显高效。乳腺能完成包括二硫桥形成、酰胺化、羧基化和糖基化在内的翻译后修饰，１头转基因羊就是１套发酵罐。据预测，到２０１０年由转基因动物生产的蛋白药物占全部基因工程药物的比率将增长到９５％以上。
- 张旭晨
- 关键词：基因表达系统转基因动物
- 乳腺特异性基因转基因山羊表达特性的研究被引量：3
- 1999年
- 采用胚胎显微注射的方法，将牛乳酪蛋白（αｓｌｃａｓｅｉｎ）基因作为乳腺定位表达调控序列与人乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ／ａｙｗ）基因组成的两个融合构件（λ１０６和λ２０７）导入山羊原核期受精卵。产出的Ｇ０代羊用ＨＢｘ和ｃａｓｅｉｎ８００两个探针进行ＰＣＲ＋Ｓｏｕｔｈｅｒｎ整合检测，分别获得λ１０６和λ２０７构件整合阳性羊１６和２４只。用ＥＬＩＳＡ／ＨＢｓＡｇ试剂盒检测转基因羊乳汁中的重组人乙型肝炎表面抗原（ｒＨＢｓＡｇ），在Ｇ０代转基因羊中，λ１０６乳腺表达率是４７２％（１７／３６）；λ２０７是６８６％（２４／３５）。Ｇ０代转基因母羊与正常公羊交配，所产的４１只Ｇ１代羊中有１３只整合阳性（３１７％），其中６只Ｇ１代整合羊中，乳腺表达率为６６６７％（４／６）。表达阳性羊乳免疫注射６只成年兔，结果在它们的血清中全部检测到ＨＢｓＡｂ（６／６）。试验表明，由αｓｌｃａｓｅｉｎ和ＨＢｓＡｇ／ａｙｗ基因组成的λ１０６和λ２０７两个融合基因构件导入山羊原核期受精卵后均可获得乳腺特异性表达转基因羊，最高表达量达１３０７μｇ／ｌｉｔｅｒ，由此证明通过牛αｓｌ酪蛋白调控序列作为定位基因来指导ＨＢｓＡｇ／ａｙｗ基?
- 成勇成国祥王杏龙穆宗尧陈建泉徐少甫劳为德张靖溥张旭晨魏允影
- 关键词：乙肝表面抗原乳腺转基因山羊基因表达山羊
- 乳腺生物反应器实用化研究—现状与问题被引量：22
- 1996年
- 转基因家畜的乳腺有可能作为生物反应器来生产具有生物活性的多肽药物和具特殊营养意义的蛋白质。一个新兴的转基因动物制药业已开始崛起。用乳汁蛋白质基因的调节元件不仅有可能使转基因的表达只限于乳腺组织，而且有可能使转基因表达产物得到高水平表达和大量生产。各种酪蛋白，以及乳清蛋白和乳球蛋白等基因的调节元件已相继被克隆和投入使用。已经有多种具有生物活性的昂贵的医用蛋白质在乳腺组织中合成并分泌。迄今，转基因动物的研究明确了在乳蛋白基因启动区域上游区的一些乳腺特异和激素诱导转录元件，细胞系和原代培养细胞的转染的研究鉴别了一些组成性和激素诱导的因子。但转基因随机整合造成的“位置效应”所引起表达结果的不确定性，限制了乳腺生物反应器产业化的形成和发展。由于乳汁蛋白质基因的表达都具有典型的时空特异性格式，乳蛋白基因的表达受到了激素和发育调节的转录因子的综合调控。为使乳腺反应器的应用更卓有成效和得心应手，我们尚需对它的发育和激素调控密切相关的生理学和染色体座位具备充分了解。
- 劳为德张旭晨
- 关键词：乳腺生物反应器转基因家畜农业生物工程
- 外源基因在转基因小鼠中遗传和表达的稳定性被引量：19
- 1999年
- 通过显微注射将外源基因构件１０６（酪蛋白基因调控区指导的乙肝病毒表面抗原基因表达构件）导入小鼠受精卵中，用ＰＣＲ-Ｓｏｕｔｈｅｍ方法进行外源基因的整合检测、ＥＬＩＳＡ法进行外源基因的表达检测，对４代转基因小鼠进行了跟踪测定。结果表明：原代转基因小鼠的整合率为５６％（１７／３０），原代雌鼠乳汁中转基因产物的表达率为１００％（８／８）；传代跟踪考察证明，外源基因在转基因小鼠中可以稳定遗传并在后代中表达目标产物；但后代中外源基因的整合率不符合“单一位点随机整合”的假说，家系分析推测外源基因在受精卵中的整合可能存在多位点整合机制；后代中外源基因的表达量有升高和降低的趋势，这可能与其位置效应、拷贝数和遗传信息物质跨越代界时ｉｍｐｒｉｎｔｉｎｇ图式的改变相关。
- 张靖溥劳为德张旭晨魏影允刘晔
- 关键词：转基因动物
- 牛αs1酪蛋白/HBsAg基因在山羊乳腺中暂态表达被引量：6
- 1998年
- 采用显微外科的方法将牛αｓ１酪蛋白基因和人乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）基因组成的融合基因（λ２０７）与介导蛋白一起导入产前、产后山羊乳腺，或经人工诱导泌乳处理的成年母山羊乳腺，产生乳腺转基因山羊．ＰＣＲ基因扩增检测２只乳腺转基因后的小母羊，在基因导入后的６ｄ和２９ｄ分别在乳腺等组织中存在外源基因．经酶联免疫ＥＬＩＳＡ检测，１２只不同生理状态下乳腺转基因母山羊在其泌乳的第１１９天的乳汁中存在表达产物———重组人乙型肝炎表面抗原（ｒＨＢｓＡｇ），表达率为１００％；在第１２天的乳汁中１２只羊平均表达量为３．８０８μｇ·Ｌ－１，与同一基因构件经胚胎显微注射所产生的转基因山羊乳汁中的表达水平（３．５１７μｇ·Ｌ－１）基本一致．
- 成勇徐少甫劳为德成国祥劳为德成国祥张靖溥张旭晨魏允影
- 关键词：山羊乳腺乙型肝炎抗原基因表达
- 细鳞鱼精巢超微结构和精子发生被引量：60
- 1992年
- 细鳞鱼Brachymystax lenok(Pallas)精巢为叶型;支持细胞(Sertoli cell)和Leydig细胞具有典型内分泌细胞的一些结构特征;A型精原细胞的细胞器是区域性分布,精原细胞线粒体的发育与拟染色质 (chromatoid bodies)有关;生精细胞(spermatogenic cell)核膜孔由均匀排布最终演变为区域性聚集。重复注射绒毛膜促性腺激素(hCG)可促进雄鱼性成熟;精子质量受到多种因素的影响。
- 张旭晨王所安
- 关键词：细鳞鱼精子发生超微结构
- 小鼠乳清酸蛋白启动区指导人促红细胞生成素在转基因小鼠乳腺的表达被引量：15
- 1999年
- 以小鼠乳清酸蛋白基因 (mWAP)调控区与人促红细胞生成素基因 (hEPO)构建融合基因 ,经动物个体暂态表达方法确证hEPO可在乳腺特异表达后 ,用显微注射方法将融合基因导入小鼠受精卵 ,再将受精卵移植到假孕小鼠 ,获得 86只G0 代小鼠 ,经PCR Southernblot及Southernblot证实 ,有 5 8只整合阳性小鼠 ,整合率为 6 7% ,ELISAkit,dotELISA等方法检测小鼠39只 ,有 1 6只表达阳性 ,乳汁中人hEPO的表达量高于 1 5 μg/mL .
- 张旭晨成国祥陈建泉成勇魏影允姚乌兰徐少甫劳为德
- 关键词：促红细胞生成素乳腺启动区
