张朝霞
- 作品数：45 被引量：154H指数：9
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划引进国际先进农业科技计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 猪圆环病毒1型血清抗体IPMA检测方法的建立及其应用
- 本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)用于猪圆环病毒1型(PCV1)血清抗体的检测。对IPMA抗原反应板的制备、被检血清稀释倍数、酶标抗体及底物显色液等进行了系统试验。用IPMA法对已知PCV1和PCV2...
- 黄立平刘长明危艳武张朝霞陆月华
- 关键词：猪圆环病毒1型抗体检测
- 文献传递
- 猪圆环病毒2型灭活疫苗(LG株)的研制与应用
- 猪圆环病毒2型(PCV2)感染引起的以患猪全身性淋巴结肿大为特征的多系统功能衰竭性疾病,临床上表现有断奶仔猪多系统衰竭综合征、猪皮炎与肾炎综合征、猪呼吸道疾病综合征、母猪繁殖障碍、坏死性淋巴结炎、肉芽肿性肠炎和渗出性表皮...
- 刘长明危艳武陆月华黄立平吴洪丽张朝霞温士刚姜凤娟
- 文献传递
- 用荧光定量RT-PCR法对高致病性PRRSV变异株感染猪体内分布规律的研究
- 根据GenBank发表的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株Nsp2基因序列设计一对特异引物,以重组质粒作为阳性标准品,采用SYBR-Green Ⅰ嵌合荧光染料建立了一种荧光定量RT-PCR方法用于检测该病...
- 危艳武刘长明张朝霞黄立平
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒变异毒株RT-PCR法
- 文献传递
- 非洲猪瘟病毒p54蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位鉴定
- 2024年
- 【目的】获得可溶性非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)p54蛋白和抗p54蛋白的单克隆抗体(monoclonal antibodies, mAb),并分析其识别的线性抗原表位,为p54蛋白结构和功能的研究及血清学诊断试剂的研发奠定基础。【方法】构建了重组原核表达质粒pET-21a-E183L,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,表达并利用Ni2+柱和分子筛纯化得到p54重组蛋白。以该蛋白为抗原免疫5周龄SPF级BALB/c小鼠,每两周免疫一次,共免疫3次,首免时将p54蛋白与弗氏完全佐剂混匀乳化(150μg/只),二免、三免使用弗氏不完全佐剂。三免7 d后对小鼠进行尾部采血,使用ELISA方法测定小鼠血清抗体效价,选取效价高的小鼠进行加强免疫。3 d后取小鼠脾细胞与SP2/0细胞进行融合,利用重组p54蛋白作为包被抗原,间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞,有限稀释法进行克隆纯化,直至筛出能够稳定分泌抗体的mAb细胞株,并制备腹水。以pCAGGS-Flag-E183L质粒转染的HEK293T细胞和ASFV Pig/HLJ/18株感染的猪肺泡巨噬细胞(PAMs)为抗原,以筛选得到的mAb为一抗,进行Western blot鉴定和间接免疫荧光试验(IFA)。使用单抗亚类鉴定试剂盒检测该mAb重链和轻链类型。随后,将p54蛋白逐步截短并与GST标签融合表达后进行Western blot检测,鉴定该mAb识别的抗原表位。【结果】将构建的原核表达质粒pET-21a-E183L(54-183aa)转化至BL21(DE3)感受态细胞中,使用IPTG进行诱导后,p54重组蛋白大部分以可溶的形式在上清中表达,分子量约为17 kDa。以纯化得到p54重组蛋白免疫小鼠,三免后7 d的血清效价为1:409 600,可进行细胞融合,经四次筛选和亚克隆后,获得能够稳定分泌p54蛋白mAb的细胞株,命名为5B11,成功制备腹水并纯化。Western blot和IFA试验结果显示,制备的mAb能够特异性识别HEK293T细胞中表达及ASFV感染PAMs中的p54蛋白。mAb亚类鉴定结果显示重链类型为IgG1型,轻链类型�
- 冯春莹张朝霞刘云飞黄丽翁长江
- 关键词：非洲猪瘟病毒单克隆抗体抗原表位
- GABARAPL2在IFN-γ抑制弓形虫生长过程中的功能研究
- 干扰素-γ(IFN-γ)诱导的先天性免疫应答在抑制弓形虫感染中起着重要的作用。IFN-γ介导的小鼠体内弓形虫的清除需要免疫相关GTPases(IRGs)和鸟苷酸结合蛋白(GBPs)以及自噬蛋白等的参与。然而,在IFN-γ...
- 张朝霞
- 关键词：弓形虫干扰素-ΓHELA细胞
- 猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒的研制及应用
- 利用纯化的重组杆状病毒表达猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白作为检测抗原,建立一种间接ELISA方法用于血清抗体检测.昆虫细胞株(Sf-21)接种重组杆状病毒,对蛋白表达参数及纯化工艺进行了优化。制备了5批重组蛋白抗原...
- 张朝霞刘长明危艳武袁婧黄立平
- 关键词：猪圆环病毒2型重组蛋白间接ELISA抗体检测试剂盒
- 文献传递
- 猪圆环病毒1型抗体IPMA检测方法的建立及应用被引量：14
- 2008年
- 建立了一种用于检测猪圆环病毒1型(PCV1)血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)方法。对该方法的反应条件、特异性、敏感性及重复性等进行了系统试验,并与用昆虫杆状病毒表达的PCV1-Cap重组蛋白抗原建立的间接ELISA的检测结果进行了比较。结果显示,用IPMA法对已知PCV1和猪圆环病毒2型(PCV2)参考阳性血清进行检测,血清稀释度≥1∶100即可消除2种病毒间的低水平交叉反应,与其他几种猪病毒参考阳性血清无交叉反应;与用昆虫杆状病毒表达的PCV1-Cap重组蛋白抗原建立的间接ELISA的检测符合率为88.9%。用该方法对黑龙江省、吉林省、河北省、上海市、辽宁省等地猪场送检的257份血清样品进行检测,PCV1和PCV2血清抗体阳性检出率分别为19.1%和80.5%,PCV1抗体阳性猪中有95.9%为PCV2阳性,表明我国猪群已存在PCV1感染,在临床上PCV1与PCV2多以混合感染形式存在。建立的PCV1-IPMA方法具有操作简便、特异和敏感等特点,不失为PCV1流行病学调查及血清抗体检测的有效技术手段。
- 黄立平刘长明危艳武张朝霞陆月华
- 关键词：猪圆环病毒1型抗体检测
- 猪圆环病毒2型灭活疫苗(LG株)的研制与应用被引量：10
- 2010年
- 猪圆环病毒2型（PCV2）感染引起的以患猪全身性淋巴结肿大为特征的多系统功能衰竭性疾病,临床上表现有断奶仔猪多系统衰竭综合征、猪皮炎与肾炎综合征、猪呼吸道疾病综合征、母猪繁殖障碍、坏死性淋巴结炎、肉芽肿性肠炎和渗出性表皮炎等症状,统称为猪圆环病毒病。
- 刘长明危艳武陆月华黄立平吴洪丽张朝霞温士刚姜凤娟
- 关键词：断奶仔猪多系统衰竭综合征灭活疫苗猪呼吸道疾病综合征淋巴结肿大母猪繁殖障碍猪圆环病毒病
- 猪圆环病毒1型感染性克隆的构建与病毒拯救
- 用PCR法扩增猪圆环病毒1型(PCV1)全长基因组,将2个基因组顺式连接插入到pUC19质粒载体中构建感染性分子克隆。通过引物设计替换碱基,在病毒基因组内插入SalⅠ酶切位点作为分子靶标,拯救出带有分子标记的克隆病毒,命...
- 刘长明危艳武陆月华张朝霞袁婧黄立平
- 关键词：猪圆环病毒1型感染性克隆病毒拯救
- 文献传递
- 实时定量PCR对猪圆环病毒2型感染猪体内病毒分布规律的研究被引量：12
- 2008年
- 根据发表的猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因序列设计了一对特异引物,并以克隆重组质粒作为阳性标准品,采用SYBR-Green I嵌合荧光染料建立了一种用于检测PCV2的实时定量PCR方法。该方法在107～101范围内具有良好的线性关系,相关系数为R2=0.997,扩增效率为E=0.920;对质粒标准品检测下限值为8.2拷贝/μL,检测变异系数低于2.0%。该方法与常规PCR及过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)比较,其敏感性提高103倍以上。采用该法对PCV2人工感染猪的心、肝、脾、肺、肾、腹股沟淋巴结等组织中病毒核酸载量检测结果表明,在多种脏器中均可检测到病毒,其中腹股沟淋巴结、扁桃体和脾脏中病毒含量较高(为3.4×109拷贝/g～1.7×1010拷贝/g),这表明病毒主要在免疫器官增殖,导致淋巴细胞耗损。对来自国内不同地区的28份临床发病猪病料进行病毒DNA定量检测,有半数以上病料的病毒载量达到109-10拷贝/g。实验表明,实时定量PCR可用于PCV2核酸定量检测,为该病毒体内外定量检测提供了一种技术手段。
- 危艳武刘长明袁婧黄立平张朝霞
- 关键词：猪圆环病毒2型实时定量PCR
