张颖慧
- 作品数:7 被引量:115H指数:3
- 供职机构:南开大学更多>>
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- 相关领域:生物学医药卫生轻工技术与工程化学工程更多>>
- 利用长引物嵌套式反向PCR方法克隆雅致枝霉Δ6-脂肪酸脱氢酶基因上游序列被引量:12
- 2006年
- 用限制酶EcoRⅠ、KpnⅠ分别对雅致枝霉As3.2806基因组DNA进行消化,而后在低浓度条件下利用T4DNA连接酶使DNA自身环化。根据已知基因序列,设计一对长度为35nt的长反向引物和两对较短的引物,以基因组连接产物为模板,通过三轮嵌套式PCR反应,获得一长度约为4kb的扩增片段。经序列测定表明得到了Δ6-脂肪酸脱氢酶基因上游序列约为1.3kb,初步序列分析显示该序列为一潜在的启动子序列。
- 王德培孙伟李明春魏东盛张颖慧邢来君
- 雅致枝霉△<Sup>6</Sup>-脂肪酸脱氢酶启动子序列及其应用
- 本发明涉及一种从雅致枝霉中分离到的Δ<Sup>6</Sup>-脂肪酸脱氢酶启动子序列及其应用。本发明包括具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。本发明包括利用该启动子序列来改变微生物细胞蛋白质成分的微生物基因工程方法...
- 李明春王德培魏东盛邢来君张颖慧孙伟
- 文献传递
- 雅致枝霉△<Sup>6</Sup>-脂肪酸脱氢酶启动子序列及其应用
- 本发明涉及一种从雅致枝霉中分离到的Δ<Sup>6</Sup>-脂肪酸脱氢酶启动子序列及其应用。本发明包括具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。本发明包括利用该启动子序列来改变微生物细胞蛋白质成分的微生物基因工程方法...
- 李明春王德培魏东盛邢来君张颖慧孙伟
- 文献传递
- 农杆菌介导的深黄伞形霉遗传转化体系的构建
- 多不饱和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acid, PUFAs)是细胞结构和功能的重要组成部分,其中γ-亚麻酸(γ-Linolenic acid, GLA)在预防糖尿病,皮肤病等疾病中有重要作用。深黄...
- 张颖慧
- 关键词:农杆菌介导突变株Γ-亚麻酸
- 文献传递
- 雅致枝霉Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因的克隆及在酿酒酵母中的表达被引量:9
- 2006年
- 根据真菌Δ6-脂肪酸脱氢酶基因保守的组氨酸Ⅱ区和Ⅲ区附近保守序列设计兼并引物进行RT-PCR,得到雅致枝霉(Thamnidium elegans)As3.2806Δ6-脂肪酸脱氢酶基因459bp部分cDNA序列,然后通过快速扩增cDNA末端技术(RACE)向两端延伸得到1504bp的Δ6-脂肪酸脱氢酶基因全长cDNA序列。序列分析表明有一个1377bp、编码459个氨基酸的开放阅读框TED6。推测的氨基酸序列与已知其他真菌的Δ6-脂肪酸脱氢酶基因的氨基酸序列比对,具有3个组氨酸保守区、2个疏水区及N末端细胞色素b5融合区。将此编码区序列亚克隆到酿酒酵母缺陷型菌株INVSc1的表达载体pYES2.0中,构建表达载体pYTED6,并在酿酒酵母INVSc1中异源表达。通过气相色谱(GC)和气相色谱/质谱(GC-MS)分析表明,该序列在酿酒酵母中获得表达,产生γ-亚麻酸(GLA)的含量占酵母总脂肪酸的7.5%。证明此序列编码的蛋白能将外加的亚油酸转化为γ-亚麻酸,是一个新的有功能的Δ6-脂肪酸脱氢酶基因(GenBank,AY941161)。
- 王德培李明春魏东盛张颖慧邢来君孙伟
- 关键词:Γ-亚麻酸酿酒酵母
- 甘油氧化酶发酵条件及酶学性质的研究
- 2004年
- 日本曲霉 (AspergillusjaponicusAj113)发酵生产甘油氧化酶 (GlycerolOxidaseEC 1 1 3 - )的最适产酶条件 :初始pH 6 0- 6 5 ,温度 2 9± 1℃ ,培养时间 36h ,5 0 0ml三角瓶发酵液的装量为 10 0ml;酶的最适作用pH为 5 0 ,该酶在pH9 5 ,温度 30℃以下时稳定性较好 ;0 0 5mol L的硼砂 -碳酸钠缓冲液 (pH9 5 )对酶有较好的保存效果 ,Zn2 + 、Cu2 + 、Fe3+ 、Ca2 + 离子对酶有激活作用 ,Hg2
- 李明春任勇张琦张颖慧邢来君
- 关键词:酶学性质
- 一种改进的丝状真菌DNA提取方法被引量:94
- 2008年
- 以丝状真菌雅致枝霉(Thamnidium elegans)和深黄伞形霉(Umbelopsis isabellina)为材料,使用优化的CTAB法提取基因组DNA。改进后的方法使用液氮冻融以及玻璃珠振荡的方法代替了传统的液氮研磨,所需菌体量少,而得到的基因组DNA比用传统的CTAB法得到的基因组DNA产率高、纯度好、且步骤简单,适用于一次微量提取多个样品的基因组DNA。这种方法得到的基因组DNA可用于大部分分子生物学基本实验如PCR和DNA的酶切等。
- 张颖慧魏东盛邢来君李明春
- 关键词:DNA提取CTAB玻璃珠