张林雅
- 作品数：10 被引量：80H指数：6
- 供职机构：中国计量学院生命科学学院浙江省生物计量及检验检疫技术重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省自然科学基金浙江省重点科技计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学理学更多>>
- 桔小实蝇气味结合蛋白BdorOBP2的cDNA克隆、组织表达及配基结合特性被引量：19
- 2013年
- 为了研究桔小实蝇Bactrocera dorsalis气味结合蛋白(odorant-binding proteins,OBPs)参与其嗅觉识别过程中的功能及其与植物气味的结合特性,本研究克隆了桔小实蝇的一个气味结合蛋白基因,命名为BdorOBP2(GenBank登录号为KC773766),并对该基因进行了原核表达。BdorOBP2开放阅读框长447bp,编码148个氨基酸,具有典型的6个半胱氨酸位点。定量PCR结果显示,桔小实蝇BdorOBP2在不同组织中均有表达,其中头部中的表达量最高,翅中表达量最低(为头部表达量的63%±6%)。构建了BdorOBP2原核表达载体,诱导并获得了重组BdorOBP2并进行了亲和层析纯化。最后以N-苯基-1-萘胺(N-phenyl-1-naphthylamine,1-NPN)为荧光探针,利用荧光竞争结合实验测定了重组BdorOBP2与7种主要寄主水果气味物质的结合能力,发现其对多数酯类和醛类化合物亲合力较强,亲合力最强的气味物质为反-2-己烯醛和β-紫罗兰酮,结合常数KD分别为9.96和15.37μmol/L。本研究结果可为高效地开发和设计桔小实蝇的嗅觉引诱剂配方提供一定的理论依据和参考。
- 陈玲李红亮周宇翔赵磊张林雅倪翠侠商晗武
- 关键词：桔小实蝇气味结合蛋白组织表达谱原核表达
- 中华蜜蜂化学感受蛋白AcerCSP3的配基结合功能分析被引量：19
- 2011年
- 为研究中华蜜蜂Apis cerana cerana化学感受蛋白AcerCSP3在化学感受系统中的生理功能,本实验通过对AcerCSP3进行原核表达、分离纯化后,利用荧光法研究了体外重组AcerCSP3与1-NPN以及候选化学配基的结合特征。Scatchard方程显示AcerCSP3与1-NPN的解离常数KD为8.29μmol/L,结合位点数约等于1。在候选配基竞争1-NPN与AcerCSP3结合的实验中,5种配基均能在200μmol/L浓度下使1-NPN的相对荧光强度下降至50%以下,其中β-紫罗兰酮甚至能使1-NPN的相对荧光强度下降至10%左右,表明候选配基均与AcerCSP3有较强的结合能力,而3,4-二甲基苯甲醛与中蜂AcerCSP3的结合能力最强,KD达到18.77μmol/L。本研究所用化学配基均为植物花与叶片的挥发性的次生代谢产物,表明AcerCSP3可能作为中蜂化学感受系统的一部分,在其搜寻某些植物花粉蜜源时作为气味分子运载体发挥一定的作用。
- 李红亮张林雅倪翠侠商晗武
- 关键词：中华蜜蜂化学感受蛋白原核表达纯化
- 基于荧光光谱法的中华蜜蜂化学感受蛋白与化学配基的相互作用
- 本实验通过对中华蜜蜂化学感受蛋白AcerCSP3进行原核表达、诱导条件优化后,分离纯化得到体外重组的AcerCSP3蛋白,并利用荧光法研究了AcerCSP3与N-苯基-1-萘胺(N-Phenyl-1-naphthylam...
- 李红亮张林雅
- 关键词：中华蜜蜂荧光光谱法
- 番茄红素与牛血清白蛋白的相互作用被引量：3
- 2012年
- 采用荧光光谱法研究了番茄红素(Lycopene)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用关系。研究表明,番茄红素能使BSA在340nm(λem)处产生荧光猝灭,猝灭机理为静态猝灭。pH=7.4,温度为293K时,猝灭时表观结合常数KA为5.33×104L.mol-1,结合位点数n为0.6461,同时荧光猝灭最大速率常数Kq=2.76×1012L.mol-1.s-1。二者呈自发结合且主要作用力为氢键和范德华力,结合距离r与能量转移效率E分别为5.6nm和0.098,偏酸性或碱性的条件使番茄红素与BSA的结合常数增加。
- 白梅竹李红亮张林雅
- 关键词：番茄红素牛血清白蛋白荧光光谱法
- 荧光光谱法研究中华蜜蜂化学感受蛋白与特异配基的相互作用被引量：1
- 2011年
- 采用荧光光谱法研究了中华蜜蜂化学感受蛋白3(CSP3)与其特异性配基N-苯基-1-萘胺(N-phenyl-1-naphthylamine,1-NPN)的相互作用.结果表明,1-NPN能使CSP3在λem=328 nm处发生荧光猝灭,且猝灭机理为静态猝灭.另外,猝灭过程的ΔH0>0,ΔS0>0,表明二者间的主要作用力为疏水相互作用.依据F rster非辐射能量转移机制得到二者的结合距离为9.3 nm,能量转移效率E=0.054.采用同步荧光光谱和圆二色光谱考察了1-NPN对CSP3构象的影响,CSP3的荧光主要来源于色氨酸残基,且最大发射波长略有红移,表明结合位点微环境的极性增加,且CSP3的α-螺旋比例相应减少,从而使CSP3构象发生变化.
- 李红亮张林雅朱丽云倪翠侠商晗武
- 关键词：中华蜜蜂化学感受蛋白相互作用荧光光谱
- 中华蜜蜂性信息素结合蛋白ASP1的原核表达及配基结合特性分析被引量：10
- 2013年
- 【目的】研究中华蜜蜂Apis cerana cerana信息素结合蛋白ASP1与蜜蜂信息素及某些植物挥发物分子的结合功能。【方法】构建中蜂ASP1的原核表达载体,对其进行重组蛋白的诱导表达和分离纯化,并得到具有生化活性的中蜂ASP1重组蛋白,最后以1-NPN作为荧光报告探针,通过荧光竞争结合实验研究中蜂重组ASP1蛋白与蜜蜂信息素及其他气味分子的结合功能。【结果】在22种潜在信息气味物质中,有7种与中蜂ASP1有较强的结合能力,能将1-NPN的相对荧光强度降至50%以下。其中发现蜂王信息素两种成分对-羟基苯甲酸甲酯和香草醇的竞争能力最强,可分别引起1-NPN相对荧光值下降99.31%和95.50%,解离常数K D分别为13.39和98.44μmol/L;而与除蜂王信息素外的其他信息素如幼虫信息素和工蜂信息素等分子均不结合。此外中蜂ASP1对于水杨酸甲酯、苯乙醛、3,4-二甲基苯甲醛4-烯丙基藜芦醚和β-紫罗兰酮等5种植物挥发物质能产生强度不一的结合。【结论】中蜂信息素结合蛋白ASP1对蜂王信息素具有非常强的特异性,同时也能结合某些植物挥发性气味分子,暗示中蜂ASP1是一种以蜂王信息素识别为主要功能、植物挥发物识别为次要功能的多功能信息素结合蛋白。
- 翁琛张林雅赵磊付余霞罗晨李红亮
- 关键词：中华蜜蜂信息素结合蛋白原核表达分离纯化配基
- 中华蜜蜂Orco嗅觉受体基因的克隆、表达及亚细胞定位被引量：12
- 2012年
- 【目的】克隆鉴定中华蜜蜂Apis cerana cerana的Orco嗅觉受体基因,并对其在工蜂触角上进行免疫荧光定位。【方法】利用RT-PCR技术克隆中华蜜蜂Orco基因,并对其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析,使用Real-time PCR技术鉴定其在中华蜜蜂不同发育时期及不同组织的表达谱;利用免疫荧光定位技术在中华蜜蜂工蜂触角中对Orco进行亚细胞定位。【结果】获得中华蜜蜂Orco基因的全长cDNA序列,命名为AcerOrco(GenBank登录号:JF968610.1),其全长为1434bp,编码477个氨基酸,预测其含7个跨膜结构以及4个位于细胞膜外的亲水区。表达谱分析显示,AcerOrco在卵、幼虫和蛹期呈低丰度表达,1日龄及内勤蜂时期主要在触角和足中表达,且在1日龄的触角中表达量最高;采集蜂时期的触角、头(去除触角)、胸、腹和翅中均有较高丰度的表达。亚细胞定位结果显示,AcerOrco不仅在采集蜂触角鞭节上大量表达(尤其在触角鞭节第1亚节中表达量较高),而且常成对出现,并且发现AcerOrco可能主要在触角毛形感器的外部神经元(outer dendrite,OD)以及板形感器的树突神经元中表达。【结论】成功克隆了AcerOrco基因全长,获得了其表达谱,且将其定位于工蜂采集蜂的触角感器神经元上,最终推测AcerOrco与中蜂嗅觉发育和触角感器功能密切相关。
- 张林雅谢冰花倪翠侠赵磊李红亮商晗武
- 关键词：中华蜜蜂气味受体表达谱分析触角感器免疫荧光定位
- 茶尺蠖普通气味结合蛋白EoblGOBP2与茶树挥发物的结合功能研究被引量：10
- 2014年
- 茶尺蠖是茶园中一种重要的鳞翅目害虫,主要以幼虫取食危害茶树叶片,给茶叶生产带来了严重威胁。茶尺蠖在寻找配偶、产卵地以及觅食活动中其嗅觉系统发挥了非常重要的作用。本研究以茶尺蠖Ectropis obliqua Prout嗅觉系统中的一个普通气味结合蛋白——EoblGOBP2为研究对象,在克隆得到的EoblGOBP2基因基础上,通过对EoblGOBP2进行原核表达、分离纯化后,利用1-NPN的荧光竞争结合法研究了体外重组EoblGOBP2与茶树挥发物的结合生理功能。Scatchard方程显示EoblGOBP2与1-NPN的解离常数KD为2.310μmol·L-1。在荧光竞争结合实验中,7种待测配基均能使1-NPN的相对荧光强度降低到50%以下,表明与EoblGOBP2均有较强的结合能力,而其中邻苯二甲酸二丁酯结合能力最强,KD值达到4.353μmol·L-1。本研究7种配基均为茶树叶片挥发物,表明EoblGOBP2在茶尺蠖嗅觉系统对茶树挥发物的信息识别结合功能中发挥了重要作用。
- 赵磊崔宏春张林雅陈玲余继忠李红亮
- 关键词：茶尺蠖原核表达纯化
- 中华蜜蜂普通气味结合蛋白ASP2的气味结合功能模式分析被引量：23
- 2013年
- 【目的】研究中华蜜蜂(Apis cerana cerana)体外重组普通气味结合蛋白AcerASP2与不同气味信息的结合功能和模式。【方法】通过诱导条件的优化和纯化,在获得的重组AcerASP2蛋白基础上,研究竞争性荧光探针1-NPN及不同结构气味信息与蛋白的相互作用关系,并通过同源建模和分子对接解析蛋白与气味信息的结合模式和机理。【结果】通过条件摸索获得了可溶性表达的重组中蜂ASP2蛋白,荧光光谱分析1-NPN与AcerASP2的解离常数K1-NPN为7.38μmol.L-1,结合位点数n为1.0321。在7种气味信息中,4-烯丙基藜芦醚亲和力最强,其IC50和解离常数KD分别达到7.09和3.46μmol.L-1。分子对接显示AcerASP2具有1个呈狭长的口袋状的疏水性结合内腔,4-烯丙基藜芦醚绝大部分位于该预测疏水性内腔中,且与Lys74产生2个氢键。【结论】中华蜜蜂AcerASP2由于特殊的空间结构而具有较强的气味信息结合能力,且易通过与疏水内腔中的赖氨酸残基产生氢键而促进结合。
- 李红亮张林雅庄树林倪翠侠韩宝瑜商晗武
- 关键词：中华蜜蜂普通气味结合蛋白分子对接
- 中华蜜蜂化学感受蛋白基因家族克隆及表达特征分析被引量：6
- 2013年
- 【目的】完成中华蜜蜂(Apis cerana cerana)化学感受蛋白(chemosensory proteins,CSPs)基因家族的序列及表达谱鉴定,解析中蜂整个CSPs家族的表达特征与分布规律,为中蜂CSPs的生物学功能研究提供参考。【方法】利用RT-PCR技术扩增,克隆获得中蜂CSPs基因家族全部6条基因序列的开放阅读框(ORF)全长,并利用real-time PCR技术对中蜂所有的CSPs序列在中蜂工蜂不同发育历期及不同器官表达特征进行研究。【结果】新克隆4条基因(Ac-CSP2、Ac-CSP4、Ac-CSP5和Ac-CSP6)的开放阅读框分别为354、387、315和378 bp,分别编码117、128、104和125个氨基酸残基,预测蛋白质分子量分别为13.01、14.61、12.46和14.63 kD,等电点分别为8.86、4.53、9.60和8.71,且均具有4个保守的半胱氨酸残基,均符合昆虫CSPs的一般生化特征。中蜂与意蜂CSPs同源基因家族间具有高达95%—99%的相似性。CSPs在中蜂不同发育时期及器官的表达特征结果显示,Ac-CSP1、2、3、4在卵、幼虫和蛹期几乎不表达,其中Ac-CSP1、2、4在触角中表达量最高,而Ac-CSP3在翅中表达量最高;Ac-CSP5在中蜂各个发育历期的表达量几乎相同;Ac-CSP6蛹期有较高表达,其余时期不表达。【结论】中蜂CSPs基因家族所有6个基因的氨基酸序列与意大利蜜蜂有较高的相似性,但二者各基因的表达谱在整体相似的情况下局部又存在着某些差异,为进一步研究该家族蛋白的生理功能机制奠定了良好基础。
- 倪翠侠张林雅李红亮商晗武
- 关键词：中华蜜蜂化学感受蛋白克隆DNA序列分析表达谱
